2 H2N- OH 茚三酮 氨基酸 +RCHO+CO2↑+H20 醛 蓝紫色物质 ★氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧化脱氨反应，生成NH3与酮酸。水合 茚三酮变为还原型茚三酮。 ★加热过程中酮酸裂解，放出C02,自身变为少一个碳的醛。水合茚三酮 变为还原型茚三酮。 ★NH3与水合茚三酮及还原型茚三酮脱水缩合，生成蓝紫色化合物
氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧化脱氨反应，生成NH3与酮酸。水合 茚三酮变为还原型茚三酮。 加热过程中酮酸裂解，放出CO2，自身变为少一个碳的醛。水合茚三酮 变为还原型茚三酮。 NH3与水合茚三酮及还原型茚三酮脱水缩合，生成蓝紫色化合物。 ★ ★ ★
■反应要点 A.该反应由NH2与COOH共同参与 B.茚三酮是强氧化剂 C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值 D.测定范围：0.550ug/ml E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NH3) ■应用： A.氨基酸定量分析（先用层析法分离） B.氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。 (2)与甲醛反应
◼ 反应要点 A.该反应由NH2与COOH共同参与 B.茚三酮是强氧化剂 C.该反应非常灵敏，可在570nm测定吸光值 D. 测定范围：0.5~50µg/ml E.脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不释放NH3） ◼ 应用： A.氨基酸定量分析（先用层析法分离） B.氨基酸自动分析仪： 用阳离子交换树脂，将样品中的氨基酸分离，自动定性定量，记录结果。 (2)与甲醛反应
R-CH-COO-HCHO R-CH-COO-+H+ NH+ NHCHOH HCHO R-CH-COO- CH2OH ■ 反应特点 CH,OH A.为a-NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与a-NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离 于。 ■应用：氨基酸定量分析一甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高(12)，没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。 (3)与2,4-二硝基氟苯(DNFB)反应
◼ 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与α- NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离 子。 ◼ 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。 (3) 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应
COOH HF ◇ O2N ON DNFB DNP.氨基酸 2,4二硝基氟苯 ■反应特点 A.为a-NH2的反应 B.氨基酸a-NH2的一个H原子可被烃基取代（卤代烃） C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 ■应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 A.虽然多肽侧链上的εNH2:酚羟基也能与DNFB反应，但其生成物，容易与 a-DNP氨基酸区分和分离
◼ 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 ◼ 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 A.虽然多肽侧链上的ε- NH2、酚羟基也能与DNFB反应，但其生成物，容易与 α- DNP氨基酸区分和分离
★首先由Sanger/应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 (4)与异硫氰酸苯酯(PITC)的反应 ■由Edman于1950年首先提出 ■为a-NH2的反应 ■用于N末端分析，又称Edman降解法
★首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A. B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D. ◼ 由Edman于1950年首先提出 ◼ 为α- NH2的反应 ◼ 用于N末端分析，又称Edman降解法 肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 (4)与异硫氰酸苯酯（PITC）的反应