五、实验报告 绘出所观察细菌的特殊结构。 六、思考题 1.为什么芽孢染色要加热？为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色？ 2.组成荚膜的成分是什么？涂片一般用什么固定方法，为什么？ 3.试设计实验如何鉴定某一产芽孢茵株的芽孢形态、者生位置及所属分类地位
五、实验报告 绘出所观察细菌的特殊结构。 六、思考题 1．为什么芽孢染色要加热?为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色? 2．组成荚膜的成分是什么?涂片一般用什么固定方法，为什么? 3．试设计实验如何鉴定某一产芽孢菌株的芽孢形态、着生位置及所属分类地位
实验四酵母菌的形态观察 一、目的要求 1.学会对酵母菌制片的方法 2.观察酵母菌的形态、死活细胞的鉴别及出芽生殖方式。 3.掌握真菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、基本原理： 碘液水浸片米观察醋母菌的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细 胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母茵活细胞是无色的、而死细胞或代谢 作用微弱的衰老的细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 三、实验材料： 1.菌种：酵母菌(Saccharomyces..sp)、产朊假丝酵母(Candida uilis)。 2.溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用碘液。 3.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片等。 四、实验方法与步骤： 1,酵母菌形态与死活细胞的鉴别 (1)美蓝浸片的观察 ①在载玻片中央滴加一滴0.1吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取 少量酵母菌落（苔）放在染色液中，轻轻混合均匀。 注意：染色液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气 泡而影响观察。 ②用慑子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在
实验四 酵母菌的形态观察 一、目的要求 1. 学会对酵母菌制片的方法。 2. 观察酵母菌的形态、死活细胞的鉴别及出芽生殖方式。 3. 掌握真菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、基本原理： 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍。大多数酵母以出芽方 式进行无性繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片 和水－ 碘液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母菌的活细 胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母菌活细胞是无色的、而死细胞或代谢 作用微弱的衰老的细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 三、实验材料： 1. 菌种：酵母菌（Saccharomyces.sp）、产朊假丝酵母（Candida utilis）。 2. 溶液或试剂：0.05%和 0.1%吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用碘液。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、载玻片、盖玻片等。 四、实验方法与步骤： 1．酵母菌形态与死活细胞的鉴别 （1）美蓝浸片的观察 ○1 在载玻片中央滴加一滴 0.1 吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取 少量酵母菌落（苔）放在染色液中，轻轻混合均匀。 注意：染色液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气 泡而影响观察。 ○2 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在
南液上。注意避免气泡的产生。 ③将制片放置约3mi后镜检，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母菌的形态、出芽、 假丝等情况，并根据颜色来区别死活细胞。 ④染色约30min后再次观察，注意死细胞数量是否增加 ⑤用0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。 (2)水一碘液浸片的观察 在载玻片的中央加一小滴革兰氏染色用的碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌 落（苔）放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检观察，并记录酵母南的形态。 五、实验报告： 酵母菌形态与死活菌体鉴别结果： 1.绘图表示所观察到的酵母菌的单个、出芽生殖、假菌丝等形态： 2.描述不同染色时间时酵母茵的死活细胞颜色及其数量变化： 3.描述不同染色液浓度时死活细胞数量的变化。 六、思考题： 1.吕氏碱性美蓝染色液浓度和染色时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析原 因。 2.在显微镜下酵母南有哪些突出的特征区别于一般的细菌
菌液上。注意避免气泡的产生。 ③将制片放置约 3min 后镜检，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母菌的形态、出芽、 假丝等情况，并根据颜色来区别死活细胞。 ④染色约 30min 后再次观察，注意死细胞数量是否增加。 ⑤用 0.05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。 (2) 水—碘液浸片的观察 在载玻片的中央加一小滴革兰氏染色用的碘液，然后在其上加 3 小滴水，取少许酵母菌 落（苔）放在水—碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检观察，并记录酵母菌的形态。 五、实验报告： 酵母菌形态与死活菌体鉴别结果： 1. 绘图表示所观察到的酵母菌的单个、出芽生殖、假菌丝等形态； 2. 描述不同染色时间时酵母菌的死活细胞颜色及其数量变化； 3. 描述不同染色液浓度时死活细胞数量的变化。 六、思考题： 1. 吕氏碱性美蓝染色液浓度和染色时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析原 因。 2. 在显微镜下酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌？
实验五霉菌的形态观察 一、目的要求 1.学会对霉菌的制片方法。 2了解和熟悉毛霉、根霉、曲霉、青霉的形态构造。 二、基本原理： 除少都外惠本均造都是分技不分技的丝丝体无色明线听褐色金 在固体培养基上长成线毛状或棉絮状。茵丝内部构造在显微镜下观察时皆呈管状。低级的霜 菌其丝状管道中无横隔，因此其菌丝体内含有许多细胞核。而在一些比较高等的霉菌丝状管 道中皆有横隔，由横隔将菌丝隔成许多细胞。 霉南的繁殖方式很多，有各种各样无性及有性的繁殖方式，是分类时的重要依据，另外菌丝 体与菌落形态的特征也是鉴别的依据。霉菌菌丝和孢子通常比细菌和放线菌粗得多。常是细 菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍镜即可观察。观察霉菌形态有多种方法，常用的有 以下二 直接制 片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸溶液中，制成霉菌制片镜检。用此溶液制成的 穿商制片的特气是：细面不变 有作用 二燥、能保持较长时间、能防止孢子 玻片培杂观察法《图5用无菌操作将少量培养基球脂置于我玻片上，接种后盖上盖 玻片培养，霉菌即在载玻片与盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养 r时后 将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法可以保持霉菌的自然生长状态，还便于观察 不同发有期的培养物。 玻璃纸培养观察法：霉菌与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似。该方法用于观察不同生长阶 段的霉南的形态，也可获得良好的效果。 B:载玻片培养侧面图 1培养皿2搁棒3载玻 5盖玻片6.滤纸 A:载玻片培养正面图 三、实验材料： 1.菌种：毛霉(Mucor sp.人根霉(Rhi2 opus sp.)、曲霉(Aspergillus sp..)、青霉(Penicillium sp.) 2.溶液或试剂：乳酸石炭酸液
实验五 霉菌的形态观察 一、目的要求 1. 学会对霉菌的制片方法。 2.了解和熟悉毛霉、根霉、曲霉、青霉的形态构造。 二、基本原理： 霉菌除少数为单细胞外，基本构造都是分枝或不分枝的菌丝。菌丝体无色透明或呈暗褐色至 黑色；或呈现鲜艳的颜色。 在固体培养基上长成绒毛状或棉絮状。菌丝内部构造在显微镜下观察时皆呈管状。低级的霉 菌其丝状管道中无横隔，因此其菌丝体内含有许多细胞核。而在一些比较高等的霉菌丝状管 道中皆有横隔，由横隔将菌丝隔成许多细胞。 霉菌的繁殖方式很多，有各种各样无性及有性的繁殖方式，是分类时的重要依据，另外菌丝 体与菌落形态的特征也是鉴别的依据。霉菌菌丝和孢子通常比细菌和放线菌粗得多。常是细 菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍镜即可观察。观察霉菌形态有多种方法，常用的有 以下三种： 直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸溶液中，制成霉菌制片镜检。用此溶液制成的 霉菌制片的特点是：细胞不变形、具有防腐作用、不易干燥、能保持较长时间、能防止孢子 分散等。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。 载玻片培养观察法（如图 5-1）：用无菌操作将少量培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖 玻片培养，霉菌即在载玻片与盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后， 将载玻片上的培养物置显微镜下观察。这种方法可以保持霉菌的自然生长状态，还便于观察 不同发育期的培养物。 玻璃纸培养观察法：霉菌与放线菌的玻璃纸培养观察方法相似。该方法用于观察不同生长阶 段的霉菌的形态，也可获得良好的效果。 三、实验材料： 1. 菌种：毛霉(Mucor sp.)、根霉（Rhizopus sp.）、曲霉(Aspergillus sp.)、青霉(Penicillium sp.)。 2. 溶液或试剂：乳酸石炭酸液 A ：载玻片培养正面图 B：载玻片培养侧面图 1.培养皿 2.搁棒 3.载玻片 4.培养基及微生物培养物 5.盖玻片 6.滤纸 图 5-1 载玻片培养示意图
3.仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、接种钩、载玻片、盖玻片等。 四、实验方法与步骤： 霉菌形态的观察—直接制片观察法 观察霉菌时，除直接观察斜面或平皿的菌落外，制取霉菌标本时，由于茵丝粗大而且孢子很 容易分散，放在水中观察细胞容易变形，因此，在制作标本时不用水，而用乳酸石炭酸溶液。 取霉菌菌丝时，用接种环（钩）挑取时，要选择长有无性孢子的菌丝来观察。 1.根霉的形态观察 根霉由营养茵丝体产生匍匐茵丝向四周蔓延，并由间匐菌丝生出假根接触培养基，与假 根相对方向上生长出孢囊梗，在其顶端形成孢子囊，内生孢囊孢子。 根霉的菌丝内部无横隔，只有在匍甸菌丝上形成厚坦孢子时才发生横隔。孢子囊成熟后 破裂，在孢子囊的囊轴明显呈球性或近似球形。囊轴基部与柄相连出成囊托。 (1)用肉眼观察根霉在斜面或平皿上的生长情况。 (2)置培养皿于显微镜下，用低倍镜观察孢子囊柄，孢子囊，假根等形态。 (3)在洁净的载玻片上，滴加乳酸石炭酸液一滴，用接种针钩挑取少量茵丝体，加 盖盖玻片，置于显微镜下观察孢子囊柄、囊轴、孢子形状和厚垣孢子等形态。 2.毛霉形态观察 毛霉的菌丝体大多数为单细胞，在基物上或基物内能广泛的蔓延，无假根和闹匐菌丝。 孢囊梗直接由菌丝体生出，一般单生，分枝或较少不分枝的。分枝顶端都产生孢子囊， 孢子囊呈球形、椭圆形。大多数种类孢子囊成熟后，其壁易消失或破裂，但留有残迹， 囊内部有囊轴， (1)用肉眼观察毛霉在斜面或平皿上的生长情况。 (2)置培养皿于显微镜下，用低倍镜观察孢子囊柄的粗细，孢子囊形状、大小、色 泽。 (3)制片（方法同上）观察孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子的形态 3.曲霉形态观察 曲霉的营养南丝体由具横隔的分枝丝构成，无色或有明亮的颜色。分生孢子梗是 从特化了的厚壁、而膨大的菌丝细胞（足细胞）生出，并略垂直于足细胞的长轴。分生 孢子梗大都无横隔，常在顶部膨大成可孕性顶囊，顶囊表面产生小梗，放射生出。分生 孢子自小梗顶端相继形成，最后成为不分枝的链。由项囊、小梗以及分生孢子链构成分 生孢子头，具有各种不同的颜色和形状，如球形、放射形、棍棒形或直柱形等。 (1)用肉眼观察曲霉在斜面或平皿上的生长情况。 (2)用低倍镜观察长于培养基上的曲霉的分生孢子形状
3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸、接种环、接种钩、载玻片、盖玻片等。 四、实验方法与步骤： 霉菌形态的观察——直接制片观察法 观察霉菌时，除直接观察斜面或平皿的菌落外，制取霉菌标本时，由于菌丝粗大而且孢子很 容易分散，放在水中观察细胞容易变形，因此，在制作标本时不用水，而用乳酸石炭酸溶液。 取霉菌菌丝时，用接种环（钩）挑取时，要选择长有无性孢子的菌丝来观察。 1. 根霉的形态观察 根霉由营养菌丝体产生匍匐菌丝向四周蔓延，并由匍匐菌丝生出假根接触培养基，与假 根相对方向上生长出孢囊梗，在其顶端形成孢子囊，内生孢囊孢子。 根霉的菌丝内部无横隔，只有在匍匐菌丝上形成厚垣孢子时才发生横隔。孢子囊成熟后 破裂，在孢子囊的囊轴明显呈球性或近似球形。囊轴基部与柄相连出成囊托。 （1） 用肉眼观察根霉在斜面或平皿上的生长情况。 （2） 置培养皿于显微镜下，用低倍镜观察孢子囊柄，孢子囊，假根等形态。 （3） 在洁净的载玻片上，滴加乳酸石炭酸液一滴，用接种针钩挑取少量菌丝体，加 盖盖玻片，置于显微镜下观察孢子囊柄、囊轴、孢子形状和厚垣孢子等形态。 2. 毛霉形态观察 毛霉的菌丝体大多数为单细胞，在基物上或基物内能广泛的蔓延，无假根和匍匐菌丝。 孢囊梗直接由菌丝体生出，一般单生，分枝或较少不分枝的。分枝顶端都产生孢子囊， 孢子囊呈球形、椭圆形。大多数种类孢子囊成熟后，其壁易消失或破裂，但留有残迹， 囊内部有囊轴。 （1） 用肉眼观察毛霉在斜面或平皿上的生长情况。 （2） 置培养皿于显微镜下，用低倍镜观察孢子囊柄的粗细，孢子囊形状、大小、色 泽。 （3） 制片（方法同上）观察孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子的形态。 3. 曲霉形态观察 曲霉的营养菌丝体由具横隔的分枝菌丝构成，无色或有明亮的颜色。分生孢子梗是 从特化了的厚壁、而膨大的菌丝细胞（足细胞）生出，并略垂直于足细胞的长轴。分生 孢子梗大都无横隔，常在顶部膨大成可孕性顶囊，顶囊表面产生小梗，放射生出。分生 孢子自小梗顶端相继形成，最后成为不分枝的链。由顶囊、小梗以及分生孢子链构成分 生孢子头，具有各种不同的颜色和形状，如球形、放射形、棍棒形或直柱形等。 （1） 用肉眼观察曲霉在斜面或平皿上的生长情况。 （2） 用低倍镜观察长于培养基上的曲霉的分生孢子形状