(二)大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA DNA DNA 比较项目 聚合酶I 聚合酶Ⅱ 聚合酶 分子量 109,000 120,000 400,000 每个细胞的分子统计数 400 100 10-20 5'-3'聚合酶作用 + 3'5'核酸外切酶作用 5′3'核酸外切酶作用 转化率 1 0.05 50 功能 切除引物 复制 修复 修复 1999年发现聚合酶 和 ,它们涉及DNA的错误倾向 修复((errooune repair)
(二)大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA 聚合酶Ⅱ 分子量 每个细胞的分子统计数 5´-3 ´聚合酶作用 3´-5 ´核酸外切酶作用 5´-3 ´核酸外切酶作用 转化率 DNA 聚合酶Ⅰ 109,000 400 + + + 1 120,000 100 + + - 0 .05 400,000 10-20 + + - 50 比较项目 DNA 聚合酶 切除引物 修复 功能 修复 复制 1999年发现聚合酶 和 ,它们涉及DNA的错误倾向 修复(errooune repair)
DNA聚合酶I (1)5'→3聚合酶功能(但持续合成DNA的能力差); (2)3'→5'外切酶活性(在正常聚合条件下,此活性 不能作用于生长链,只作用于生长中不配对的单链,校对 功能。): (3)还具有5'→3'外切酶活性(双链有效);
DNA聚合酶 I (1)5 → 3 聚合酶功能(但持续合成DNA的能力差); (2)3 → 5’外切酶活性(在正常聚合条件下,此活性 不能作用于生长链,只作用于生长中不配对的单链,校对 功能。); (3)还具有5 →3’外切酶活性(双链有效);
5'3聚合酶功能 Incoming 0 deoxynucleoside 5'-triphosphate O=P-0 0 O=P-0 0 5'① 3 5 5① Growing -OH OH DNA strand (primer) A G G T Template DNA strand 3 P5' 3 Deoxyribose (dNMP)n+dNTP-(dNMP)n+1+PPi
5 → 3 聚合酶功能 (dNMP)n + dNTP → (dNMP)n+1 + PPi
聚合反应机理: GC- 引物 3 模 3 板 链 5 -A OH
聚合反应机理: 5' 3' P O G P O A 模 板 链 C T A 3' 5' 引物 3' 3' 5' 5' OH P O G P O A O OH T P 模 板 链 C T A 3' 5' 引物 3' 3' 3' 5' 5' P 5' O OH T P P 3' 5
DNA聚合酶3'-5外切酶活力 Template Mismatched bases 3'→5 Exonuclease hydrolysis site DNA polymerase I 切除引物、切除突变的片段
DNA聚合酶的3´- 5´外切酶水解位点 3´ 5´ 3´- 5´核酸外切 酶水解位点 DNA聚合酶3´- 5´外切酶活力 切除引物、 切除突变的片段