食品微生物学头验技术 3.虹彩光圈位」案光镜下方，由十几张金属薄片组成，中心部分形成圆孔，推动 光圈把手，可开人或关小，用以调节射入聚光镜光线的多少，使照明怡到最适程度， 4.接物镜通常称为镜头，是品微镜的重要部件，它不仅可以放人标本，而且具有 辨晰性能。闪此，它决定着显微镜的性能。一台显微镜通常有三个接物镜，一个是低倍镜 (8~10×),一个是高倍镜(40~60×)，这两个都是十燥系接物镜（干燥系是指接物镜与 被检物之间的介质是空气)，第三个接物镜为油浸系接物镜(90~100×)，简称油浸镜或 油镜（油浸系指接物镜与被检物之间的介质是某种油类物质）。三个接物镜按放大倍数顺 序安装在转换器上，便于依次转换使用。 接物镜的放人*可以直接通过镜头侧面刻有的放大倍数来辨认，也可由其外形来辨 认， 般低倍物镜较短，高倍物镜较长，油浸镜也较长，接物镜上面带有一圈不同颜色的 线作为标记，使用时·定要识别清楚。 放大倍数趣高的接物镜，它的焦距越小，」作距离也越小，也就是说，在观察时它与 被观家物的距离越小。因此，在使用油没镜观察时其镜头和玻片极为接近。 5.接日镜通常称为日镜，位于镜筒的上端，由两块透镜组成，它只能将接物镜所 造成的实像进一步放大形成虚像映入限部，不具有辦晰性能。接目镜上刻有表示放大倍数 的标志，如5×、0×、16×。通常每台显微镜都备有几种不同放大倍数的接目镜，可根 据箭要选择其中 一种使用。有的接目镜为便于指示物像起见，镜头中装有黑色细丝-条作 为指针。 四、显微镜的性能 显微镜的总放大倍数等于物镜放大率和目镜放大率的乘积。们显微镜性能的优劣不只 是视其放大倍数的高低，而更主要的是视其辨晰细微结构的能力，即性能良好的显做镜必 须使被观察的物体放大倍数高，面且清晰。 显微镜辨晰细微结构的能力可用分辨率表示，其能够绑晰的细微结构越小，则分辨率 越高。分辨率的高低，首先取决于物镜的性能，若设物镜分辨出的物体两点间的最短距离 为D,则： D=2NA 式中，A为可见光的波长，平均为0.55m;NA为物镜镜口率或称开口率、数值口 径。镜ㄩ率NA是物镜和被检标本间介质的折射率n与镜口角（即入射角a)的半数正弦 的乘积，常以下式表示： 镜口*NA=nsin号 所以，D也可表示为D=2min(a2 由上可见，显微镜的分辨率与波长、介质折射率和镜口角（入射角）有关。入越 火，D值越大，分排率越低；n和。越大，D值越小，分辨率越高。因此，可以通过 缩短光线波长，增大介质折射率和加大镜口角（入射角）来提高分辨率。紫外光显微镜 和电子显微镜就是利用短波光和电子波来提高分辨率的。但普通光学显微镜用的是可见 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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第一章显微镜的使用 5 光，波长定，平均为0.55，而镜口角是指物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前 透镜有效直径的边缘所张的角度，理论上最大为180°，故n(a2)理论最大值为1 (实际上镜几角度最人以能为140”)，因此试图通过缩短波长或提高镜口角来虑高光学 显微镜的分辨率是有限度的。只有道过提高介质的折射率来提高镜口率，从而提高其分 辟率。在使用低倍镜和高倍镜时，镜头与玻片标本间的介质是空气，其折射率是【， (a2)=sin70°=0.94，故其镜口率NA=1×0.94。使用油镜时，镜头与玻片标本间的 介质是吞柏油，香柏油的折射率为1.515，则其NA=1.515×0.94,故油镜的镜11率 总是大小低倍或高倍镜的镜口率，其镜口率最大可达到1.4，所以油镜的分辨率比低倍 镜或高倍镜要高的多：例如，在可见光照射下，用镜口率1.25的油镜（一般油镜的镜 口角半数的正弦为0.81)，能分辨出物体两点问的最短距离D=0.55/(2×1.25) 0.22m而且镜口率为0.65的高倍镜，能分辨出的最短距离D-0.55/(2×0.65)= 0.4211即两点间的最小距离如果小于0.41m,在高倍镜下即混为一点，不可辨晰， 而在油镜下则清渐可见。 使用某物镜时，应配合·定镜口率的聚光镜。一般以聚光镜的镜口率大于或等丁物 镜的镜口率为宜，杏则影响物镜的件能 出此可见，显微镜的性能不只是决定于总放大率。一般来说，显微镜的总放大率应以 物镜镜11率的500-1000倍为宜，这个范围内的放大案叫有效放大率。 例如，用NA1.25(100×)的物镜，其有效放人率为1250，超过此数叫无效放大 率，虽用15×的目镜可放人1500倍，但对分辨率是没有任何帮助的。 五、显微镜的使用方法 显微镜是光学精密仪器，使用前要了解显微镜的结构及性能，然后按下列步骤行细操 作 1.攻镜拿取显微镜必须·只手拿者镜臂，一只手托若镜座，保持镜座平直，以防 上反光镜放接目镜滑落，置显微镜于平稳的实验台上。 2.姿势镜检者姿势要端止，一般用左眼观纂，右眼进行绘图和记录，两眼应同时 峥井，以减少疲劳。 3.对光确的照明是获得良好检查效果的前提条件。晴天对者窗户的散射阳光是 很好的光源，但应避免强烈的直射光，以防止损环显微镜的光学系统，在光线不足时，可 用口光灯或特制的显微镜灯件光源。普通灯泡因有黄色光影响观察，需在廉光器下加放一 块片色滤光片。对光的步骤是： (I)将低倍镜旋转于镜简正下力，调节粗调螺旋，使镜头和载物台距离约【m左右。 (2)升聚光器，使其与载物台表面距离lmm左h. (3)双眼张开州左眼看目镜调节反光镜镜面角度，调节光圈，直至视野内得到最均匀 最适宜的照明为止： 一假染色片油镜检在时，光度宜强，可将光圈厅大，聚光器上升到最高，反光镜调到 最强。.术染色标本、用低倍镜或高倍镜视察附，应适当地缩小光圈，下降聚光器，使光度 减弱，否恻光线过强不易观察】 mm.foodmate,.net食品伙件网交流资料
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、6 食品微生物学实验技术 4.观察初学者应先用低倍镜观察，这是因为低倍镜视野的实际范围最大，易于发 现目的物，将标本玻片放在载物台上.（注意标本朝上），并使标本位于物镜的正下方，转 动粗满蝶旋，问时从侧面观察，待物镜下降到距标木约0.5cm时，开始由目镜观察，同 时用粗调螺旋升起镜筒，直到出现物象后，改用细调螺旋，上下微微转动，仔细阔节焦 距，直至最厅获得消晰的物象为止。如此时视野单所观察到的部位不理想时，可利用推进 器将最适合的部位移到视野中央。 由低倍镜转换高倍镜观察时，一定要从侧面注规，以防低倍镜未对好焦距面造成镜头 与玻片相撞，另外要州于指捉住转换器下面的金属盘使之旋转，而不得用手指捏往物镜来 转动，否则长期使用后，会使光轴斜。调节光圈和聚光镜，使亮度适中，再仔细转动细 调螺旋，调节焦距，获得清晰的物象。 细莴或其他标本的细微结构，都需要用油浸镜观察，由于油浸镜的工作距离很短 (0.9m左右)，枚使用时必须特别小心。作低倍镜找到要观察的部位以后，将镜简升 起，在标本上加一滴香柏油，转换油镜头，从侧面注祝，用粗阔螺旋将镜简小心下降，使 油镜头浸入油滴，直到几乎与标本接触为止（注意切奶压在标本上，以免压碎玻片，甚至 损坏油镜头)。从日镜观察，先用粗调螺旋徐徐升起（只准上升镜筒，不能向下调节），当 礼野中有模糊的标本物像时，改用细调螺旋调节，真到标本物像清晰为止，如转动粗调螺 旋已使镜头离开油镜，应重新调节，直至调到看清物像为止。 5.镜检后显微镜的保养 (1)油镜使州完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦镜纸，滴上少量的二甲 苯，把境头上的油擦净，最后再用张干净擦镜纸将镜头上残留的二甲本擦净，否则粘固 透镜的胶质会被-甲苯溶解，日久镜片易移位脱落。 (2)下降聚光镜，打开虹彩光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚灰尘。 (3)用纱布将显微镜各部位擦净，除去灰尘、油污、水汽，以免生锈长莓。 (4)使显微镜各部件恢复间原位，转动转换器，使物镜呈“八”字形叉开置于载物台 上，然后将显微镜送回箱中。 (5)显微镜应放在干燥阴凉的地力，不要放在强烈的日光下噪晒，需雨季节应在录微 镜箱内放置干燥剂（硅胶），如长期不用，则光学部分应卸下放在干燥箱中，以免受潮生 (6)显微镜应严禁与挥发药品或腐蚀性药品放在一起，如碘片、盐酸、硫酸等药品。 实验1.2暗视野显微镜的使用 一、目的 了解暗视野显微镜的构造和原理，草握其使用方法。 二、原理 暗视野显微镜是使用一种特殊的暗视野聚光镜或暗视野聚光器，不让光线直接照射被 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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第一章显微镜的使用 检物体并进入物镜，而是使光线其能从周缘进入并会聚在被检物体的表面，利用被检物体 面的反射光线来观察物体的轮廓。暗视野显微镜适合于观察在明视野中不观察的折射 率很强的物体，以改普通明视野显微镜看不到的微小颗粒〔0.2一0.04m),如细曲的运 动或鞭毛等。 暗视野显微镜有两种主斐类型：一种是析射和，即在普通聚光镜放置速光片的地方放 上一个中心有光挡的小铁环就成为·个暗视野聚光镜。另一种是反射型，有不同形式的产 品。 三、材料 1.菊种枯草芽孢杆菌或大肠杆随 2.仪器及其他普通光学显微镜、暗视野聚光器、显微镜灯、盖玻片（厚度1.0一 L.2mm）盖玻片（厚度<0.17m、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。 四、方法与步骤 1,安装暗视野聚光器取下普通聚光器，换上暗视野聚光器，上升聚光器使其透镜 顶指与镜台平齐 2.调节光源光源宜强，将光源的光阻开到最人，聚光器光圈满至1.4。如显微镜本 身不带光源，可用显微镜灯，调整好光源和反光镜，使強光桌正好落在反光镜中央并反射 入聚光器 3.制片取载玻片一块，加一滴幼龄菌液，盖上益玻片。注意不要有（泡，载玻片 和盖玻片应非常清洁，无油脂、无划痕，以免反射光线。 4.置片 加香柏油于聚光器 透镜的顶部，下降案光器，然厅 把制片放置在载物台上，并把标 本移至物境下，升高聚光器，使 镜油与载玻片背面相接触， 避免 产生气泡。 5.调焦和调中用低镜进 2 行，调节聚光器的高低，最初可 图12暗视野聚光器的中心满节及湖焦 出现一个中间有一黑点的光环 再调至成为一个光点，光点愈小 2.儿箱致，但光荐焦点与被检物不 愈好。然后用聚光器的调中螺丝 3.焦点与被检物 进行阔节，使光点位于视野的中心，如图1-2。 6.用油镜观察操作方法见实验1,1可进-一步微调聚光器和反光镜使暗视野照明处 干最佳状态，并仔细调节粗、细调节螺旋，使菌体更清晰。 五、记录结果 描述所观察菌体的运动情况。 mm.foodmate,.net食品伙件网交流资料
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8 食品微生物学实验技术 实验1.3相差显微镜的使用 一、目的 ∫解相差显微镜的构造和原理，掌握其使用方法。 二、原理 用暗视野显微镜可以看到活菌体的轮廓及运动情况，但看不清细胞的内部结构。用普 通光学显微镜观察活细胞时，由于活细胞多是无色透明，光线通过时，光的波长和振幅不 发生变化，所以整个视野的亮度均匀，不能分辨细胞内的细微结构，而相差显微镜可以较 好地解决这一问题。 相差显微镜的外形和成像原理与普通显微镜相似，不同的是相差显微镜有相差聚光器 (内有环状光测)和相差物镜（内装相板）及调节环状光阑和相板合轴的调整望远镜。 相差聚光器装有一个转盘，内有大小不同的环状光阑，在边上刻有0、10、20、40、 10等字样，“0”表示没有环状光阑，其他数学表示环状光阑的不同大小，应和相应 (10×、20×,40×、100×)相差物镜配合使用。环状光阑是一透明的亮环，光线通过环 状光阑形成·个圆筒的光柱。 相差物镜有“h”或一个红圈，或两者兼有作为标芯。相差物镜的内焦平面上装有 个相板，相板上有一层金属物质及…个暗环，不同放大倍数的相差物镜其暗环的大小不 同。 相差显微镜利用环状光阑和相板，使通过反差很小的活细胞的光形成直射光和行射 光，直射光波相对地提前或延后14波长，并发生干涉，使通过活细胞的光波由相位差变 为振幅（亮度）差，活细胞的不同构造就表现出明暗差异，使人们能观察到活细胞的细微 钻构。 相差显微镜可分为正反差（标本比背景暗）和负反差（标本比背景明亮）两类。正反 差特别适用于活细孢内部细微结构的规察。 三、材料 1.菌种眼酒酵陟 2.仪器及其他相差显微镜、载玻片（厚约1mm)、盖玻片（厚度0.17-0.18mm)、 镜油、擦镜纸等 四、方法与步骤 【.安装相差装置取下普通光学显微镜的聚光器和物镜，分别装上相差聚光器和相 差物镜。 2.制片在洁净的载玻片中央加一滴无菌水，从斜面上取-环酵母置水滴中轻轻混 合，盖上盖玻片；若是液体培养物，则可先将其摇匀，然后用滴管吸取后加一滴于载玻片 m.food恤ate.net食品伙件网交流资料
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