1.单光束分光光度计 其光路示意图如前面的图27所示,经单色器分光后的一束平行光,轮流通过参比溶液和 样品溶液,以进行吸光度的测定。这种简易型分光光度计结构简单,操作方便,维修容易,适 用于常规分析.国产722型、751型、724型、英国SP500型以及 Backman Du-8型等均属于 此类光度计 2.双光束分光光度计 其光路示意于图28,经单色器分光后经反射镜(M)分解为强度相等的两束光,一束通 过参比池,另一束通过样品池.光度计能自动比较两束光的强度,此比值即为试样的透射 光经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计般都能 自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品池还能自动消除光源强度 变化所引起的误差。这类仪器有国产710型、730型和740型等 转装置 光源 光电倍增管 样品池 图28单波长双光束分光光度计原理图 M,M2,M,M4一反射镜 3.双波长分光光度计 其基本光路如图29所示,由同一光源发出的光被分成两束,分别经过两个单色器,得到 单色器 光源 捡测器 单色器 切光器吸收池 图29双波长分光光度计光路示意图 两束不同波长(x1和入2)的单色光;利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池 然后经过光电倍增管和电子控制系统,最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值 △A(△A=A1,-A4,对于多组分混合物混浊试样(如生物组织液)分析,以及存在背景干扰或 共存组分吸收干扰的情况下,利用双波长分光光度法,往往能提高方法的灵敏度和选择性 利用双波长分光光度计,能获得导数光谱。通过光学系统转换,使双波长分光光度计能很方 便地转化为单波长工作方式,如果能在1和x2处分别记录吸光度随时间变化的曲线,还能进 行化学反应动力学研究 (三)分光光度计的校正 通常在实验室工作中,验收新仪器或仪器使用过一段时间后都要进行波长校正和吸光度校
正。建议釆用下述的较为简便和实用的方法来进行校正 镨钕玻璃或钬玻璃都有若干特征的吸收峰,可用来校正分光光度计的波长标尺,前者用于 可见光区,后者则对紫外和可见光区都适用 可用K2CO,标准溶液来校正吸光度标度,将00400gK2CTO4溶解于1dm3的 005mol·dm-3KOH溶液中,在1cm光程的吸收池中,在25℃时用不同波长测得的吸光度 值列于表21 表2.1铬酸钾溶液的吸光度 ↓m吸龙度A[Am吸光度4吸光度Am吸光度A 0.1675 310 00458 06841 0.49 0.34 0.1261 0.7447 0.5528 0.D841 0.8297 04295 370 09914 00325 24分析条件的选择 为使分析方法有较高的灵敏度和准确度,选择最佳的测定条件是很重要的。这些条件包 括仪器测量条件、试样反应条件以及参比溶液的选择等 (一)仪器测量条件 任何光度计都有一定的测量误差,这是由于光源不稳定、实验条件的偶然变动、读数不 准确等因素造成的.这些因素对于试样的测定结果影响较大,特别是当试样浓度较大或较 小时。因此要选择适宜的吸光度范围,以使测量结果的误差尽量减小。根据 Lambert-Ber 定律 A=-IgT=alc 微分后得 GigT=0.4343-="eldc 或 0434347 el△c (217) 将(217)式代人 Lambert-Ber定律,则测定结果的相对误差为 △c_0434△T IgT (218) 要使测定结果的相对误差(△c/c)最小,对T求导数应有一极小值,即 a「0471=04347g+049)-0 TlgT (TigT) 解得 lgT=-0.434或T=36.8%