实验研究内容布鲁氏菌目标基因的克隆和诱饵蛋白载体的构建布鲁氏菌侵染绵羊巨璧细胞CDNA文库的构建布鲁氏菌诱饵蛋白作用的捕获蛋白筛选与验证2008届石河子大学博士研究生论文答辩
布鲁氏菌目标基因的克隆和诱饵蛋白载体的构建 布鲁氏菌侵染绵羊巨噬细胞cDNA文库的构建 布鲁氏菌诱饵蛋白作用的捕获蛋白筛选与验证 实验研究内容 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验一布鲁氏菌目标基因的克隆和诱饵蛋白载体的构建用分子克隆技术对布鲁氏菌的目标基因（外膜蛋白基因omp31和IV型分泌系统蛋白基因virB2、virB3、virB5、virB8基因）进行克隆测序；将目标基因构建到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中2008届石河子大学博士研究生论文答辩
•用分子克隆技术对布鲁氏菌的目标基因(外膜蛋白 基因omp31和Ⅳ型分泌系统蛋白基因virB2、virB3、 virB5、virB8基因)进行克隆测序； •将目标基因构建到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。 实验一布鲁氏菌目标基因的克隆和诱饵蛋白载体的构建 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验材料工具酶及生化试剂10×TaqReactionBuffer，dNTP(2.5mM)，TaqDNA聚合酶（2.5U/μL），DNAMarkerII，DNA回收试剂盒均购自天根生化（北京）科技有限公司：·X-α-gal购自ANASPEC公司；·限制性内切酶EcoRI、PstI、小牛血清购自上海生工生物工程技术服务公司·其他试剂均为国产分析纯。引物所用引物委托上海生物工程技术服务有限公司合成。培养基10%小牛血清琼脂培养基。2008届石河子大学博士研究生论文答辩
工具酶及生化试剂 •10×Taq Reaction Buffer，dNTP(2.5mM)，Taq DNA聚合酶（2.5U/μL），DNA MarkerⅡ，DNA回收试剂盒均购自天根生化（北京）科技有限公司; •X-α-gal购自ANASPEC公司; •限制性内切酶EcoRⅠ、PstⅠ、小牛血清购自上海生工生物工程技术服务公司； •其他试剂均为国产分析纯。 引物 所用引物委托上海生物工程技术服务有限公司合成。 培养基 10%小牛血清琼脂培养基。 实验材料 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验材料菌株与质粒来源菌株与质粒说明本室保存布鲁氏菌019株新疆地方株本室保存EscherichinacoliDH5α克隆宿主菌本室保存大肠杆菌Top10克隆宿主菌MATa表型酿酒酵母菌株Y187Clontech公司高效克隆PCR产购自天根生化pBS-T公司物的载体含lam诱饵质粒Clontech公司pGBKT7-lam2008届石河子大学博士研究生论文答辩
菌株与质粒 菌株与质粒 说 明 来 源 布鲁氏菌019株 新疆地方株 本室保存 Escherichina coli DH5α 克隆宿主菌 本室保存 大肠杆菌Top10 克隆宿主菌 本室保存 酿酒酵母菌株Y187 MATa表型 Clontech公司 pBS-T 高效克隆PCR产 物的载体 购自天根生化 公司 pGBKT7-lam 含lam诱饵质粒 Clontech公司 实验材料 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验材料诱饵蛋白基因的引物PrimernameSequences（5'to3")virB2上游GAATT CATGA AAACC GCTTC CCCCvirB2下游CTGCA GTTAC CTAAG CAGGT AAGAG GvirB3上游GAATT CATGA CAACG GCACC ACAGGVirB3下游CTGCA GTCAT GATTC TCTTT TGCGCvirB5上游GAATT CATGA AGAAG ATAAT TCTCA GCVirB5下游CTGCA GTTAA TAGGC GGCTT CCAvirB8上游GAATTCATGT TTGGA CGCAA ACAAT CVirB8下游CTGCA GTCAT TGCAC CACTC CCATTOmp31上游CATATGAAAAGATTC CTGCT TGCOmp31下游CTGCAGTCAT TGCAG GTTCT CCC2008届石河子大学博士研究生论文答辩
诱饵蛋白基因的引物 实验材料 2008届石河子大学博士研究生论文答辩