第一章显微镜的使用 中央，盖上盖玻片，勿产生气泡。将此水浸片放在载物台上 3.放置滤色镜在光源前放置监色或黄绿色滤色镜。 4.视场光阑的调中 (1)将相差聚光器转盘转到“0”位，用10×相差物镜观察，将视场光阑关至最小。 (2)转动旋钮上下移动聚光器，使观察到清晰的视场光阑的多边影像。 (3)转动调屮旋钮使视场光阑影像调中。 (4)将视场光阑开大，进一步调中使视场光阒多角形与视场圆内接，再稍开大视场光 闲至各边与视场圈外切。 5,环状光阅与相板合轴删节 (1)取下F镜，换上合轴测整塑远镜。将相差聚光镜转盘转至“10”位（与10×物 镜相配) (2)湖整望远镜的焦距飞清晰地规察到聚光器的环状光阑（亮环）和相差物镜的柑板 (暗环)的像， (3)调节聚光器的环状光阑的合轴调整旋，使亮环完全进入暗环并与暗环同轴。 6,相差观察 (1)取下合轴调整望远镜，装上日镜可进行观察。若改用不同放大倍数的相差物 镜，如20×、40×时，应重新进行合轴调整。若用100×相差物镜时标本和物镜间应加入 镜油，然后进行合轴测整。 (2)用40×、100×相差物镜对酿酒酵母细胞结构进行观察.绘制酿酒酵母细胞的结 构，特别晁核钻构。 m.foodmate,net食品伙件网交流资料
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第三章 原核微生物的形态结构双桑 微生物的形态特征包括个体形态结构和群体特征，进行微生物形态特征的观察是认识 微生物的重要内容。细菌和敏线菌问属原核微生物，细菌的种类多、个体小、结构较为简 单，以次分裂繁殖为主；放线菌呈分枝菌丝状，主要以无性孢子繁殖。 实验2.1细菌简单染色 一、目的 学习并擎撰简单染色法 二、原理 细陌个体微小，且较为透明。因此，需借染料使其着色，以便于在显微镜下观察。细 菌简单染色是用一种染液一次着染菌体的方法。其原理是细菌在中性环境中一般带负电 荷，所以当采用碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、蕃红等进行染色时，这类 染料解离后，染料离子带正电荷，故使细菌着色。 三、材料 1.谄种巨大芽孢杆南。 2.仪器及其他接种环、酒精灯及火柴、载玻片、碱性复红或结品紫染色液，洗瓶 及废液缸、吸水纸、显微镜。 四、方法与步骤 1.准备骏片载玻片应清洁透明，无油菠。如有残余油渍，可按下列方法处理： (1)滴上95%酒精2一3滴，用洁净纱布反复镞净，然后在酒精灯火焰上轻轻拖过几 次 (2)如果玻片事先已浸泡在5%酒精中，那么就可用慑F将其取出直接在酒精灯火 焰上拖过几次 2.涂片根据材料的不同，涂片方法也有区别。 (1)液体材料液体培养物，组织汁液或牛乳等直接用接种环以无菌操作法取·环材 料，置于玻片中央均匀地涂抹成适当大小的薄层（直径约lcm)。 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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第一帝原核微生物的形态结构观察 11 (2)固体材料如固体培养物、牛乳凝块或奶酪等则先用滴管在载玻片中央加·滴足 菌水，然后同样以无菌操作法用接种环从固体材料上挑取一环，在液滴中混合均匀，涂抹 成适当大小的溥层。 3.干燥将涂好的玻片放在玻片架上自然干燥。有时为了使它下得快些，可以将涂 片小心地在酒精灯的火焰上微微挥动使其干燥（注意载玻片的温度以不超过手背的耐受力 为限)。 4.固定将已下燥的涂片（涂菌面向上）慢慢地从酒精灯的火焰上通过2~3次，日 的是将活南杀死，使菌体粘附在玻片上，染色时不致脱落，同时改变凿体对染液的通透 性，增加染色效果。 5.染色滴1一2滴碱性复红（或其他染液，如结晶紫、美蓝、沙黄等）于涂片的部 位，染色{~2min(染色液不同，染色时间长短也不完全一样)。 6.水洗用-只手的拇指和食指拿住玻片一端的两侧，菌面向上并使玻片向下斜 另一只手拿洗瓶或直接用水龙头从玻片上端轻轻地冲洗掉多余染液（不可直接冲洗染色部 位，以免将菌体冲掉)，直至冲洗水滴尤色或浅色为止。 7.干燥用吸水纸吸去载玻片上多余的水分让其自然干燥或在酒精灯火焰上方微热 烘于。 8,油镜检查用油镜对标本片进行镜检，观察南体形态及大小，同时绘出图来。 实验2.2细菌革兰氏染色 一、目的 了解细菊革光氏染色原理，并掌握其方法 二、原理 革“氏染色法是一种重要的鉴别细菌的方法，根据各种细菌对这种染色法的反应不 同，可把细菌分为革兰氏阴性和节兰氏阴性两人类。因此，该方法对于细菌的分类、鉴 定及生产应用都行重要意义。其染色原理是利用细南的细胞壁组成城分和结构的不同， 革兰氏阳性荣的细胞壁肽聚糖层厚，交联而戒的肽聚糖网状结构致密，经乙醇脱色处理 发生脱水作用，使孔径缩小，递透性能降低，结晶紫与侠形成的大分子复合物保留在细 胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色；而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联 少，脂类含量较高，经乙醇处理后，脂类被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结品 紫与碘的复合物被溶出细胞壁，使细胞脱色。此时，再经复红或沙黄等红色染料复染 细形孕红色 在革兰氏染色中，有两个值得注意的问题。一是酒精脱色的时间要掌握拾当.随涂片 厚薄不同，脱色的时间也不完全-·样，一般以不溶出色素为止。若脱色过度则阳性菌被误 染为阴性菌，而脱色不够时阴性南则被误染为阳性闲。二是培养物的老幼对染色结果也有 影响，革兰氏染色检查的菌，必须是新培养物。 m.foodmate,net食品伙件网交流资料
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12 食品微生物学实验枝术 三、材料 1.菌种培养0-12h的枯草杆(Bacillus subtilis)及大肠杆（cherichiu co i). 2.仪器及其他显微镜、接种环、洒精灯、载玻片、玻片架，75%酒精消毒缸 慑子、无菌水、草酸铵结品紫、Lg©氏碘液、95%洒精、蓄红染液、吸水纸、特种蜡 笔。 四、方法与步骤 1.涂片除片、十燥、定同筒单染色法。 2.初染滴加草酸铵结品紫于涂片部位，染色时问为1mim 3.水洗用水轻轻冲洗，洗去多余的染料。 4.滴加Lugol氏璃液1~2nin,紫色部分变期为止。 5.水洗倾去Lg@l氏液，水洗 6.脱色滴加95%以上的酒粕，约30~60s(色素不溶出为止)。 7.水洗同5水洗 8.复染加红或沙黄染1-2min。 9,水洗同5水洗 10.十燥自然干燥或用吸水纸吸于。 11.筑棕州油镜视察，记录结米 实验2.3细菌芽孢染色 一、目的 学习并学握细南芽孢染色的原理及方法。 二、原理 细菌的穿孢具有一层结构致密的芽孢壁，通透性差、者色较难，用普通染色法染色菌 体着色而芽袍呈现不染色的轮廓，但经特殊处理（加热染色或胸蚀性药物处理）色素即可 透过芽孢鉴面使芽孢着色，几年孢一经着色便不易褪色，脱色时只能脱掉菌体的颜色而保 留芽孢的颜色。因此，如再换另一种颜色的染液复染菌体，便会使菌体和芽孢呈不同顏色 的鲜明村照。 三、材料 1.菌种枯草芽胞杆菌。 2.仪器及其他显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、7.6%的孔雀绿染色液，0.5% 的格红、石炭酸复红、美蓝、吸水纸、枯草芽孢杆菌、水浴锅或小烧杯与三角架。 m.food恤ate.net食品伙伴网交流资料
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第二章原核微生物的形态结构观察 13 四、方法与步骤 1.孔鲎绿普红芽孢染色法 (1)涂片经火焰尚定，滴定孔雀绿染液于涂片上，加热至产生燕汽达3-5min(加热 时要慢慢来回移动，添加染液勿使涂片干燥)。 (2)水洗后，再月蕃红染液复染1-2min。 (3)水洗、干燥、镜检、绘图。芽孢被染上绿色，营养体呈红色。 2.石炭酸复红染色法 (1)试将·支，加蒸馏水3~4滴，取1~2环芽孢杆菌于水中，并充分播荡制成均匀 的悬浮液。 (2)滴加等壁3~4滴石炭酸复红液摇匀，水浴煮沸10min以上。 (3)取上述加热后的染色菌悬液2一3环于载玻片上制成涂片，然后经过干燥、火焰 固定、水洗。 (4)美蓝复染3-4min,经水洗、干燥后，镜检，绘图。 实验2.4细菌荚膜染色 一、目的 学习并掌握细荚膜染色的原理及方法。 二、原理 细菌的荚膜不易着色，但通透性较好，染料可通过英膜使嗜体着色，所以，染色后任 有颜色的菌体周围，有一浅色或无色的透明圈，即为英膜。为了更清楚地观察荚膜常用负 染色法，即用有色的背景来村托出没有染上颜色的荚膜。 三、材料 1.菌种在阿须贝(Ashby）无氨培养基上培养2~3d的圆褐固氮菌(Azotobacter chroocnccum）或硅酸盐细菌。 2.仪器及其他显微镜、酒精灯、载玻片、石炭酸复红染液、1%黑素或绘图墨水、 95%酒精、在阿须贝(Ashby)无氨培养基上培养2~3d的圆褐固氮菌或硅酸盐细菌。 四、方法与步骤 (1)在干净的载玻片中央，滴加无菌水少许。 (2)挑取培养2一3的硅酸盐细茵斜面菌体制成涂片，晾干（不可用火焰烘干）。 (3)加95%酒精1滴固定（不可加热），待酒精粪发掉为止。 (4)石炭酸复红染色液染色3~4min,然后水洗，晾干。 (5)用接种环取少许黑素于我玻片一端，另取-块边缘光滑的载玻片与黑索接触，并 m.foodmate,net食品伙件网交流资料
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