物 ★DNA复郜为什么要用RNA引物?(为什么DNA聚合要用物,RNA聚合醃不需要引物?) P338 ()从模板复制贔祝几个橉时,基埔集丿和踺都弱,易矬生铓配 2)新复袆的最初几个核苷酸,没有与模莫成定双链,DNA聚合酶的5·→3·校能发挥作用。 (三) 解螺旋酶 大肠杄菌的解螺旋酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与rp蛋白共同作用,将DNA两条链解开 解螺旋酶Ⅰ、∏、Ⅲ沿着模板链的5’→3’方向随着复制叉的前进而移动,而蛋白则在另一条模板链 上沿3’→5’方向移动。 (四)DNA旋转 属DNA拓扑异构酶∏,可引入负超螺旋,消除复制叉前进时带来的扭曲张力 拓扑异构酶分两类:I和Ⅱ,广泛存在于原核生物和真核生物。 拓扑异构酶Ⅰ使DNA的一条链发生断裂和再连接,反应无须供给能量,主要集中在活性转录区,与转 录有关。 拓扑异构酶Ⅱ使DNA的两条链同时断裂和再连接,当它引入超螺旋时需要由ATP供给能量。分布在染 色质骨架蛋白和核基质部,与复制有关。 单链DNA结合蛋白(SSB) 复制叉上的解螺旋酶,沿双链DNA前进,产生单链区,大量的单链DNA结合蛋白与单链区结合,阻止 复性和保护单链DNA不被核酸酶降解 (六) DNA连接 ligase) 连接双链DNA上的切口 大肠杆菌连接酶只能在模板上连接DNA缺口。 TADNA ligase即可连接粘性末端的DNA,又可连接平齐 末端的双链DNA E coli和其它细菌的 DNAligase以NAD为能源,动物胞和噬菌体 DNA ligase以ATP为能源。 (七)DNA复制的扑结构 P338-339
６ 物。 ★DNA 复制为什么要用RNA 引物？（为什么DNA 聚合酶要用引物，RNA 聚合酶不需要引物？） P338 ⑴从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都较弱，易发生错配 ⑵新复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA 聚合酶的 5，→3，校对功能难发挥作用。 （三） 解螺旋酶 大肠杆菌的解螺旋酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ与rep 蛋白共同作用，将DNA两条链解开。 解螺旋酶I、II、III 沿着模板链的 5’→3’方向随着复制叉的前进而移动，而 rep 蛋白则在另一条模板链 上沿 3’→5’方向移动。 （四） DNA旋转酶 属 DNA拓扑异构酶Ⅱ，可引入负超螺旋，消除复制叉前进时带来的扭曲张力。 拓扑异构酶分两类：I 和II，广泛存在于原核生物和真核生物。 拓扑异构酶 I 使 DNA 的一条链发生断裂和再连接，反应无须供给能量，主要集中在活性转录区，与转 录有关。 拓扑异构酶Ⅱ使 DNA的两条链同时断裂和再连接，当它引入超螺旋时需要由ATP 供给能量。分布在染 色质骨架蛋白和核基质部，与复制有关。 （五） 单链 DNA结合蛋白（SSB） 复制叉上的解螺旋酶，沿双链 DNA 前进，产生单链区，大量的单链 DNA 结合蛋白与单链区结合，阻止 复性和保护单链DNA不被核酸酶降解。 （六） DNA连接酶（ligase） 连接双链 DNA 上的切口。 大肠杆菌连接酶只能在模板上连接 DNA缺口。T4DNA ligase 即可连接粘性末端的 DNA，又可连接平齐 末端的双链DNA。 E.coli.和其它细菌的DNA ligase 以NAD为能源，动物细胞和噬菌体 DNA ligase 以ATP 为能源。 （七） DNA复制的拓扑结构 P338-339
四、DNA的半不连续复制 P336图1915DNA的半不连续复制 DNA聚合酶催化的方向是5→3。 前导链 滞后链 1968年,发现冈崎片段。长度: 细菌:1Kb-2Kb,相当于一个顺反子的大小 真核:100200bp,约等于一个核小体DNA的长度 五、DNA复过程( E coli) P342图1917大肠杆菌的复制体结构示意图 1、复制的起始 引发:当DNA的双螺旋解开后,合成RNA引物的过程。 引发体:引物合成酶与各种蛋白质因子(dnaB、dnaC、n、n'n’D)构成的复合体,负责RNA引物的 合成。 引发体沿着模板链5’→3′方向移动(与冈崎片段合成的方向正好相反,而与复制叉移动的方向相同), 移到一定位置上即可引发RNA引物的合成。 E colLINA复制原点onC,由245bp组成,三组13bp重复序列(近5端处),四组9bp重复序列(另 端处) 图 大肠杆菌复制原点起始复制所需蛋白质: dNaA 在原点处打开双螺旋 DNaB 使DNA解旋 DNac DNaB结合在原点所需 刺激起始 引物酶(DNaG)合成RNA引物 结合单链DNA RNA聚合酶 促进DNaA活性 旋转酶 松驰DNA扭曲应力 20个DnaA结合在四组帅p重复区,形成起始复合物,DNA环绕此复合物。 三组13bp重复区依次变性,产生开放型复合物 DnaB(在DnaC协助下)与开放复合物结合,进一步解链。 7
７ 四、 DNA 的半不连续复制 P336 图 19-15 DNA 的半不连续复制 DNA 聚合酶催化的方向是5 ，→3 ，。 前导链： 滞后链： 1968 年，发现冈崎片段。长度： 细菌：1Kb-2Kb，相当于一个顺反子的大小。 真核：100-200bp，约等于一个核小体DNA 的长度。 五、 DNA 复制过程（E.coli.） P342 图 19-17 大肠杆菌的复制体结构示意图 1、 复制的起始 引发：当 DNA 的双螺旋解开后，合成RNA引物的过程。 引发体：引物合成酶与各种蛋白质因子（dnaB、dnaC、n、n＇n＇＇I）构成的复合体，负责 RNA 引物的 合成。 引发体沿着模板链 5’→3’方向移动（与冈崎片段合成的方向正好相反，而与复制叉移动的方向相同）， 移到一定位置上即可引发RNA引物的合成。 E.coli.DNA 复制原点 ori C，由 245bp 组成，三组 13bp 重复序列（近 5 ，端处），四组 9 bp重复序列（另 一端处）。 图 大肠杆菌复制原点起始复制所需蛋白质： DNaA 在原点处打开双螺旋 DNaB 使 DNA 解旋 DNaC DNaB 结合在原点所需 Hu 刺激起始 引物酶（DNaG） 合成 RNA引物 SSB 结合单链DNA RNA 聚合酶 促进 DNaA 活性 旋转酶 松驰 DNA 扭曲应力 20 个 DnaA 结合在四组9bp 重复区，形成起始复合物，DNA环绕此复合物。 三组 13bp 重复区依次变性，产生开放型复合物。 DnaB（在DnaC 协助下）与开放复合物结合，进一步解链