《微生物学实验》教学讲义
《微生物学实验》教学讲义
实验须知普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物理论。同时，通过实验；培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成事实求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神：树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项：1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验目自的、原理和方法，做到心中有数，思路清晰。2.认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。4，实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇到盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告知道教师，及时处理，切勿隐脑。5.实验过程中，切勿使用乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，在用湿布或沙土掩盖灭火。必要时使用灭火机。6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。7.每次实验完毕后，必须把所有的仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，可用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖1.5h后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。8.每次实验需进行培养的材料，应标明自已的组别及处理方法，放于教师制定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。9.每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，认真回答思考题，并及时汇交教师批阅。10.离开实验室前将手洗净，注意关闭火、煤气、门窗、灯等
实验须知 普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物 学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物理论。同时，通过实验；培养学生观察、思 考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成事实求是、严肃认真的科学态度，以及敢 于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 为了上好微生物学实验课，并保证安全，特提出如下注意事项： 1. 每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验目的、原理和方法，做到心 中有数，思路清晰。 2. 认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记 下每次观察的现象和结果，以便分析。 3. 实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 4. 实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇到盛菌试管或瓶不慎打 破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告知道教师，及时处理， 切勿隐瞒。 5. 实验过程中，切勿使用乙醇、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关 掉火源，在用湿布或沙土掩盖灭火。必要时使用灭火机。 6. 使用显微镜或其他贵重仪器时，要细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力 求节约，用毕后仍放回原处。 7. 每次实验完毕后，必须把所有的仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如 有菌液污染桌面或其他地方时，可用 3%来苏尔液或 5%石炭酸液覆盖 1.5h 后擦去， 如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（如吸管、玻璃刮棒等）在洗 涤前须浸泡在 3%来苏尔液中进行消毒。 8. 每次实验需进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教师制定的地点 进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。 9. 每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，认真 回答思考题，并及时汇交教师批阅。 10. 离开实验室前将手洗净，注意关闭火、煤气、门窗、灯等
目录实验一细菌的简单染色9.12实验二细菌的革兰氏染色实验三细菌的特殊染色.14实验四.17酵母菌的形态观察实验五霉菌的形态观察..19.22实验六微生物大小的测定实验七.25培养基的制备实验八..31干热灭菌实验九.33高压蒸汽灭菌实验十紫外线灭菌...36实验十一..38微孔滤膜过滤除菌实验十二微生物接种技术..40实验十三微生物的分离与纯化.47实验十四微生物的培养特征.51..53实验十五厌氧微生物的培养实验十六？微生物血球计数板直接计数法.58实验十七微生物的平板菌落计数法..62...65实验十八，细菌生长曲线的测定..68实验十九土壤中放线菌的筛选及形态观察..72附录1实验室意外事故的处理..73附录2实验器血的清洗与包扎附录3实验用培养基的配制...75...79附录4酸碱指示剂的配制（按笔画顺序排列）.80附录5实验用染色液及试剂的配制
目录 实验一 细菌的简单染色 .9 实验二 细菌的革兰氏染色 .12 实验三 细菌的特殊染色 .14 实验四 酵母菌的形态观察 .17 实验五 霉菌的形态观察 .19 实验六 微生物大小的测定 .22 实验七 培养基的制备 .25 实验八 干热灭菌 .31 实验九 高压蒸汽灭菌 .33 实验十 紫外线灭菌 .36 实验十一 微孔滤膜过滤除菌 .38 实验十二 微生物接种技术 .40 实验十三 微生物的分离与纯化.47 实验十四 微生物的培养特征 .51 实验十五 厌氧微生物的培养 .53 实验十六 微生物血球计数板直接计数法.58 实验十七 微生物的平板菌落计数法.62 实验十八 细菌生长曲线的测定.65 实验十九 土壤中放线菌的筛选及形态观察.68 附录 1 实验室意外事故的处理 .72 附录 2 实验器皿的清洗与包扎 .73 附录 3 实验用培养基的配制 .75 附录 4 酸碱指示剂的配制(按笔画顺序排列) .79 附录 5 实验用染色液及试剂的配制.80
I微生物的染色与形态结构的观察微生物由于个体微小，需借助普通光学显微镜、相差显微镜等设备来进行观察，其中用相差显微镜可以直接观察微生物的形态特征，但其应用有局限性；用电子显微镜可以观察到微生物的各种形态结构，但因其价格昂贵、设备条件要求高、操作也较复杂，应用上也受一定限制。所以，一般实验室仍常用普通光学显微镜来进行微生物形态学特征的观察。然而微生物细胞小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以清楚地观察到细菌的形状及某些细胞结构。因此，为了研究微生物的形态特征和鉴别不同类群的微生物，微生物的染色及形态结构的观察是微生物学实验中十分重要的基本技术
I 微生物的染色与形态结构的观察 微生物由于个体微小，需借助普通光学显微镜、相差显微镜等设备来进行观察，其中用相差 显微镜可以直接观察微生物的形态特征，但其应用有局限性；用电子显微镜可以观察到微生 物的各种形态结构，但因其价格昂贵、设备条件要求高、操作也较复杂，应用上也受一定限 制。所以，一般实验室仍常用普通光学显微镜来进行微生物形态学特征的观察。然而微生物 细胞小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的 明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易识别其结构，所以，用普通显微镜观察细菌时， 往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以清楚地观察到细菌的形状及某些细 胞结构。因此，为了研究微生物的形态特征和鉴别不同类群的微生物，微生物的染色及形态 结构的观察是微生物学实验中十分重要的基本技术
实验一细菌的简单染色一、目的要求1.掌握细菌简单染色法。2.通过简单染色法比较细菌菌体细胞形态和排列方式。二、基本原理：细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。常用碱性染料如美蓝、结晶紫等对细胞进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌接合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明对比，在显微镜下更易于识别。三、实验材料1.菌种：乳酸链球菌（streptococcuslactis）、大肠杆菌（Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus）、红螺旋菌（rhodospirillumsp.)。2.染料：吕氏美蓝染液、草酸铵结晶紫染液。3.其它：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、无菌水、擦镜纸等。四、实验方法与步骤操作过程如下：涂片→干燥→固定→染色→水洗千燥→镜检。（1）涂片：用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片中央，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。R1-1简单染色的固定
实验一 细菌的简单染色 一、目的要求 1. 掌握细菌简单染色法。 2. 通过简单染色法比较细菌菌体细胞形态和排列方式。 二、基本原理： 细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，与背景形成鲜明的对比，以便 在显微镜下进行观察。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。 常用碱性染料如美蓝、结晶紫等对细胞进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱 酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸 性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌接合 使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明对比，在显微镜下更易于识别。 三、实验材料 1. 菌种：乳酸链球菌（streptococcus lactis）、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、红螺旋菌（rhodospirillum sp.）。 2. 染料：吕氏美蓝染液、草酸铵结晶紫染液。 3. 其它：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、无菌水、擦镜纸等。 四、实验方法与步骤 操作过程如下： 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 镜检。 （1）涂片：用接种环从试管培养液中取一环菌，于载玻片中央涂成薄层即可，或先滴一 小滴无菌水于载玻片中央，用接种环 从斜面上挑出少许，与载玻片上的水 滴混合均匀，涂成一薄层。 图 1-1 简单染色的固定