五、基因诊断的病因范围 1.基因结构的改变 点突变、插入、缺失 重排、易位、基因扩增 基因结构多态性变异 前病毒插入等 2.基因表达状况的改变 3.病原体的侵入 4病易感性基因检测
1. 基因结构的改变 点突变、插入、缺失 重排、易位、基因扩增 基因结构多态性变异 前病毒插入等 2. 基因表达状况的改变 3. 病原体的侵入 4.疾病易感性基因检测 五、基因诊断的病因范围
六、基因诊断的基本方法 (-)基因突变的分子诊断 (二)多态性分析 (三)基因表达异常的诊断 (四)外源DNA检测
六、基因诊断的基本方法 (一) 基因突变的分子诊断 (二) 多态性分析 (三) 基因表达异常的诊断 (四) 外源DNA检测
点突变、少数核苷酸缺失或插入的诊断 (1)诊断已知的点突变: PCR/ASO探针法 ASO: allele specific oligonucleotide, 等位基因特异性寡核苷酸 SSO: sequence-specific oligonucleotide 序列特异性寡核苷酸
(1) 诊断已知的点突变: PCR/ASO探针法 ASO: allele specific oligonucleotide, 等位基因特异性寡核苷酸 SSO: sequence-specific oligonucleotide 序列特异性寡核苷酸 1. 点突变、少数核苷酸缺失或插入的诊断
引物1 突变位点引物2 CATTGCCGTCATGCTGCGA正常序列 CATTGCCGTTATGCTGCGA异常序列 GTAACGGCAGTACGACGCT正常探针 GTAACGGCAATACGACGCT异常探针 正常探针异常探针基因型 斑点杂交 正常 杂合子 纯合子
突变位点 引物1 引物2 CATTGCCGTCATGCTGCGA 正常序列 CATTGCCGTTATGCTGCGA 异常序列 GTAACGGCAGTACGACGCT 正常探针 GTAACGGCAATACGACGCT 异常探针 正常探针 异常探针 + - + + - + 正常 杂合子 纯合子 基因型 斑 点 杂 交
/(2)诊断未知的突变: PCR/SSCP测序 SSCP: single strand conformation polymorphism 单链构象多态性 基因型: AA BB AB CC AC DD CAB PCR 32P-dCTP 链D ABCC 变性 链A 链B非变性 链A链B 链A 链B电泳 链A’链B
(2) 诊断未知的突变: PCR/SSCP/ 测序 SSCP: single strand conformation polymorphism 单链构象多态性 PCR 32P-dCTP 变 性 链A 链A’ 链B 链B’ 链A 链A’ 链B 链B’ 非变性 电泳 基因型： AA BB AB CC AC DD 链 C A B D，D’ A’ B’ C’ C’