过程:引物3’-OH dnTP→ p引物-dNMP 反应式:DNA+dNTP→(DNA)n+ppi 反应机理:(图11-8加1)磷亲核攻击。 真核与原核中DNA聚合酶(DNA polymorase DNApol 有几种类型,作用方式相同,但各具特性及功能。 1、大肠杆菌DNA聚合酶 (3种)》 (1)pol I: 催化5’→3’的聚合作用,合成 20 个核苷酸即离开模板,填充空隙。 有3’→5’外切酶活性,去除错误碱基的校对 作用。 有5’→3’外切酶活性,去除RNA引物及修正 错
过程:引物3’-OH dNTP ppi 引物-dNMP 反应式:DNA+dNTP (DNA)n+1+ppi 反应机理:(图11-8加1)磷亲核攻击。 真核与原核中DNA聚合酶(DNA polymoraseDNApol 有几种类型,作用方式相同,但各具特性及功能。 1、大肠杆菌DNA聚合酶 (3种) (1)pol : 催化5’3’的聚合作用,合成 20 个核苷酸即离开模板,填充空隙。 有3’ 5’外切酶活性,去除错误碱基的校对 作用。 有5’3’外切酶活性,去除RNA引物及修正 错
酶活性,体内功能不清楚。 (3)pol III: DNA链延长起主要作用,细菌中1000 dNTP/秒加入。 3’→5’外切酶活性,校对作用,与polI配合错 误率降至10-6。(图11-8) (图11-9) (表11-2) (4)DNA复制的保真性: 遵守严格的碱基配对 规律。聚合酶对碱基的选择功能。 聚合酶对错 误碱基的校读(proofread)作用。 2、真核生物ONA pol 特性与大肠杆菌相似,共五种:BYδ8(表11-3) polδ:催化前导链及随从连的合成,需增殖细胞 核抗原蛋白PCNA(proliferatating cell nucleus antigen-PCNA)的参与
酶活性,体内功能不清楚。 (3)pol Ⅲ: DNA链延长起主要作用,细菌中1000 dNTP/秒加入。 3’ 5’外切酶活性,校对作用,与pol 配合错 误率降至10-6。 (图11-8)(图11-9)(表11-2) (4) DNA复制的保真性: 遵守严格的碱基配对 规律。 聚合酶对碱基的选择功能。 聚合酶对错 误碱基的校读(proofread)作用。 2、真核生物DNA pol 特性与大肠杆菌相似,共五种: (表11-3) pol :催化前导链及随从连的合成,需增殖细胞 核抗原蛋白PCNA(proliferatating cell nucleus antigen-PCNA)的参与
PolQ:与引发酶配合,参与随从链的合成。 RFA(replication factor A):DNA延长中RFA与单链结 合 起到SSB的作用。 (三)终止 连接酶(ligase):作用-使相邻的DNA片段,以3’ 5 磷酸二酯键相连,需ATP。 反应原理: (图11-10) P5'-DNA E-AMP E+ATP-→E-AM中间体-→E-AMP-5DNA→DNA-3'-op-5'-DNA Ho-3'-DNA 前导链是连续合成的,随从链在连接酶作用下连成一 条链。 拓扑酶 DNA复制后→DNA超螺旋→装配成染色体(图11-11)
Pol:与引发酶配合,参与随从链的合成。 RFA(replication factor A):DNA延长中RFA与单链结 合 起到SSB的作用。 (三)终止 连接酶(ligase):作用-使相邻的DNA片段,以3’ 5’ 磷酸二酯键相连,需ATP。 反应原理:(图11-10) P5’-DNA E-AMP E+ATP E-AMP中间体 E-AMP-5’DNA DNA-3’-op-5’-DNA Ho-3’-DNA 前导链是连续合成的,随从链在连接酶作用下连成一 条链。 拓扑酶 DNA复制后 DNA超螺旋装配成染色体(图11-11)
三、真核生物复制的特点 1、复制速度:是原核的1/10,但复制起始点多。 2、引物和冈琦片段小于原核,引物为10个,片段 100~200;原核引物十几~几十,片段1000~2000。 3、复制需ONA polz及多种因子参加,pol a polδ在 核内起主要作用。 4、polY为线粒体复制酶。 5、DNA复制位于细胞周期的S期。 第二节反转录作用(reverse transcription) RNA指导下的DNA合成作用,以RNA为模板在反转 录酶催化下,由dNTP聚合成DNA的作用,新生DNA 分子存有RNA基因组的信息。 [体系]RNA模板、反转录酶、引物tRNA、dNTP Zn2
三、真核生物复制的特点 1、复制速度:是原核的1/10,但复制起始点多。 2、引物和冈琦片段小于原核,引物为10个,片段 100~200;原核引物十几~几十,片段1000~2000。 3、复制需DNA pol及多种因子参加, pol pol 在 核内起主要作用。 4、 pol 为线粒体复制酶。 5、 DNA复制位于细胞周期的S期。 第二节 反转录作用(reverse transcription) RNA指导下的DNA合成作用,以RNA为模板在反转 录酶催化下,由dNTP聚合成DNA的作用,新生DNA 分子存有RNA基因组的信息。 [体系] RNA模板、反转录酶、引物tRNA、dNTP Zn2+