第二章原核微生物的形态结构观察 19 号合成培养基、丰加链霉菌及菌落 三、方法与步骤 (一)水浸片法的制作及观察 (1)取洁净载玻片，滴加无水一滴。 (2)用接种环挑取经过28一30℃培养4~5d的放线菌菌落少许，置于载玻片的无菌 水滴内。 (3)取洁净盖玻片一块，先将盖玻片·端与液滴接触，然后将整个玻片慢慢放下避免 产生气泡。置于显微镜下用高倍镜观察。 (二)印片法的喇作及观察 此法的优点是不打乱孢子的排列状态。 1.取南取2片干净的载玻片，用解剖刀切取一个完整的放线菊菌落（带培养基切 下)，放在一载玻片的中央（注意菌落应正放）。然后将另一载玻片在酒精灯下微微加热 后，盖在这一菌落上面，用接种环或解剖刀轻轻按压，然后小心拿下上面这块玻片（不可 在菌落上移动) 2,固定将取下的这块玻片，通过火焰固定 3.染色用石炭酸复红染色30s,然后水洗，风于。 4.镜检 (三》埋片法的制作及观察 (1)将培养基融化后倒入平板，待凝固后挑取少量放线蘭孢子接人培养基上，在接种 线旁倾斜插人无菌盖玻片。 (2)28一30℃培养4~5d厅，菌丝沿玻片向上生长，待菌丝长好后，取出玻片放在 下净载玻片上，置下显微镜下观察。 m.food血ate,net食品伙件网交流资村
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第三穿 真核微生物的形态结构观察 酵母菊和莓芮都属真核微生物，可行无性或有性繁殖。酵母菌以单细胞个体为主，并 可形成假南丝及真茵丝，而霉菊侧由有隔或无隔的菌丝体组成。 实验3.1酵母菌的形态结构观察 一、目的 认识酵母菌的形态结构，掌据其观察方法。 二、原理 酵母南细胞形态可分为卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形，其菌落较大而厚，湿润，较 光滑，颜色多为乳白、灰黄、淡黄、灰褐色，少见粉红或红色，偶见黑色。酵母菌个体比 细南大几倍到十几倍。无性繁殖主要是芽殖，有些酵母能形成假菌丝。有性繁殖形成子囊 及囊孢子。 三、材料 1.菌种酿酒酵母、红酵母、啤酒酵母、假丝酵母。 2.培养基及其他显微镜、载玻片及盖玻片、培养皿、豆芽汁斜面、醋酸钠斜面、 麦芽糖培养基、玉米粉琼脂培养基。 3.仪器及器皿显微镜、培养、载玻片、盖玻片等。 4.染色液0.1%美蓝液、中性红染色液、芽孢染色液、碘液、苏丹黑染液、二甲 装、0.5%蕃红。 四、方法与步骤 (一）菌落特征的观察 取少地酿酒酵母、红酵母和假丝酵母，划线接种在麦芽糖平板培养基上，28一30℃培 养3一5。用肉跟观察菌落特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽、隆起形状、 边缘形状、火小、颜色等。 (二)酵母菌细胞形态及芽殖方式 将酿酒酵母和峰酒酵母分别接种到麦芽糖琼脂斜面上，25℃培养3刘。在洁净载玻片 m.food恤ate.net食品伙伴网交流资料
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第三草真核微生物的形态结构观察 21 上滴加·滴无茵水或01%美蓝液一滴，用接种环取菌台少许与无菌水或美蓝液混匀、盖 【盖玻片，即成为水浸片。用高倍镜规察擎母细胞形态及出芽情况。 在无闲培养Ⅲ中倒制玉米粉琼脂平板，用新培养的假丝酵母以划线达接种2条线，然 后在其上面盖以无菌盖玻片。25~28℃培养4一5d后观察，看在划线两侧是否形成假南 丝。 (三)子食孢子的观察 将？洲醇母接种于豆芽汁或麦芽汁液体培养基中，28~30℃培养24，如此连续传代 3-4次，使其生长良好。然后转接到酯酸钠斜面培养基上，25一28℃培养4一5d。用水浸 片或涂片后再用芽孢染色法染色，观察子囊孢子形状及每个子囊内的千囊孢子数目。 {四)液泡的活体楚色观察 在洁净的载玻片上滴加一滴中性红染色液，用接种环取少量酿酒薛母与染液混匀，染 色4~5ni后，盖上盖玻片在显微镜下观笨。中性红是液泡的活体染色剂，当细胞处于生 活状盒时，液泡被染成红色，细胞质及核不着色；若细胞死亡，液泡染色消失，细拖质及 核早现弥散性红色。 (五）肝糖粒染色观察 用酿酒酵母涂片，自然干燥后滴加1~2滴碘液，盖上盖玻片后在显微镜不观察。肝 糖粒遇碘呈深红褐色。 (六)脂防粒染色观察 方法一：在载玻片上加一滴无茵水，用接种环取少许酿酒醇母制成涂片，自然下燥后 滴加苏丹黑染色5min。水洗后自然干燥，滴加二甲苯脱色至涂片透明，干燥后滴加0.5% 菁红染色液复染305，水洗，自然干燥后用显微镜观察。脂肪粒呈黑蓝色，细胞质为红 色。 方法一：加一小滴苏丹黑于洁净的载玻片上，挑取少许酵母南体与之混匀，盖上盖玻 片后镜检。脂肪粒呈黑色。 ,实验3,2酵母细胞核的染色 一、目的 学习并掌握微生物细胞核的染色原理及方法。 二、原理 真核细胞的细胞核呈球状或椭圆状，其主要成分是DNA。DNA和RNA均可被碱性 染料若色，细胞质中的RNA会干扰核DNA的染色观察。在真核细胞内，DNA总是和第 门质结合成高聚合的大分子形态，这些大分子经固定剂处理后，即使在60℃1mol/L HC 中处理5~1Omi,也不能使DNA溶解。而RNA不像DNA那样聚合，如果环境发生酸 化、从H3.5起，RNA就被溶解。利用这一特点可将RNA除去，以达到理想的细胞核 染色目的。 m.foodmate,net食品伙件网交流资料
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食品微生物学实验技术 三、材料 1.菌种酿酒酵母。 2.试剂1molL的过氯酸(HC0),1%的银酸，0.5%的碱性复红染色液，氯化汞 固定液。 四、方法与步骤 1.取经28℃培养12h的确良酿酒酵母涂片，自然干燥。 2.将涂片放在盛有1%饿酸溶液的瓶口上，用饿酸蒸汽固定5min,再加氧化汞固定 液处理5min,水洗。 3.将涂片放在1 mol/L HCIO3的染色缸中置冰箱内(3~4℃)30h,除去RNA。 HC1O,需预先冷却。 4.取出涂片，水洗。用碱性复红染30s然后水洗、十燥，即可镜检 五、结果 酵母南的细胞核呈红色。 实验3.3酵母菌死活细胞的鉴别 一、自的 学习酵母菌死活细胞鉴别的原理并掌握其操作方法。 二、原理 酵母南细胞的死活鉴别是利用美蓝弱氧化剂还原后变为无色的特性，如为活的酵母细 胞，出于新陈代谢不嘶进行能将美蓝还原。因此，不能将活细胞着色，而死细胞或代谢缓 慢的餐老细胞，由于它无还原能力或还原能力极弱，仍可被美蓝染城蓝色或浅蓝色。这 样就可根描细胞无色或呈蓝色来区别死细胞和活缅胞。 三、材料 1.菌种酿酒薛母(28℃培养48h的液体试管)。 2.仪器及试剂显微镜、载玻片、盖玻片、0.05%美蓝染色液（以pH6.0的 0.02molL磷酸缓冲液配制)。 四、方法与步骤 1.取0.05%美蓝液1滴，置载玻片中央。 2.用接种环取少量酵母菌与美藤液混合均匀，染色2~3m,将盖玻片由一边向另 边慢慢盖上c m.food恤ate.net食品伙伴网交流资料
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第三章真核微生物的形态结构观察 23 3.高倍镜下检查，无色透明的为活的酵母细胞，被染上蓝色的为死细胞，观察10个 视野死细胞数目。 五、结果 酵母细胞死亡率可按下式计算： 死亡率-8个器串贺警平路餐×10% 实验3.4霉菌的形态结构观察 一、目的 学习并掌握霉茵的制片方法并认识几种霉茵的形态特征。 二、原理 莓菌的营养体是由许多分枝的菌丝组成，称为菌丝体。菌丝有的有隔膜，有的无隔 膜，有的有假根。霉菌孢子的形状、着生部位和排列方式也各不相问。 霉南菌落是由幽丝体及孢了组成，菌落大而黛松，呈绒毛状、棉絮状、蜘蛛例状等不 同结构，其孢∫有各种颜色，如黑色、灰白色、褐色、肯缺色等。有的菌丝可分泌色素到 培养基中，使培养基呈不同的额色。由于釋的菌丝较粗大，而H孢子易飞散，如将菌丝 体置水中易变形，故观察时将其置于乳酸石炭酸溶液中，保持菌丝休原形，使细胞不易 十燥，并有杀菌作用。 三、材料 1.菌种根荐、青霉、黑曲霉、白地霉和木荐培养好的早板各·个，黑根莓的接合 孢子示范片。 2.仪器及其他显微镜、乳酸、石炭酸落液、载玻片、盖玻片、接种针、洒精灯等。 四、方法与步骤 (一)雾萬菌落特征的观察 认真观察根萄、青霉、曲霉、赣刀荐、木群的菌落特征，按表31项目进行描述： 表3-1不同霉菌菌落特征 _d 菌丝高低 子姬色 松紧度 可件色煮 (二)菌体的形态的观察 m.foodmate,.net食品伙伴网交流资料
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