四、实验方法与步骤：芽孢染色：1.孔雀绿染色法：取一干净载片按无菌法取枯草芽孢杆菌菌体少许制成涂片，风干固定后，在涂菌处滴加7.6%的孔雀绿饱和水溶液，在微火上加热，染色10分钟后，用水冲洗，再用0.5%蕃红花红液染色1分钟，水洗，风干后镜检。芽孢被染成绿色，营养体呈红色。2.石炭酸复红染色法：在一支小试管（10*100mm）中，滴入3-4滴蒸溜水，用接种环取枯草芽孢杆菌于水中，充分搅匀，使菌体分散，制成较浓的菌悬液。然后滴加等体积的（3-4滴）石炭酸复红液摇匀。将此试管放入沸水浴中煮10-15分钟，使芽孢及菌体着色。取此菌液2-3环在洁净的载片上做成涂片，自然干燥通过火焰固定后，在自来水下缓缓冲洗，使菌体脱色再用吕氏美蓝液复染1-2分钟。用水洗去多余染液，轻轻用吸水纸吸去水分，干后镜检结果可见芽孢被染成红色，菌体呈现蓝色。荚膜染色法1.方法①刚果红染色将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴手干净载片上：用接种环蘸取细菌培养液或悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀，自然干燥：滴加1%HCI冲洗，使涂片呈蓝色：用蒸馏水漂洗，除去HCI；，用美蓝复染1分钟，水洗，自然干燥后镜检。镜检：有荚膜的菌，菌体蓝色，荚膜不着色，背景蓝紫色；无荚膜的菌，菌体蓝色，背景蓝紫色。由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环，但这不是英膜。膜不着色的部分宽。2.方法②湿墨汁法（1）制菌液：加一滴墨汁于洁净的波片上，并挑少量菌与其充分混合。（2）加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下轻压，吸收多余菌液。（3）镜检。结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即荚膜。3.方法③Anthony氏法(1)涂片、固定：按常规法涂片，在空气中自然干燥。(2)染色：用1%结晶紫水溶液染色2分钟。(3)脱色：用20%CuSO4水溶液洗，再用毛边纸吸干。(4)镜检并观察结果：荚膜淡紫色，细胞深紫色
四、实验方法与步骤： 芽孢染色： 1. 孔雀绿染色法： 取一干净载片按无菌法取枯草芽孢杆菌菌体少许制成涂片，风干固定后，在涂菌处 滴加 7.6%的孔雀绿饱和水溶液，在微火上加热，染色 10 分钟后，用水冲洗，再用 0.5% 蕃红花红液染色 1 分钟，水洗，风干后镜检。芽孢被染成绿色，营养体呈红色。 2. 石炭酸复红染色法： 在一支小试管（10*100mm）中，滴入 3-4 滴蒸溜水，用接种环取枯草芽孢杆菌于水 中，充分搅匀，使菌体分散，制成较浓的菌悬液。然后滴加等体积的(3-4 滴) 石炭酸复红 液摇匀。将此试管放入沸水浴中煮 10-15 分钟，使芽孢及菌体着色。取此菌液 2-3 环在洁 净的载片上做成涂片，自然干燥通过火焰固定后，在自来水下缓缓冲洗，使菌体脱色， 再用吕氏美蓝液复染 1-2 分钟。用水洗去多余染液，轻轻用吸水纸吸去水分，干后镜检， 结果可见芽孢被染成红色，菌体呈现蓝色。 荚膜染色法 1. 方法 ① 刚果红染色 将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴于干净载片上；用接种环蘸取细菌培养液或 悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀，自然干燥；滴加 1%HCl 冲洗，使涂片呈蓝色；用 蒸馏水漂洗，除去 HCl；，用美蓝复染 1 分钟，水洗，自然干燥后镜检。 镜检：有荚膜的菌，菌体蓝色，荚膜不着色，背景蓝紫色；无荚膜的菌，菌体蓝色，背 景蓝紫色。由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜。 荚膜不着色的部分宽。 2. 方法 ② 湿墨汁法 （1）制菌液：加一滴墨汁于洁净的波片上，并挑少量菌与其充分混合。 （2）加盖玻片：放一清洁盖玻片于混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，向下 轻压，吸 收多余菌液。 （3） 镜检。 结果：背景灰色，菌体较暗，在其周围呈现一明亮的透明圈即荚膜。 3. 方法 ③ Anthony 氏法 （1） 涂片、固定：按常规法涂片，在空气中自然干燥。 （2） 染色：用 1％结晶紫水溶液染色 2 分钟。 （3） 脱色：用 20%CuSO4 水溶液洗，再用毛边纸吸干。 （4） 镜检并观察结果：荚膜淡紫色，细胞深紫色
五、实验报告绘出所观察细菌的特殊结构。六、思考题1：为什么芽孢染色要加热？为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色？2.组成英膜的成分是什么?涂片一般用什么固定方法，为什么？3.试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位
五、实验报告 绘出所观察细菌的特殊结构。 六、思考题 1．为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色? 2．组成荚膜的成分是什么?涂片一般用什么固定方法，为什么? 3．试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位
实验四酵母菌的形态观察一、目的要求1.学会对酵母菌制片的方法。2.观察酵母菌的形态、死活细胞的鉴别及出芽生殖方式。3.掌握真菌的一般形态特征及其与细菌的区别。二、基本原理：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母菌活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老的细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。三、实验材料：1.菌种：酵母菌（Saccharomyces.sp）、产假丝酵母（Candidautilis）。2.溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用碘液。3.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片等。四、实验方法与步骤：1.酵母菌形态与死活细胞的鉴别（1）美蓝浸片的观察①在载玻片中央滴加一滴0.1吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌落（苔）放在染色液中，轻轻混合均匀。注意：染色液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。②用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在
实验四 酵母菌的形态观察 一、目的要求 1. 学会对酵母菌制片的方法。 2. 观察酵母菌的形态、死活细胞的鉴别及出芽生殖方式。 3. 掌握真菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、基本原理： 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍。大多数酵母以出芽方 式进行无性繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片 和水－ 碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细 胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母菌活细胞是无色的、而死细胞或代谢 作用微弱的衰老的细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 三、实验材料： 1. 菌种：酵母菌（Saccharomyces.sp）、产朊假丝酵母（Candida utilis）。 2. 溶液或试剂：0.05%和 0.1%吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用碘液。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片等。 四、实验方法与步骤： 1．酵母菌形态与死活细胞的鉴别 （1）美蓝浸片的观察 ○1 在载玻片中央滴加一滴 0.1 吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取 少量酵母菌落（苔）放在染色液中，轻轻混合均匀。 注意：染色液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气 泡而影响观察。 ○2 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在
菌液上。注意避免气泡的产生。③将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母菌的形态、出芽、假丝等情况，并根据颜色来区别死活细胞。④染色约30min后再次观察，注意死细胞数量是否增加。③用0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。(2）水一碘液浸片的观察在载玻片的中央加一小滴革兰氏染色用的碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌落（苔）放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检观察，并记录酵母菌的形态。五、实验报告：酵母菌形态与死活菌体鉴别结果：1.绘图表示所观察到的酵母菌的单个、出芽生殖、假菌丝等形态：2.描述不同染色时间时酵母菌的死活细胞颜色及其数量变化；3.描述不同染色液浓度时死活细胞数量的变化。六、思考题：1.吕氏碱性美蓝染色液浓度和染色时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析原因。2.在显微镜下酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌？
菌液上。注意避免气泡的产生。 ③将制片放置约 3min 后镜检，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母菌的形态、出芽、 假丝等情况，并根据颜色来区别死活细胞。 ④染色约 30min 后再次观察，注意死细胞数量是否增加。 ⑤用 0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。 (2) 水—碘液浸片的观察 在载玻片的中央加一小滴革兰氏染色用的碘液，然后在其上加 3 小滴水，取少许酵母菌 落（苔）放在水—碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检观察，并记录酵母菌的形态。 五、实验报告： 酵母菌形态与死活菌体鉴别结果： 1. 绘图表示所观察到的酵母菌的单个、出芽生殖、假菌丝等形态； 2. 描述不同染色时间时酵母菌的死活细胞颜色及其数量变化； 3. 描述不同染色液浓度时死活细胞数量的变化。 六、思考题： 1. 吕氏碱性美蓝染色液浓度和染色时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析原 因。 2. 在显微镜下酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌？
实验五霉菌的形态观察一、目的要求1.学会对霉菌的制片方法。2.了解和熟悉毛霉、根霉、曲霉、青霉的形态构造。二、基本原理：霉菌除少数为单细胞外，基本构造都是分枝或不分枝的菌丝。菌丝体无色透明或呈暗褐色至黑色；或呈现鲜艳的颜色。在固体培养基上长成绒毛状或棉絮状。菌丝内部构造在显微镜下观察时皆呈管状。低级的霉菌其丝状管道中无横隔，因此其菌丝体内含有许多细胞核。而在一些比较高等的霉菌丝状管道中皆有横隔，由横隔将菌丝隔成许多细胞，霉菌的繁殖方式很多，有各种各样无性及有性的繁殖方式，是分类时的重要依据，另外菌丝体与菌落形态的特征也是鉴别的依据。霉菌菌丝和孢子通常比细菌和放线菌粗得多。常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍镜即可观察。观察霉菌形态有多种方法，常用的有以下三种：直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸溶液中，制成霉菌制片镜检。用此溶液制成的霉菌制片的特点是：细胞不变形、具有防腐作用、不易干燥、能保持较长时间、能防止孢子分散等。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。载玻片培养观察法（如图5-1）：用无菌操作将少量培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片与盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法可以保持霉菌的自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。玻璃纸培养观察法：霉菌与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似。该方法用于观察不同生长阶段的霉菌的形态，也可获得良好的效果。B：载玻片培养侧面图1.培养皿2.搁棒3.载玻片4.培养基及微生物培养物5.盖玻片6.滤纸图5-1载玻片培养示意图A：载玻片培养正面图三、实验材料：1.菌种：毛霉（Mucorsp.）、根霉（Rhizopussp.）、曲霉（Aspergillussp.）、青霉（Penicilliumsp.)。2.溶液或试剂：乳酸石炭酸液
实验五 霉菌的形态观察 一、目的要求 1. 学会对霉菌的制片方法。 2.了解和熟悉毛霉、根霉、曲霉、青霉的形态构造。 二、基本原理： 霉菌除少数为单细胞外，基本构造都是分枝或不分枝的菌丝。菌丝体无色透明或呈暗褐色至 黑色；或呈现鲜艳的颜色。 在固体培养基上长成绒毛状或棉絮状。菌丝内部构造在显微镜下观察时皆呈管状。低级的霉 菌其丝状管道中无横隔，因此其菌丝体内含有许多细胞核。而在一些比较高等的霉菌丝状管 道中皆有横隔，由横隔将菌丝隔成许多细胞。 霉菌的繁殖方式很多，有各种各样无性及有性的繁殖方式，是分类时的重要依据，另外菌丝 体与菌落形态的特征也是鉴别的依据。霉菌菌丝和孢子通常比细菌和放线菌粗得多。常是细 菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍镜即可观察。观察霉菌形态有多种方法，常用的有 以下三种： 直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸溶液中，制成霉菌制片镜检。用此溶液制成的 霉菌制片的特点是：细胞不变形、具有防腐作用、不易干燥、能保持较长时间、能防止孢子 分散等。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。 载玻片培养观察法（如图 5-1）：用无菌操作将少量培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖 玻片培养，霉菌即在载玻片与盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后， 将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法可以保持霉菌的自然生长状态，还便于观察 不同发育期的培养物。 玻璃纸培养观察法：霉菌与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似。该方法用于观察不同生长阶 段的霉菌的形态，也可获得良好的效果。 三、实验材料： 1. 菌种：毛霉(Mucor sp.)、根霉（Rhizopus sp.）、曲霉(Aspergillus sp.)、青霉(Penicillium sp.)。 2. 溶液或试剂：乳酸石炭酸液 A ：载玻片培养正面图 B：载玻片培养侧面图 1.培养皿 2.搁棒 3.载玻片 4.培养基及微生物培养物 5.盖玻片 6.滤纸 图 5-1 载玻片培养示意图