试剂浓度%(gm)测定波长(nm)透光率% 碘化钠1.00% 220 <0.8 亚硝酸钠5.00% 280 <0.8 2.对溶剂的要求测定供试品前应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用 m石英吸收池盛溶剂，以空 气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其 吸收度 溶剂和吸收池的 吸收度在220~240nm范围内不得超过0.40；在241~250nm范围内不得超过0.20；在251~300nm 范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。 3.测定法测定时，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规 定的吸收峰波长±2m以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，吸收峰 波长应在规定的波长2m以内，否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收 度最大的波长作为测定波长 般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3一0.7之间的误差较小。仪器的 狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半 否则测 吸收度会 低 狭缝宽度的选择， 应以减 小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池本身可能有空白吸收，因此测定供试品的 吸收度后应减去装有溶剂的吸收池在规定波长测得的吸收度，再计算含量。 紫外分光光度法可用于对药材及其制剂进行定性或定量实验，定性时吸收度读数范围可根据配制 供试液的准确度及制剂的实际含量确定。 用于含量测定的方法一般为： (1)对照品比较法分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品 溶液中 被 成分标示量的10010% 所用溶剂也应完全 致，在规定的波长测定供试品溶液和对照 品溶液的吸收度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： Ci=Ai Cr/Ar 式中：C为供试品溶液的浓度， A为供试品溶液的吸收度 C为对照品溶液的浓度； Ar为对照品溶液的吸收度。 (2)吸收系数法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收 系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 (3)计算分光光度法采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时应注意选择，当吸收度处在 吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽 可能一致。若测定时不用对照品，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。 二)北色法 用比色法测定时，应取对照品同时操作。比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供 试品溶液，依次加入相应的同体积的各种试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和 供试品溶液的吸收度后，按紫外分光光度法的对照品比较法计算式计算供试品浓度。 当吸收度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同 一体积，显色 后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应浓度关系绘制标准曲线，再根据供试品的吸收度在 标准曲线上求出其含量。 (三)红外分光光度法 1.仪器的校正和检定绘制聚苯乙烯薄膜（厚度约为0.05mm)的光谱，用2851cm-1、1601cm-1、 1028cm-1、907cm-1处的吸收峰对仪器的波数进行校正，在2000~400cm-1区间允许相差±4cm-1 以内，在4000~2000cm-1区间允许相差±8cm-1以内. 上述光谱中，仪器的分辨率要求在3110~2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰，2924cm-1与 2851cm-1吸收带约分辨深度不小于18%透光率，1601cm-1与1583cm-1吸收带的分辨深度不小于 8%透光率
试剂 浓度%（g/ml） 测定波长（nm） 透光率% 碘化钠 1.00% 220 ＜0.8 亚硝酸钠 5.00% 280 ＜0.8 2．对溶剂的要求 测定供试品前应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用 1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白(即空白光路中不置任何物质)测定其吸收度，溶剂和吸收池的 吸收度在220～240nm范围内不得超过0.40；在241～250nm范围内不得超过0.20；在251～300nm 范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过O.05。 3．测定法 测定时，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规 定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，吸收峰 波长应在规定的波长±2nm以内，否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收 度最大的波长作为测定波长。一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。仪器的 狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度会偏低；狭缝宽度的选择，应以减 小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，由于吸收池本身可能有空白吸收，因此测定供试品的 吸收度后应减去装有溶剂的吸收池在规定波长测得的吸收度，再计算含量。 紫外分光光度法可用于对药材及其制剂进行定性或定量实验，定性时吸收度读数范围可根据配制 供试液的准确度及制剂的实际含量确定。 用于含量测定的方法一般为； (1)对照品比较法 分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品 溶液中被测成分标示量的100±10％，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照 品溶液的吸收度后，按下式计算供试品中被测溶液的浓度： Ci= Ai Cr / Ar 式中：Ci为供试品溶液的浓度； Ai为供试品溶液的吸收度， Cr为对照品溶液的浓度； Ar为对照品溶液的吸收度。 (2)吸收系数法 配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收 系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。 (3)计算分光光度法 采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时应注意选择，当吸收度处在 吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，影响精度的因素较多，故对照品和供试品测试条件应尽 可能一致。若测定时不用对照品，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。 (二)比色法 用比色法测定时，应取对照品同时操作。比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替对照品或供 试品溶液，依次加入相应的同体积的各种试剂，并用同样方法处理。在规定的波长处测定对照品和 供试品溶液的吸收度后，按紫外分光光度法的对照品比较法计算式计算供试品浓度。 当吸收度和浓度关系不呈线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色 后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应浓度关系绘制标准曲线，再根据供试品的吸收度在 标准曲线上求出其含量。 (三)红外分光光度法 1．仪器的校正和检定 绘制聚苯乙烯薄膜(厚度约为0.05mm)的光谱，用2851cm-1、1601cm-1、 1028cm-1、907cm-1 处的吸收峰对仪器的波数进行校正，在2000～400cm-1区间允许相差±4cm-1 以内，在4000～2000cm-1区间允许相差±8cm-1以内。 上述光谱中，仪器的分辨率要求在3110～2850cm-1范围内应能清晰地分辨出7个峰，2924cm-1与 2851cm-1吸收带约分辨深度不小于18％透光率，1601cm-1与1583cm-1吸收带的分辨深度不小于 8％透光率
2.试样的制备方法和测定按照中华人民共和国卫生部药典委员会编订的《药品红外光谱集》 2000年版)#行 如具有多晶现象的固体药品测定时，由于晶型可能不同，绘制的光谱图可能会发生 改变，应再绘制 由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光 谱的形状。因此，进行光谱对比时 ，应考虑各种因素可能造成的影响】 (四)原子吸收分光光度法 由待测元素灯发出特征的谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，吸收遵 循一般分光光度法的吸收定律。通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素含量。通 常借比较标准品和供试品的吸收度，可求得样品中待测元素的含量。 原子吸收分光光度法所用仪器为原子吸收分光光度计，它由光源、原子化器、单色器和检测器等 部件组成。光源通常用待测作为阴极的空心阴极灯，原子化器由雾化器及燃烧灯头组成。燃烧火焰 气体混合 物立生 常用 空气快火 仪器某些工作条件如波长、狭缝、 业陌业T由 火焰状态的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。 用原子吸收分光光度计对中药材进行含量测定，有下列二法： 1,标准曲线法在议器准荐的浓度范围内，制备含待侧元素的标准溶液至少3份，农度浓次弟僧 并分别加入供试品溶液配制中的相应试剂。 船均用去离子水成水容液. 将仪器按规定启动后 去离子水喷入火焰， 调读数为零 ,再将最浓的标 维溶液喷入火馅 调节仪器至近满标度的 盛后依欢入信标在容液，数每院和份后，去子水态空 调零。取每一浓度3次读数的平均值，与相应浓度作标准曲线。 供试品溶液的制备应使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，将供试品溶液喷入火焰，取3 次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的农度，计元素的含量。 2. 标准加入法取同体积供试品溶液4份，分别加至4个同体积的量瓶中 除(1)号量瓶外，其他(2) (3)、(4)号量瓶分别再准确加入比例量的待测元素标准液，均用去离子水稀释至刻度，形成标准液加 入量从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自"将仪器按规定启动后"操作，并依法将溶液喷 入火焰，读数；将读数与相应的待测元素加入量作图，延长此直线至与含量轴的延长线相交，此交 点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量（如图6-1）。 再据此计算供试品中待 测元素的含量 图6-1标准加入法示意图 六、色谱法 色谱法又称层析法。根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱 等。吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不 用溶剂或气体洗脱使组分分离 常 用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质， 分配色谱是利用被分离物质在两相中 配系数不同，使组分分离，其中一相被涂布或键合在固体载体上称为固定相，另一相为液体或气 体，称为流动相，常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用 被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同，使组分分离；常用的有不同强度的阳、阴离子交换 树脂。 流动相 溶剂的缓冲液 子排阻色谱又称凝胶色谱法，是利用被分 离物质分 量大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离：常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚 合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作流动相。 色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱 法等。所用溶剂应与供试品不起化学反应，纯度要求较高。分析时的温度，除气相色谱法或另有规 定外，系指在室温操作。采用纸色谱、薄层色谱或柱色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区 分：分离无色物质时，可在短波(254nm)或长波(365m)紫外灯下检视，其中纸色谱或薄层色谱也可 喷以显色剂使之显色 或在薄层色谱中用加有荧光物质的薄层硅胶 采用荧光猝灭法检视： 相色 谱法和高效液相色谱法可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测：柱色谱法还可分部收 集流出液后用适宜方法测足
2．试样的制备方法和测定 按照中华人民共和国卫生部药典委员会编订的《药品红外光谱集》 (2000年版)进行。如具有多晶现象的固体药品测定时，由于晶型可能不同，绘制的光谱图可能会发生 改变，应再绘制。 由于各种型号的仪器性能不同，试样制备时研磨程度的差异或吸水程度不同等原因，均会影响光 谱的形状。因此，进行光谱对比时，应考虑各种因素可能造成的影响。 (四)原子吸收分光光度法 由待测元素灯发出特征的谱线通过供试品蒸气时，被蒸气中待测元素的基态原子所吸收，吸收遵 循一般分光光度法的吸收定律。通过测定辐射光强度减弱的程度可求出供试品中待测元素含量。通 常借比较标准品和供试品的吸收度，可求得样品中待测元素的含量。 原子吸收分光光度法所用仪器为原子吸收分光光度计，它由光源、原子化器、单色器和检测器等 部件组成。光源通常用待测作为阴极的空心阴极灯，原子化器由雾化器及燃烧灯头组成。燃烧火焰 由不同种类的气体混合物产生，常用空气-乙炔火焰。仪器某些工作条件如波长、狭缝、光源灯电 流、火焰类型、火焰状态的变化可影响灵敏度、稳定程度和干扰情况。 用原子吸收分光光度计对中药材进行含量测定，有下列二法； 1．标准曲线法 在仪器推荐的浓度范围内，制备含待测元素的标准溶液至少3份，浓度依次递增， 并分别加入供试品溶液配制中的相应试剂。一般均用去离子水制成水溶液。将仪器按规定启动后， 先将去离子水喷入火焰，调读数为零，再将最浓的标准溶液喷入火馅，调节仪器至近满标度的读 数；然后依次喷入每一标准溶液，读数。每喷完1份溶液后，均用去离子水喷入火焰充分冲洗灯头并 调零。取每一浓度3次读数的平均值，与相应浓度作标准曲线。 供试品溶液的制备应使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，将供试品溶液喷入火焰，取3 次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的浓度，计算元素的含量。 2．标准加入法 取同体积供试品溶液4份，分别加至4个同体积的量瓶中，除(1)号量瓶外，其他(2)、 (3)、(4)号量瓶分别再准确加入比例量的待测元素标准液，均用去离子水稀释至刻度，形成标准液加 入量从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自"将仪器按规定启动后"操作，并依法将溶液喷 入火焰，读数；将读数与相应的待测元素加入量作图，延长此直线至与含量轴的延长线相交，此交 点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量(如图6-1)。再据此计算供试品中待 测元素的含量。 图6-1 标准加入法示意图 六、色谱法 色谱法又称层析法。根据其分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱 等。吸附色谱是利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使组分分离，常 用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用被分离物质在两相中分 配系数不同，使组分分离，其中一相被涂布或键合在固体载体上称为固定相，另一相为液体或气 体，称为流动相，常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用 被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同，使组分分离；常用的有不同强度的阳、阴离子交换 树脂，流动相为水或含有机溶剂的缓冲液。分子排阻色谱又称凝胶色谱法，是利用被分离物质分子 量大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离；常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚 合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作流动相。 色谱法又可根据分离方法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱 法等。所用溶剂应与供试品不起化学反应，纯度要求较高。分析时的温度，除气相色谱法或另有规 定外，系指在室温操作。采用纸色谱、薄层色谱或柱色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区 分：分离无色物质时，可在短波(254nm)或长波(365nm)紫外灯下检视，其中纸色谱或薄层色谱也可 喷以显色剂使之显色，或在薄层色谱中用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光猝灭法检视；柱色谱 法、气相色谱法和高效液相色谱法可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测；柱色谱法还可分部收 集流出液后用适宜方法测定
(一纸色谱法 纸色谱法，系以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色 谱。供试品经展开后，可用比移值(RD表示其各组成成分的位置（比移值=原点中心至斑点中心的距 离/原点中心至展开剂前沿的距离，但由于影响比移值的因素较多，因 一般采用在相同实验条件 下与对照物质对比以确定其异同， 作为药： 的鉴别时， 供试品在色 谱中所 主斑点的颜 或荧光)与 位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经 展开后，按药品的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色（或荧光）的强度。作为药品的含量测定 时，将主色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定。 1.仪器与材料 (1)展开室： 通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖 ,应能密闭。用于下行法时 盖上 有孔，可插入分液漏斗，用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器， 槽内有一玻棒，用以压住色谱滤纸，槽的两侧各支一玻棒，用以支持色谱滤纸使其自然下垂，避免 展开剂沿滤纸与溶剂槽之间发生虹吸现象。用于上行法时，在盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬 钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上 并除去溶剂槽和支架 ()点样器：常用具支架的微量注时器或定量手细管，应能使点样位苦正确、集中 (3)滤纸：质地均匀平整，具有一定机械强度，不含影响展开效果的杂质；也不应与所用显色剂起 作用，以致影响分离和鉴别效果，必要时可进行处理后再用。 用于下行时，取色谱虑纸按纤维长 丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端活当的距离（使色谱纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂 并使点样基线能在 溶剂槽侧的玻璃支持 棒下数厘米处)用铅笔划 一点样基线，必 在色谐 滤纸下端切成锯齿形便于展开剂滴下。用于上行法时，色谱滤纸长约25cm,宽度则按需要而定，必 要时可将色谱纸卷成筒形；点样基线距底边约2.5cm。 2.操作方法 (1)下行法：将供试品溶解于适当的溶剂中制成一定浓度的溶液。 用微量吸管或微量注射器吸取溶 液，点于点样基线上 溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、 低温烘干或温热气流吹干 样点直径为2~4mm,点间距离约为1.5~2.0cm,样点通常应圆形。 则玻璃支持棒自然下垂 般可在展开室底 部放一装有规定溶剂的平皿或将浸有规定溶剂的滤纸条附着在展开室内壁上，放置一定时间，俟溶 剂挥发使室内充满饱和蒸气。然后添加展开剂使浸没溶剂槽内的滤纸，展开剂即经毛细管作用沿滤 纸移动进行展开 展开至规定的距离后，取出滤纸，标明展开剂前沿位置 俟展开剂挥散后按规定 方法检出色谱斑 (2)上行法：点样方法同下行法。展开室内加入展开活量，放展开蒸气知后，庙下降 使色谱滤纸浸入展开剂约0.5cm, 展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升 般展开至约15cn 后，取出晾干，进行检视 展开可以向 个方向进行 ,即单向展开：也可进行双向展开，即先向 一个方向展开，取出，俟展 开剂完全挥发后 ,将滤纸转动900，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开：亦可多次展开、连续展 开或径向展开等】 (二)薄层色谱法 薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝片上，成一均匀薄层。待点样 展开后 适宜的对照物按同法在同板上 得的色谱图作对比.并可用薄层扫描仪进行扫描，用以 进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料 (1)玻板：一般多用10cm×10cm,1Ocm×15cm,20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求平滑. 平整，洗净后不附水珠，晾干。 (2)吸附剂或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254,其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素 “微晶纤维系F254等。其颗粒大小一般要求直径为10~40μm
(一)纸色谱法 纸色谱法，系以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色 谱。供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置(比移值＝原点中心至斑点中心的距 离／原点中心至展开剂前沿的距离)，但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件 下与对照物质对比以确定其异同。作为药品的鉴别时，供试品在色谱中所显主斑点的颜色(或荧光)与 位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药品的纯度检查时，可取一定量的供试品，经 展开后，按药品的规定，检视其所显杂质斑点的个数或呈色(或荧光)的强度。作为药品的含量测定 时，将主色谱斑点剪下洗脱后，再用适宜的方法测定。 1．仪器与材料 (1)展开室：通常为圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖，应能密闭。用于下行法时，盖上 有孔，可插入分液漏斗，用以加入展开剂。在近顶端有一用支架架起的玻璃槽作为展开剂的容器， 槽内有一玻棒，用以压住色谱滤纸，槽的两侧各支一玻棒，用以支持色谱滤纸使其自然下垂，避免 展开剂沿滤纸与溶剂槽之间发生虹吸现象。用于上行法时，在盖上的孔中加塞，塞中插入玻璃悬 钩，以便将点样后的色谱滤纸挂在钩上；并除去溶剂槽和支架。 (2)点样器：常用具支架的微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确、集中。 (3)滤纸：质地均匀平整，具有一定机械强度，不含影响展开效果的杂质；也不应与所用显色剂起 作用，以致影响分离和鉴别效果，必要时可进行处理后再用。用于下行法时，取色谱滤纸按纤维长 丝方向切成适当大小的纸条，离纸条上端适当的距离(使色谱纸上端能足够浸入溶剂槽内的展开剂 中，并使点样基线能在溶剂槽侧的玻璃支持棒下数厘米处)用铅笔划一点样基线，必要时，可在色谱 滤纸下端切成锯齿形便于展开剂滴下。用于上行法时，色谱滤纸长约25cm，宽度则按需要而定，必 要时可将色谱纸卷成筒形；点样基线距底边约2.5cm。 2．操作方法 (1)下行法：将供试品溶解于适当的溶剂中制成一定浓度的溶液。用微量吸管或微量注射器吸取溶 液，点于点样基线上，溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或温热气流吹干， 样点直径为2～4mm，点间距离约为1.5～2.0cm，样点通常应圆形。 将点样后的色谱滤纸上端放在溶剂槽内并用玻棒压住，使色谱纸通过槽侧玻璃支持棒自然下垂， 点样基线在支持棒下数厘米处。展开前，展开室内用适宜的溶剂蒸气使之饱和，一般可在展开室底 部放一装有规定溶剂的平皿或将浸有规定溶剂的滤纸条附着在展开室内壁上，放置一定时间，俟溶 剂挥发使室内充满饱和蒸气。然后添加展开剂使浸没溶剂槽内的滤纸，展开剂即经毛细管作用沿滤 纸移动进行展开，展开至规定的距离后，取出滤纸，标明展开剂前沿位置，俟展开剂挥散后按规定 方法检出色谱斑点。 (2)上行法：点样方法同下行法。展开室内加入展开剂适量，放置俟展开剂蒸气饱和后，再下降悬 钩，使色谱滤纸浸入展开剂约0.5cm，展开剂即经毛细管作用沿色谱滤纸上升，一般展开至约15cm 后，取出晾干，进行检视。 展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，俟展 开剂完全挥发后，将滤纸转动90o，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开、连续展 开或径向展开等。 (二)薄层色谱法 薄层色谱法，系将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝片上，成一均匀薄层。待点样、 展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图作对比．并可用薄层扫描仪进行扫描，用以 进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1．仪器与材料 (1)玻板：一般多用10cm×10cm，1Ocm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求平滑、 平整，洗净后不附水珠，晾干。 (2)吸附剂或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土 G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维系F254等。其颗粒大小一般要求直径为l0～40μm
薄层涂布，一般可分为无粘合剂和含粘合剂两种，前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后 者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂， 般常用10%~15%煅石膏(CaS042H20在140C烘 4小时) 混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2%~0.5%)适量调成糊状，均匀涂布 于玻璃上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。 (3)涂布器：应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层 (4)点样器：一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材 (⑤)展开室：可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平坦或有双槽，盖子须密闭。 2.操作方法 (1薄层板制备 一般将一份吸附剂和三份水在研钵中向一方向研磨混合 ,去除表面的气泡后，倒 入涂布器中 在玻板上平 急地移动涂 器进行涂布（厚度为0,25~0.5 m),取涂好薄层 的玻板， 于室 温下，置水平台上晾干，在透射光和反射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破 及亏染，于110C洪30分钟，冷知后即使用或置干@箱中备用。也可用商品预制板. (2)点样 用点样器点样于薄层板上， 般为圆点，点样基线距底边1.0~1.5cm,样点直径一般不 大于3m,点样距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必需注意勿损伤薄层表面。 (3)展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，切 勿将样点浸入展开剂中，密封，待展开至规定距离， -般为815cm,取出薄层板，晾干，进行检 测 展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时在壁上贴二条与缸一样 高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。 3. 薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检 查或含量测定。 薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采 用吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果 的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与 对照品同板点样，展开，扫描， 测量和计算 用外标法视侧定时，苦对照品客数据点在校正曲线上早一涌讨原点的直线村，可用一点法校正，如 不通过原点，通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。含量测定时，供试品溶液和对照品溶液 应交叉点于同 薄层扳上 供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得影 于2个 薄层扫描定量 用的对照品纯度应符合含量则足用对照品的要求。 4.影响薄层色谱分析的因素薄层色谱法是目前中药鉴别应用最广的一种鉴别方法，但影响薄层 色谱法分析效果的因素很多。 (1)样品的预处理及供试液的制备 般认为薄层色谱所用固定相（薄层板）可即用即弃，不怕供试 液中杂质的污染，因而样品无需净化精制，在实践中，由于中药的成分复杂，未知成分多，供试液 中溶出的物质较多，其中既有欲测成分也有其他"杂质” 常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意 的分离效果，甚至难以辨认，尤其成方制剂更是如此。为了得到 个较为青析的色谱，样品提取物 经预冰理体仕式随得】鱼火体往是 个重要的有时甚至是关键的步骤。 制备样品供试液所用的 溶剂一般要求溶解度不宜 太大 粘度不宜太高 沸点适中， 而对于中药材又常常希望将成分尽可 多的被提取出来，所以常被选用的是甲醇或乙醇，因此欲测成分和许多其他"杂质”均被提取出来，供 试液的净化就显得更为必要。例如一捻金中人参二醇及人参三醇的鉴别，若是用稀酸水解后直接用 氯仿萃取，点样层析，色谱因大黄成分的干扰，致使人参二醇及人参三醇的斑点很难辨认，经碱性 氧化铝小柱吸附净化后，除去了大部分干扰， 结里鱼谱清浙 人参 二醇及人参三醇很容易辨认。 样品供试液净化的方法：①单一溶剂萃取法如浙贝母、洋金花等含生物碱类成分的中药材可利用 在碱性介质下用氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃取出而舍弃其他成分。 使世试液得净化 先用 己烷萃取 供鉴别当 继用丙酮萃取 共鉴别马兜铃酸（关木 以鉴别龙胆苦苷，是利用了各自不同的溶解度，用
薄层涂布，—般可分为无粘合剂和含粘合剂两种，前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后 者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘 4小时)，混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.2％～0.5％)适量调成糊状，均匀涂布 于玻璃上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。 (3)涂布器：应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 (4)点样器：一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 (5)展开室：可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平坦或有双槽，盖子须密闭。 2．操作方法 (1)薄层板制备：一般将一份吸附剂和三份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒 入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(厚度为0.25～0.5mm)，取涂好薄层的玻板，于室 温下，置水平台上晾干，在透射光和反射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损 及污染，于110℃烘30分钟，冷却后即使用或置干燥箱中备用。也可用商品预制板。 (2)点样： 用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不 大于3mm，点样距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必需注意勿损伤薄层表面。 (3)展开：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，切 勿将样点浸入展开剂中，密封，待展开至规定距离，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，进行检 测。 展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时在壁上贴二条与缸一样 高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡。 3．薄层扫描法 指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点， 或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检 查或含量测定。 薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采 用吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果 的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与 对照品同板点样，展开，扫描，测量和计算。 用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如 不通过原点，通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。含量测定时,供试品溶液和对照品溶液 应交叉点于同一薄层扳上，供试品点样不得少于4个，对照品每一浓度不得少于2个，薄层扫描定量 用的对照品纯度应符合含量测定用对照品的要求。 4．影响薄层色谱分析的因素 薄层色谱法是目前中药鉴别应用最广的一种鉴别方法，但影响薄层 色谱法分析效果的因素很多。 (1)样品的预处理及供试液的制备：一般认为薄层色谱所用固定相(薄层板)可即用即弃，不怕供试 液中杂质的污染，因而样品无需净化精制，在实践中，由于中药的成分复杂，未知成分多，供试液 中溶出的物质较多，其中既有欲测成分也有其他"杂质"，常由于相互干扰或背景污染而难以得到满意 的分离效果，甚至难以辨认，尤其成方制剂更是如此。为了得到一个较为清晰的色谱，样品提取物 经预处理，使供试液得以净化，往往是一个重要的有时甚至是关键的步骤。制备样品供试液所用的 溶剂一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸点适中，而对于中药材又常常希望将成分尽可能 多的被提取出来，所以常被选用的是甲醇或乙醇，因此欲测成分和许多其他"杂质"均被提取出来，供 试液的净化就显得更为必要。例如一捻金中人参二醇及人参三醇的鉴别，若是用稀酸水解后直接用 氯仿萃取，点样层析，色谱因大黄成分的干扰，致使人参二醇及人参三醇的斑点很难辨认，经碱性 氧化铝小柱吸附净化后，除去了大部分干扰，结果色谱清晰，人参二醇及人参三醇很容易辨认。 样品供试液净化的方法：①单一溶剂萃取法 如浙贝母、洋金花等含生物碱类成分的中药材可利用 在碱性介质下用氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃取出而舍弃其他成分。使供试液得以净化。 ②分段萃取法 如龙胆泻肝丸先用正己烷萃取，供鉴别当归用；继用丙酮萃取，供鉴别马兜铃酸(关木 通)：最后用甲醇萃取再经氧化铝小柱甲醇洗脱，以鉴别龙胆苦苷，是利用了各自不同的溶解度，用
不同极性的溶剂分段萃取，达到样品供试液净化的目的。③液液萃取法小儿化毒散中牛黄的鉴别， 先用稀碱液将胆酸类成分溶出用醋酸乙酯洗涤 庙在酸性条件下田酷了酯双甘他成 分和杂质的干扰， ④固液萃取法 如八珍丸 用硅藻土研匀，在固态下用溶剂萃取 ,以去除蜜糖的 干扰。或将样品的水提取液（固定相）加入硅藻土小柱中使之成为"固态”，再用适当的溶剂（移动相）通 过硅藻土小柱萃取，萃取液再经浓缩等处理后作为供试液。用固液萃取或洗脱的方法制备样品是色 谱分析常用的方法，目前常用的还有化学键合相小柱，如硅烷化硅胶小柱C-8,C-18小柱)、氨基键 合相小柱、腈基键合相小柱以及硅胶小柱、氧化铝小柱 珠密小大相脂小牡筚 母草是用活性炭和中性氧化铝混合小柱，国公酒（辛弗林）用阳离 子交换树脂柱。用氧化铝须注意颗 不可太粗或太细（一般可用100~120目），活性能保持在2~3级，用适当的玻璃小柱（如5m及10ml注 射针筒装填。氧化铝吸附力较强，选用时应有针对性。 (2)薄层色谱的点样技术：点样是薄层色谱分析的第一步，也是非常关键的一步。它既关系到能否 得到可以重现的有良好分离度的薄层色谱，也关系到定量测定结果的准确，因为不良的点样是最主 要的误差来源 薄层板的原点位置对样品量的负荷量是极为有限的，如点样量过大将明显降低分离效率。中药供 试液中一般被测成分与"杂质"共存，尤其被测成分含量较低而其他干扰物质较为大量时，常常习惯于 或不得不加大点样的量，另一方面也是由于对点样量超负荷的严重后果认识不足。预制板硅胶颗粒 细（常规预制板11 12μm,高效预制板5 ~7m)而均匀 明显提高了分离效率 对点样的要求更高 了。如常规预制板展距00mm,原点直径3mm,展开后如斑点直径扩散到6mm,则斑点容量或分离 数SN=10,而用高效预制板原点直径1mm,展开50mm,斑点直径如扩散为2mm,则SN=15。但 如果点样量不适当地加大，如在高效板上原点直径点成3mm,展开50mm后斑点扩散为4mm,结果 SN=6.即使证长5至100 ,SN也仅仅达到11，不可能达到15。由此可见即使使用高质量的薄 层板 如点样 不适当地加大，分辨率也同样不会得到提高。这就是为什么要求点样 点直径应尽 量小于3mm的原 溶解样品的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点位置就呈环形展开 ,原 点直径的扩散促进了这种展开，即所谓"点样环形色谱效应” 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变 成空心圈，这种效应对随后的线性展开造成很不利的影响。所以原则上应选择对被测成分可以溶 解，但溶解度不是很大的溶剂，中药成分复杂，难以兼顾，不可能面面俱到，通常在欲测成分不甚 清楚或待测成分看盖的极性范围很宽的情况下 ,宁愿选择溶解"范围"较宽的溶剂 如甲醇☑醇等 有的品种欲测成分明确 如苦 母中的 生物碱 术酮等可有针对性地选择 溶剂。 有 的品种选用了乙醚，由于乙醚沸点很低，最终的供试液则需要低温挥去乙醚后，改用其他合适的溶 剂制成 供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂极性与展开剂的溶剂 极性相差较大时更为明显，再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分（特别在高湿度环境）对色 谱质量的影响也不可低估。因此点样时同步干燥或点样后继续干燥以除去原点残存的溶剂是需要 的。但应尽可能避免高温加热， 免偶快不稳定的成分公的破环成促讲硅胶有催化作用的舌性表面起 固态化学反应，导致样品中某些成分的变性 点样装苦（微量手细管或色谱注射器）请层表面的机械枴伤对色普质量尤其付定量分析影向很大。特 别是已载有样品的硅胶表面颗粒被划伤或刮除 后果就更严重】 辟002 m外径0.3n m的注射 针头在薄层表面施加5g的机械力，表面局部承受的压力为30Pa, 足以造成硅胶薄层表面的损伤，对 板面较软的硅胶G薄层板损伤更严重。对如硅胶G这种软板虽然划伤表面难以避免（所以不太适合定量 分析)，但点样时小心操作把损伤降低到最低限度还是可以做到的。近年来，点样器械和点样技术的 不断更新和改进已使点样质量得到很大的提高。 提高点样起作水平是获得高质量色普的关建之一 一个组成简单的样品的鉴别比交容易，一般只 要在同一薄层板上供试样品与对照品在相同位置上显相同的斑点就基本上达到目的。但成分复杂的 中药材样品的鉴别除检出特定的成分以外 常常需要以整个色谱与对照药材的色谱作比较，其至要 依靠薄层指纹图谱才能达到准确鉴别的日的。 因此高质量的点样不仅是定量分析的需要、也是定性 分析的要求
不同极性的溶剂分段萃取，达到样品供试液净化的目的。③液液萃取法 小儿化毒散中牛黄的鉴别， 先用稀碱液将胆酸类成分溶出用醋酸乙酯洗涤，再在酸性条件下，用醋酸乙酯萃取，以减少其他成 分和杂质的干扰。④固液萃取法 如八珍丸，先用硅藻土研匀，在固态下用溶剂萃取，以去除蜜糖的 干扰。或将样品的水提取液(固定相)加入硅藻土小柱中使之成为"固态"，再用适当的溶剂(移动相)通 过硅藻土小柱萃取，萃取液再经浓缩等处理后作为供试液。用固液萃取或洗脱的方法制备样品是色 谱分析常用的方法，目前常用的还有化学键合相小柱，如硅烷化硅胶小柱(C-8，C-18小柱)、氨基键 合相小柱、腈基键合相小柱以及硅胶小柱、氧化铝小柱、聚酰胺小柱及大孔树脂小柱等。此外，益 母草是用活性炭和中性氧化铝混合小柱，国公酒(辛弗林)用阳离子交换树脂柱。用氧化铝须注意颗粒 不可太粗或太细(一般可用100～120目)，活性能保持在2～3级，用适当的玻璃小柱(如5ml及10ml注 射针筒)装填。氧化铝吸附力较强，选用时应有针对性。 (2)薄层色谱的点样技术：点样是薄层色谱分析的第一步，也是非常关键的一步。它既关系到能否 得到可以重现的有良好分离度的薄层色谱，也关系到定量测定结果的准确，因为不良的点样是最主 要的误差来源。 薄层板的原点位置对样品量的负荷量是极为有限的，如点样量过大将明显降低分离效率。中药供 试液中一般被测成分与"杂质"共存，尤其被测成分含量较低而其他干扰物质较为大量时，常常习惯于 或不得不加大点样的量，另一方面也是由于对点样量超负荷的严重后果认识不足。预制板硅胶颗粒 细(常规预制板11～12μm ，高效预制板5～7μm)而均匀，明显提高了分离效率，对点样的要求更高 了。如常规预制板展距l00mm，原点直径3mm，展开后如斑点直径扩散到6mm，则斑点容量或分离 数SN＝10，而用高效预制板原点直径1mm，展开50mm，斑点直径如扩散为2mm，则SN＝15。但 如果点样量不适当地加大，如在高效板上原点直径点成3mm，展开50mm后斑点扩散为4mm，结果 SN＝6，即使延长展距至100mm，SN也仅仅达到11，不可能达到15。由此可见即使使用高质量的薄 层板，如点样量不适当地加大，分辨率也同样不会得到提高。这就是为什么要求点样原点直径应尽 量小于3mm的原因。 溶解样品的溶剂均有不同程度的洗脱力，所以在点样的同时，样品在原点位置就呈环形展开，原 点直径的扩散促进了这种展开，即所谓"点样环形色谱效应"，如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变 成空心圈，这种效应对随后的线性展开造成很不利的影响。所以原则上应选择对被测成分可以溶 解，但溶解度不是很大的溶剂，中药成分复杂，难以兼顾，不可能面面俱到，通常在欲测成分不甚 清楚或待测成分覆盖的极性范围很宽的情况下，宁愿选择溶解"范围"较宽的溶剂，如甲醇、乙醇等。 有的品种欲测成分明确，如苦参、贝母中的生物碱、白术中的苍术酮等可有针对性地选择溶剂。有 的品种选用了乙醚，由于乙醚沸点很低，最终的供试液则需要低温挥去乙醚后，改用其他合适的溶 剂制成。 供试液的溶剂在原点的残留，也会改变展开的选择性，特别是供试液的溶剂极性与展开剂的溶剂 极性相差较大时更为明显，再者，亲水性溶剂残留在原点吸收大气中的水分(特别在高湿度环境)对色 谱质量的影响也不可低估。因此点样时同步干燥或点样后继续干燥以除去原点残存的溶剂是需要 的。但应尽可能避免高温加热，以免遇热不稳定的成分的破坏或促进硅胶有催化作用的活性表面起 固态化学反应，导致样品中某些成分的变性。 点样装置(微量毛细管或色谱注射器)薄层表面的机械损伤对色谱质量尤其对定量分析影响很大。特 别是已载有样品的硅胶表面颗粒被划伤或刮除，后果就更严重。一个壁厚0.02mm外径0.3mm的注射 针头在薄层表面施加5g的机械力，表面局部承受的压力为30Pa，足以造成硅胶薄层表面的损伤，对 板面较软的硅胶G薄层板损伤更严重。对如硅胶G这种软板虽然划伤表面难以避免(所以不太适合定量 分析)，但点样时小心操作把损伤降低到最低限度还是可以做到的。近年来，点样器械和点样技术的 不断更新和改进已使点样质量得到很大的提高。 提高点样操作水平是获得高质量色谱的关键之一，一个组成简单的样品的鉴别比较容易，一般只 要在同一薄层板上供试样品与对照品在相同位置上显相同的斑点就基本上达到目的。但成分复杂的 中药材样品的鉴别除检出特定的成分以外，常常需要以整个色谱与对照药材的色谱作比较，甚至要 依靠薄层"指纹图谱"才能达到准确鉴别的目的。因此高质量的点样不仅是定量分析的需要、也是定性 分析的要求