第一章植物生物学实验基础第一节显微镜的构造和使用一、显微镜的基本构造以实验室使用的双目光学显微镜为例，介绍显微镜的各部分构造。目镜铰链式双目镜筒镜臂物镜转换器物镜聚光镜载物台粗调螺旋细调螺旋光源开关镜座图1XZ-212型生物显微镜（铰链式双目镜筒）一侧视度圈镜筒紧固螺钉调焦轴紧固环（禁止动）电源线集光镜玻片推进器镜座图2XZ-212型生物显微镜（铰链式双目镜筒）对侧1
1 第一章 植物生物学实验基础 第一节 显微镜的构造和使用 一、显微镜的基本构造 以实验室使用的双目光学显微镜为例，介绍显微镜的各部分构造。 图 1 XZ-212 型生物显微镜（铰链式双目镜筒）一侧 图 2 XZ-212 型生物显微镜（铰链式双目镜筒）对侧 目 镜 物镜转换器 物 镜 聚光镜 载物台 镜 臂 粗调螺旋 细调螺旋 光源开关 镜 座 玻片推进器 镜 座 集光镜 电源线 调焦轴紧固环（禁止动） 视度圈 镜筒紧固螺钉 铰链式双目镜筒
玻片夹孔径光阑聚光器调节旋钮图3XZ-212型生物显微镜（铰链式双目镜筒）底部放大倍数10/0.2500/1.25数值孔径160/160/0.1中玻片厚度机械筒长（mm）2004图4XZ-212型生物显微镜物镜数字的意义双目筒间距（mm）图5XZ-212型生物显微镜目镜筒2
2 图 3 XZ-212 型生物显微镜（铰链式双目镜筒）底部 图 4 XZ-212 型生物显微镜物镜数字的意义 图 5 XZ-212 型生物显微镜目镜筒 孔径光阑 聚光器调节旋钮 玻片夹 放大倍数 数值孔径 玻片厚度 机械筒长(mm) 双目筒间距(mm)
二、显微镜的使用方法显微镜是结构精密的仪器，价值非常贵重，使用必须十分小心，切忌粗心大意，保证安全，高度警惕，防止损坏。显微镜的使用包括对光和调焦两个方面。做到用好显微镜，就一定要严格遵守下列操作规程：1.取镜：要右手紧握镜臂，左手托稳镜座，镜体保持垂直平衡不得震动，严防目镜，反光镜（均为插入式安装）甩落地面和粗调节器的脱口等损伤。将显微镜放置离桌边10公分处，镜臂对准胸前。2．为了保持显微镜各部件的正常功能，要注意清洁，避免潮湿和灰尘。镜体机械部分用纱布擦拭，光学系统部分用镜头刷清洁后，再用镜头纸轻轻擦拭。如镜头特别污浊，则需要用清洁剂清洁镜头，这时用擦镜纸蘸少许来擦拭镜头。3.对光：第一步：检查显微镜电源开关，使其关闭：接通电源，打开开关至最大，然后，稍回一下开关转轮。第二步：用粗调节器将载物台提升到适当位置（9cm），然后转动物镜转换盘，将低倍镜（4X）对准镜台孔，转动转换盘时注意不要用力过猛，同时必须用物镜转换盘的边缘转动，切忌扳住镜头转换不同倍数的镜头，否则易使镜头光轴偏斜，而损伤显微镜的功能。第三步：扳动铰链镜筒，调整镜筒间距，使其与个人的瞳孔距重合。第四步：轻轻拨动虹彩光圈拨杆打开光圈，一边双眼对准接目镜观察，直至视野最为明亮呈乳白色为止。对好光后不准再移动显微镜的位置。4.低倍镜观察（对焦/调焦）：将制好的切片，置镜台上，使材料对准镜台孔中央位置，用玻片夹固定住切片。将低倍镜对准通光孔，使用粗调节器将载物台徐徐向上（低于9mm工作距离）此时从左侧观看镜头切勿接近切片，接着双眼观目镜，转动粗调节器，缓缓下降载物台直至观察到清晰物象为止。5.高倍镜观察：3
3 二、显微镜的使用方法 显微镜是结构精密的仪器，价值非常贵重，使用必须十分小心，切忌粗心大意，保 证安全，高度警惕，防止损坏。显微镜的使用包括对光和调焦两个方面。做到用好显微 镜，就一定要严格遵守下列操作规程： 1．取 镜： 要右手紧握镜臂，左手托稳镜座，镜体保持垂直平衡不得震动，严防目镜，反光镜 （均为插入式安装）甩落地面和粗调节器的脱口等损伤。将显微镜放置离桌边 10 公分 处，镜臂对准胸前。 2．为了保持显微镜各部件的正常功能，要注意清洁，避免潮湿和灰尘。镜体机械部分用纱 布擦拭，光学系统部分用镜头刷清洁后，再用镜头纸轻轻擦拭。如镜头特别污浊，则需 要用清洁剂清洁镜头，这时用擦镜纸蘸少许来擦拭镜头。 3．对 光： 第一步：检查显微镜电源开关，使其关闭；接通电源，打开开关至最大，然后， 稍回一下开关转轮。 第二步：用粗调节器将载物台提升到适当位置（9cm），然后转动物镜转换盘， 将低倍镜（4X）对准镜台孔，转动转换盘时注意不要用力过猛，同时必须用物镜转换 盘的边缘转动，切忌扳住镜头转换不同倍数的镜头，否则易使镜头光轴偏斜，而损伤 显微镜的功能。 第三步：扳动铰链镜筒，调整镜筒间距，使其与个人的瞳孔距重合。 第四步：轻轻拨动虹彩光圈拨杆打开光圈，一边双眼对准接目镜观察，直至视 野最为明亮呈乳白色为止。 对好光后不准再移动显微镜的位置。 4．低倍镜观察（对焦/调焦）： 将制好的切片，置镜台上，使材料对准镜台孔中央位置，用玻片夹固定住切片。 将低倍镜对准通光孔，使用粗调节器将载物台徐徐向上（低于 9mm 工作距离）此 时从左侧观看镜头切勿接近切片，接着双眼观目镜，转动粗调节器，缓缓下降载物台， 直至观察到清晰物象为止。 5．高倍镜观察：
低倍镜观察后，需要再用高倍镜（40X）观察时，先将所要观察材料的部位对准视场中央。将镜头转到高倍镜，使用高倍镜调焦时，细调节器只能转动半周，绝对不准超过180度，细调节器是镜体中最精密部件，万万保护好。观察完，取片前一定将镜头换到低倍镜后再抽片，以防磨损镜头。6.聚光器的使用：聚光器聚集反光镜的光线，增强照明度。在低倍镜下不用聚光器，使用高倍镜时必须熟练地配合使用聚光器。转动聚光器，并适当的提升或下降聚光器，调节视野明暗强度，方能观察到清晰的物象。7．使用显微镜结束后，做到镜头、镜臂、聚光镜、反光镜退回原来的位置。戴好防尘罩。4
4 低倍镜观察后，需要再用高倍镜（40X）观察时，先将所要观察材料的部位对准视 场中央。将镜头转到高倍镜，使用高倍镜调焦时，细调节器只能转动半周，绝对不准超 过 180 度，细调节器是镜体中最精密部件，万万保护好。 观察完，取片前一定将镜头换到低倍镜后再抽片，以防磨损镜头。 6．聚光器的使用： 聚光器聚集反光镜的光线，增强照明度。在低倍镜下不用聚光器，使用高倍镜时必 须熟练地配合使用聚光器。转动聚光器，并适当的提升或下降聚光器，调节视野明暗强 度，方能观察到清晰的物象。 7. 使用显微镜结束后，做到镜头、镜臂、聚光镜、反光镜退回原来的位置。戴好防尘罩
第二节植物生物学实验常用试剂一、1%碘一碘化钾(I-KI)(Iodinepotassiumiodide）溶液1、作用：能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。用于淀粉鉴定要再稀释3～5倍，如果用于观察淀粉粒上的轮纹，需稀释100倍。2、配制：配方：碘化钾3g；蒸馏水100ml；碘1g。先将碘化钾溶于蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解，将此液保存在棕色玻璃瓶内。二、苏丹IⅢI(SudanIII或IV)1、作用：能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或橙红色。2、配制：方法一：干粉0.1g；95%酒精10ml：过滤后再加入10ml甘油。方法二：干粉1g，溶于100ml70%的乙醇中。三、中性红（Neutralred）溶液1、作用：用于染细胞中的液泡、细胞质和细胞壁，可鉴定细胞死活。2、配制：中性红0.1g溶于蒸馏水100ml中。3、用法：使用时再稀释10倍左右。染色后，如用偏酸性溶液（如蒸馏水）冲洗，活细胞的细胞壁成红色，液泡无色；死细胞的细胞核和细胞质呈红色。四、钉红(Rutheniumred)染液1、作用：钉红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。2、配制：钉红5—10mg溶于蒸馏水25—50ml。五、番红(SafraninO)1、作用：番红为碱性染料，适用于染木质化、角质化、栓质化的细胞壁，对细胞核中染色质、染色体、核仁和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色，与橘红G、结晶紫作三重染色。2、配制：（1)番红水溶液番红1g；蒸馏水100ml(2)番红酒精溶液番红1g：50%（或95%)酒精100ml(3）苯胺番红酒精染色液甲液：番红5g，95%酒精50ml；乙液：苯胺20ml，蒸馏水450ml。将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。六、固绿(Fastgreen)1、作用：又名快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁和细胞质染成鲜艳5
5 第二节 植物生物学实验常用试剂 一、1% 碘－碘化钾(I-KI)(Iodine potassium iodide) 溶液 1、作用：能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 用于淀粉鉴定要再稀释 3～5 倍，如果用于观察淀粉粒上的轮纹，需稀释 100 倍。 2、配制：配方：碘化钾 3g； 蒸馏水 100ml； 碘 1g 。先将碘化钾溶于蒸馏水中， 待全溶解后再加碘，振荡溶解，将此液保存在棕色玻璃瓶内。 二、苏丹Ⅲ (Sudan Ⅲ 或 Ⅳ) 1、作用：能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或橙红色。 2、配制：方法一：干粉 0.1g；95％酒精 10 ml；过滤后再加入 10 ml 甘油。 方法二：干粉 1 g, 溶于 100ml 70% 的乙醇中。 三、中性红 (Neutral red) 溶液 1、作用：用于染细胞中的液泡、细胞质和细胞壁，可鉴定细胞死活。 2、配制：中性红 0.1 g 溶于蒸馏水 100 ml 中。 3、用法：使用时再稀释 10 倍左右。染色后，如用偏酸性溶液（如蒸馏水）冲洗，活细 胞的细胞壁成红色，液泡无色；死细胞的细胞核和细胞质呈红色。 四、钌红(Ruthenium red)染液 1、作用：钌红是细胞胞间层专性染料，其配后不易保存，应现用现配。 2、配制：钌红 5—10 mg 溶于 蒸馏水 25—50ml。 五、番红(Safranin O) 1、作用： 番红为碱性染料，适用于染木质化、角质化、栓质化的细胞壁，对细胞核中 染色质、染色体、核仁和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等 作双重染色，与橘红 G、结晶紫作三重染色。 2、配制：(1)番红水溶液 番红 1 g；蒸馏水 100 ml (2)番红酒精溶液 番红 1 g；50％(或 95％)酒精 100 ml (3)苯胺番红酒精染色液 甲液：番红 5 g , 95％酒精 50 ml； 乙液：苯胺 20 ml, 蒸馏水 450 m1。 将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀，过滤后使用。 六、固绿(Fast green) 1、作用： 又名快绿溶液。为酸性染料，能将细胞质，纤维素细胞壁和细胞质染成鲜艳