第六节核酸的分离与鉴定 一、 核酸的分离 (一)DNA的分离 提取DNA最基本的原则是保持DNA的完整性。 影响完整性的因素： 机械损伤： 细胞内源ONAase(cofactor:Ca2+,Mg2+)的作用； 化学因素
第六节 核酸的分离与鉴定 一、核酸的分离 （一）DNA的分离 提取DNA最基本的原则是保持DNA的完整性。 影响完整性的因素： 机械损伤； 细胞内源DNAase(cofactor: Ca2+,Mg2+)的作用； 化学因素
DNA核蛋白溶解特点： 溶于水和浓盐溶液(1mo/L NaCl) 不溶于生理盐溶液(0.14mol/LNaC1
DNA核蛋白溶解特点： 溶于水和浓盐溶液（1 mol/L NaCl） 不溶于生理盐溶液（0.14 mol/L NaCl）
DNA分离技术要点： DNA提取（浓盐溶液、EDTA、SDS、蛋白质酶K) DNA沉淀（水稀释或异丙醇） 苯酚（水饱和）抽提除去蛋白 乙醇沉淀DNA 氯化铯密度梯度离心进一步纯化
DNA分离技术要点： DNA提取（浓盐溶液、 EDTA、SDS、蛋白质酶K） DNA沉淀（水稀释或异丙醇） 苯酚(水饱和)抽提除去蛋白 乙醇沉淀DNA 氯化铯密度梯度离心进一步纯化
(二)RNA分离 RNA不稳定！ RNA酶非常稳定！！！ 提取RNA的关键在于尽可能完全抑制RNA酶的 活性
（二）RNA分离 RNA不稳定！ RNA酶非常稳定！！！ 提取RNA的关键在于尽可能完全抑制RNA酶的 活性
抑制RNase的措施： 器皿特殊处理 使用蛋白质强变性剂 使用RNAase抑制剂
抑制RNase的措施： 器皿特殊处理 使用蛋白质强变性剂 使用RNAase 抑制剂