H下MA Poly(A)tail 5 3 AAAAAAAA 目 TTTT viral reverse tΠS○iptase Oligo(dT)primer RNA 5 AAARARAA TTTT CDNA Hairpin loop NaoH DNA CDNA S1 nuclease (single-strand-specific) Double-stranded cDNA
A B. ds cDNA k包 A ds cDNA 25542 1.a 0.5 0.5 Typical results of ds cDNA synthesis
Typical results of ds cDNA synthesis
3.4cDNA末端修饰 同聚物加尾 末端脱氧核苷酸转移酶 在cDNA上加oligo(dC),在载体上加oligo(dG) ·接头(linker) 人工合成的长8-12bp双链平末端片段，在片段 中含有一个能产生粘性末端的限制性酶切位点 衔接子(adaptor) 人工合成的短的双链DNA片段，其一端为平端， 另一端是已经形成好的限制性酶粘性末端
3.4 cDNA末端修饰 • 同聚物加尾 末端脱氧核苷酸转移酶 在cDNA上 加oligo(dC)，在载体上加oligo(dG) • 接头（linker） 人工合成的长8-12 bp双链平末端片段，在片段 中含有一个能产生粘性末端的限制性酶切位点 • 衔接子（adaptor） 人工合成的短的双链DNA片段，其一端为平端， 另一端是已经形成好的限制性酶粘性末端
3.5cDNA克隆载体 入gt10、入gt11、λZAP等 入gt10:可用核酸探针筛选，克隆0-6kb E.coli C600 allowing growth of parental and recombinant phage C600hfl represses parental phage growth 50-100-fold, recombinant phage form clear plaques and parental phage form turbid plaques
3.5 cDNA克隆载体 λgt10、λgt11、λZAP等 λgt10：可用核酸探针筛选，克隆0-6 kb E.coli C600 allowing growth of parental and recombinant phage C600hfl represses parental phage growth 50-100-fold, recombinant phage form clear plaques and parental phage form turbid plaques
gt11:可用免疫探针筛选，克隆0-7.2kb,可表达融 合蛋白LacZ E.coli LE392 allowing growth of parental and recombinant phage Y1090 as the host,form plaques at 42C
λgt11：可用免疫探针筛选，克隆0-7.2 kb，可表达融 合蛋白LacZ E.coli LE392 allowing growth of parental and recombinant phage Y1090 as the host, form plaques at 42℃