实验方法Outline5个目标基因的PCR扩增pGBKT7-lam质粒的复制和T载体的连接、测序EcoRI/PstI线性化EcoRI/PstI酶切目标基因pGBKT7-lam质粒构建、鉴定pGBKT7-omp31/virB2/virB3/virB5/virB8质粒转化AH109酵母菌进行自激活和毒性检测2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验方法 5个目标基因的PCR扩增 和T载体的连接、测序 EcoR I/Pst I酶切目标基因 EcoR I/Pst I线性化 pGBKT7-lam质粒 构建、鉴定pGBKT7-omp31/virB2/virB3/virB5/virB8质粒 pGBKT7-lam质粒的复制 转化AH109酵母菌进行自激活和毒性检测 Outline 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验结果omp31 基因的PCR扩增1234567893000bm1200bp800bm500bp图2-1外膜蛋白基因的PCR扩增Figure2-1PCRamplificationofoutermembraneproteingenesLane 1:DNAMarker, Lane 2:negative control;Lane3:GroELgene,Lane4:HtrAgene,Lane5omp2bgene;Lane6:omp2agene,Lane7:omp31gene; Lane8:omp25gene, Lane9:omp22gene.经过多次反复探索PCR扩增的条件，最终得到较清晰的特异的条带，其大小为735bp。2008届石河子大学博士研究生论文答辩
omp31 基因的PCR扩增 图2-1 外膜蛋白基因的PCR扩增 Figure 2-1 PCR amplification of outer membrane protein genes Lane 1: DNA Marker; Lane 2: negative control; Lane 3: GroEL gene; Lane 4: HtrA gene; Lane 5: omp2b gene; Lane 6: omp2a gene; Lane 7: omp31 gene; Lane 8: omp25 gene; Lane 9: omp22 gene. 经过多次反复探索PCR扩增的条件，最终得到 较清晰的特异的条带，其大小为735bp。 实验结果 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验结果virB2.VirB3.VirB5.VirB8的PCR扩增123456789101112133000bps2000bp1200bn800bn500bp200bp图2-2IV型分泌系统基因的PCR扩增Figure2-2PCRamplificationoftypeIVsecretionsystemgenesLane 1:DNAMarker, Lane 2:negative control; Lane3:virB11:Lane4:virB10:Lane5:virB9:Lane6:virB8Lane7:virB7:Lane8:virB6:Lane9:virB5:Lane10virB4, Lane 11: virB3; Lane 12: virB2; Lane 13: virB1.PCR扩增后，阴性对照成立，其余所有扩增的目标片段条带单一，扩增具有特异性。2008届石河子大学博士研究生论文答辩
virB2, virB3, virB5, virB8的PCR扩增 图2-2 Ⅳ型分泌系统基因的PCR扩增 Figure 2-2 PCR amplification of type Ⅳ secretion system genes Lane 1: DNA Marker; Lane 2: negative control; Lane 3: virB11; Lane 4: virB10; Lane 5: virB9; Lane 6: virB8; Lane 7: virB7; Lane 8: virB6; Lane 9: virB5; Lane 10: virB4; Lane 11: virB3; Lane 12: virB2; Lane 13: virB1. PCR扩增后，阴性对照成立，其余所有扩增的 目标片段条带单一，扩增具有特异性。 实验结果 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验结果019株omp31.virB基因与布鲁氏菌参考株的同源性(%)分析ComparativetypesBrucella strainsXinjiang (virB=B)B2B3B5B8omp31100DNA10099.8699.86B.abortus230899.3710010099.8699.77B.melitensis16M10099.7299.3099.72100B.suis1330100999910098B.ovis63/29010010099.58100IAminoacidB.abortus230810010010010099.65B.melitensis16M10010010098.74100B.suis133010010099.5899.5897.08B.ovis63/2902008届石河子大学博士研究生论文答辩
Comparative types Brucella strains Xinjiang ( virB=B) B2 B3 B5 B8 omp31 DNA B. abortus 2308 100 100 99.86 99.86 / B. melitensis 16M 99.37 100 100 99.86 99.77 B. suis 1330 100 99.72 99.30 99.72 100 B. ovis 63/290 100 100 99 99 98 Amino acid B. abortus 2308 100 100 99.58 100 / B. melitensis 16M 100 100 100 100 99.65 B. suis 1330 100 100 98.74 100 100 B. ovis 63/290 100 100 99.58 99.58 97.08 019株 omp31, virB 基因与布鲁氏菌参考株的同源性(%)分析 实验结果 2008届石河子大学博士研究生论文答辩
实验结果pBS-T-omp31基因片段的酶切M14500bp3000bp.图2-3pBS-T-omp31酶切鉴定2000bpFigure2-3EcoRI/PstIdigestionofpBS-T-omp311200bpLaneM:DNAMarker;Lane2:EcoRI/PstIdigestion of pBS-T-omp31800bp500bp250bp将菌落PCR鉴定为阳性的菌落提质粒进行EcoRI/PstI酶切鉴定得到720bp左右的片段，与目标大小一致。2008届石河子大学博士研究生论文答辩
pBS-T-omp31基因片段的酶切 图2-3 pBS-T-omp31酶切鉴定 Figure 2-3 EcoR I/Pst I digestion of pBS-T-omp31 Lane M: DNA Marker; Lane 2: EcoR I/Pst I digestion of pBS-T-omp31. 实验结果 将菌落PCR鉴定为阳性的菌落提质粒进行EcoR I/Pst I酶切鉴定， 得到720bp左右的片段，与目标大小一致。 2008届石河子大学博士研究生论文答辩