一、目的基因的来源 1.采用限制性内切酶，从生物组织中获取目的基因； 2.通过mRNA合成cDNA; 3.人工合成的DNA片段； 4.聚合酶链式反应(PCR)扩增特定基因片段
一、目的基因的来源 1. 采用限制性内切酶，从生物组织中获取目的基因； 2. 通过mRNA合成cDNA； 3. 人工合成的DNA片段； 4. 聚合酶链式反应（PCR）扩增特定基因片段
二、目的基因的克隆 ·通过载体在适当的宿主中克隆 选择载体 目的基因与载体的连接 重组体导入受体细胞 ·通过PCR反应克隆目的基因
二、目的基因的克隆 • 通过载体在适当的宿主中克隆 选择载体 目的基因与载体的连接 重组体导入受体细胞 • 通过PCR反应克隆目的基因
三、目的基因的转移 ◆电穿孔法 ◆显微注射法 ◆裸露DNA直接注射 ◆磷酸钙一DNA共沉淀法 ◆脂质载体包埋法 ◆病毒介导的生物学方法
三、目的基因的转移 ◆电穿孔法 ◆显微注射法 ◆裸露DNA直接注射 ◆磷酸钙—DNA共沉淀法 ◆脂质载体包埋法 ◆病毒介导的生物学方法
培养细胞 选择性基因 感兴厘的 DNA 在特定容器内将 细与DNA混合 利用脉冲电场提高细胞膜的 通透性，从而使外源DNA 的小孔吸人DN 转移至细胞中。此法简单、 效率较高，广泛应用于培养 细胞的基因转移。 不选择 稳定表 司表达 电穿孔法实现外源基因的转移
电穿孔法实现外源基因的转移 利用脉冲电场提高细胞膜的 通透性，从而使外源DNA 转移至细胞中。此法简单、 效率较高，广泛应用于培养 细胞的基因转移
利用显微操作技术转移外 源基因的方法。此法转入 基因长度可达数百kb;并 受精卵 能随机地整合在受体细胞 负压固定管 外源基因 染色体DNA上，因此应用 注射针 范围广。但是这种整合有 植人假孕肆鼠 时会导致转基因动物基因 组的重排、易位、缺失或 嵌合小鼠 定点突变。 杂交.游选 纯合转恭因小限 显微注射转基因技术
显微注射转基因技术 利用显微操作技术转移外 源基因的方法。此法转入 基因长度可达数百kb；并 能随机地整合在受体细胞 染色体DNA上，因此应用 范围广。但是这种整合有 时会导致转基因动物基因 组的重排、易位、缺失或 定点突变