(4)制片选取透明完整的切片(厚约10~20um),根据不同鉴别目的选用适宜的试剂装片。一般蒸馏水等直接装片法,在《药用植物学》已做介绍。下面重点介绍水合氯醛加热透化装片法:取合格切片置洁净的载玻片上,加2~3滴水合氯醛试液,解剖针混匀,于酒精灯的小火焰上微热至沸,移下,略冷,补加一滴试剂,再加热至当沸,如此反复至切片透明止。一般需要2-3次(切记:加热时不要烧干)即透化完全。加稀甘油至适量混匀,将切片摆在玻片中央略偏一方的位置,小心加上盖玻片(不要出现气泡),用吸水纸吸去多余的试液至试液充满整个盖玻片且不游动为止,擦净玻片边缘及反面的污物,即可镜检。徒手切片经水合氯醛透化(冷浸)后,脱水染色,也能制成永久片。2.2粉末制片法(1)粉末的制备选取鉴定准确,具有代表性的药材,用小木锉锉下少许粉末或经粉碎过50~80目筛。(2)粉未制片法粉末的临时制片一般应用时做三种不同的装片,即水装片、稀甘油或甘油醋酸装片、水合氯醛试液装片(有时还需水合氯醛冷装片)。用牙签挑取少许药材粉未,放置玻片中央稍偏一侧的位置,根据需要加适当试剂1~2滴,用解剖针轻轻搅匀,小心加盖片即可。水合氯醛加热透化的标本片,一般应加热2~3次,注意点与徒手切片制片法相同。在制片过程中,应摸索粉末和试剂的适宜用量,又快又好的做出合格的粉末临时标本片。粉末药材也可用甘油明胶做成半永久片,经脱水染色透明后做成永久标本片。2.3表面制片法本法适用于叶片、萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊等。另外浆果、草质茎和某些地下茎的表皮也可制成表面装片。(1)整体封藏法适用于很薄的叶片、萼片和花瓣等样品,可剪取所需部位2小片,约4mm2,一反一正放载玻片上。加水合氯醛试液加热透化完全,盖上盖玻片即可。也可放试管中加水合氯醛试液加热至样品透明,再取样装片。孢子、花粉粒、雄蕊或雌蕊等,可直接装片。(2)表面撕离法较厚的叶片、萼片、花瓣及浆果、茎等,可用镊子将软化好材料的表皮轻轻撕下,将面朝上,放载玻片上,加水合氯醛透化至透明,盖上盖玻片即可。6
6 (4)制片 选取透明完整的切片(厚约 10~20μm),根据不同鉴别目的选用 适宜的试剂装片。一般蒸馏水等直接装片法,在《药用植物学》已做介绍。下面重点 介绍水合氯醛加热透化装片法: 取合格切片置洁净的载玻片上,加 2~3 滴水合氯醛试液,解剖针混匀,于酒精 灯的小火焰上微热至沸,移下,略冷,补加一滴试剂,再加热至当沸,如此反复至切 片透明止。一般需要 2-3 次(切记:加热时不要烧干)即透化完全。加稀甘油至适量 混匀,将切片摆在玻片中央略偏一方的位置,小心加上盖玻片(不要出现气泡),用 吸水纸吸去多余的试液至试液充满整个盖玻片且不游动为止,擦净玻片边缘及反面的 污物,即可镜检。徒手切片经水合氯醛透化(冷浸)后,脱水染色,也能制成永久片。 2.2 粉末制片法 (1)粉末的制备 选取鉴定准确,具有代表性的药材,用小木锉锉下少许粉末 或经粉碎过 50~80 目筛。 (2)粉末制片法 粉末的临时制片一般应用时做三种不同的装片,即水装片、 稀甘油或甘油醋酸装片、水合氯醛试液装片(有时还需水合氯醛冷装片)。用牙签挑 取少许药材粉末,放置玻片中央稍偏一侧的位置,根据需要加适当试剂 1~2 滴,用 解剖针轻轻搅匀,小心加盖片即可。水合氯醛加热透化的标本片,一般应加热 2~3 次,注意点与徒手切片制片法相同。在制片过程中,应摸索粉末和试剂的适宜用量, 又快又好的做出合格的粉末临时标本片。粉末药材也可用甘油明胶做成半永久片,经 脱水染色透明后做成永久标本片。 2.3 表面制片法 本法适用于叶片、萼片、花瓣、雄蕊和雌蕊等。另外浆果、草质茎和某些地下茎 的表皮也可制成表面装片。 (1)整体封藏法 适用于很薄的叶片、萼片和花瓣等样品,可剪取所需部位 2 小片,约 4mm2 ,一反一正放载玻片上。加水合氯醛试液加热透化完全,盖上盖玻片 即可。也可放试管中加水合氯醛试液加热至样品透明,再取样装片。孢子、花粉粒、 雄蕊或雌蕊等,可直接装片。 (2)表面撕离法 较厚的叶片、萼片、花瓣及浆果、茎等,可用镊子将软化好 材料的表皮轻轻撕下,将面朝上,放载玻片上,加水合氯醛透化至透明,盖上盖玻片 即可
3.显微观察方法:在显微镜下镜检时视野的寻找应先用低倍镜,再用适当的高倍镜观察。即按“先低倍后高倍”的原则进行。为了避免在显微观察时,对标本片内某些少见或偶见的特征遗漏而影响观察结果。我们可采用“之字移动法,使标本片沿着一定的线路移动这样可以检查到玻片下的各个部位。此法是在对焦后,旋动移动器,从盖玻片的左上角开始,逐渐使视野由左向右移动,到达右端后,使视野向近侧移动2/33/4个视野,然后使视野由右向左移动,到达左端后,再如前法移动,直到整个标本片全部观察完毕。镜检时视野移动线路如图1-3。4.植物药组织显微简图表示方法:4.1.药材组织简图绘制法采用一定的图案符号(图1一2),来表示药材切面中各种组织即某些特殊构造的层次和分布范围,这种组织图,称之组织简图。绘制方法如下:(1)制作标本片制作反差较大的标本片,如各种二重、三重染色的石蜡切片,经间苯三酚-浓盐酸、氯化锌碘液或其他试剂染色后的手切片,要求组织结构清晰,界限分明。(2)观察描绘前,需要仔细观察标本片,熟悉切片中各种组织的构造层次重要鉴别特征的位置、各种组织所占的比例等。(3)勾画轮廓图①用幻灯机或投影仪,将标本片投像于绘图纸上,调整合适的放大倍数,用3H(2H)铅笔轻轻勾画出各个部位的轮廓,不清晰的部位在显微镜下,用显微测量加以校正。②小型材料,可以直接用描绘器进行勾画。③徒手勾画法。(4)修正铅笔图用HB型铅笔修正上述轮廓图,将各部位即重要特征,分别用规定的简图符号细心地描绘成铅笔图。(5)图注及图名简图绘完后,用整齐的引线将各部位依次向右方或上、下方(叶类中药)引出,写上图注,图下方写上图的名称并注明放大倍数。(6)注意事项①绘简图符号时,应注意线条的平直和圆顺,点应均匀圆正,色调一致。②简图是平面图,不应绘出立体感,所有部位均用符号表示,不应把某个部位绘成详图。③简图一般要求整体性和全面性,但有的药材也可只绘局部或主要部位。7
7 3.显微观察方法: 在显微镜下镜检时视野的寻找应先用低倍镜,再用适当的高倍镜观察。即按“先 低倍后高倍”的原则进行。为了避免在显微观察时,对标本片内某些少见或偶见的特 征遗漏而影响观察结果。我们可采用“之”字移动法,使标本片沿着一定的线路移动, 这样可以检查到玻片下的各个部位。 此法是在对焦后,旋动移动器,从盖玻片的左上角开始,逐渐使视野由左向右移 动,到达右端后,使视野向近侧移动 2/3~3/4 个视野,然后使视野由右向左移动, 到达左端后,再如前法移动,直到整个标本片全部观察完毕。镜检时视野移动线路如 图 1-3。 4.植物药组织显微简图表示方法: 4.1.药材组织简图绘制法 采用一定的图案符号(图 1-2),来表示药材切面中各种组织即某些特殊构造的 层次和分布范围,这种组织图,称之组织简图。绘制方法如下: (1)制作标本片 制作反差较大的标本片,如各种二重、三重染色的石蜡切片, 经间苯三酚-浓盐酸、氯化锌碘液或其他试剂染色后的手切片,要求组织结构清晰, 界限分明。 (2)观察 描绘前,需要仔细观察标本片,熟悉切片中各种组织的构造层次, 重要鉴别特征的位置、各种组织所占的比例等。 (3)勾画轮廓图 ①用幻灯机或投影仪,将标本片投像于绘图纸上,调整合适 的放大倍数,用 3H(2H)铅笔轻轻勾画出各个部位的轮廓,不清晰的部位在显微镜 下,用显微测量加以校正。②小型材料,可以直接用描绘器进行勾画。③徒手勾画法。 (4)修正铅笔图 用 HB 型铅笔修正上述轮廓图,将各部位即重要特征,分别 用规定的简图符号细心地描绘成铅笔图。 (5)图注及图名 简图绘完后,用整齐的引线将各部位依次向右方或上、下方 (叶类中药)引出,写上图注,图下方写上图的名称并注明放大倍数。 (6)注意事项 ①绘简图符号时,应注意线条的平直和圆顺,点应均匀圆正, 色调一致。②简图是平面图,不应绘出立体感,所有部位均用符号表示,不应把某个 部位绘成详图。③简图一般要求整体性和全面性,但有的药材也可只绘局部或主要部 位
射线鲜色姐锅厚烩姐识皮唇糖架4.2药材组织详图绘制法组织详图是把组织中各种细胞,由外向内一次绘出的组织图。绘制方法如下,(1)、(2)项同组织简图绘制法。(3)勾画轮廓图利用描绘器观察绘图,或显微照相后依次放大的照片绘图。先用3H铅笔绘出草图。直径较小的组织可全部绘出,直径大的组织可由外向内分成数段,选取最有鉴别意义的组织特征描绘。描绘时,各段及各部位细胞的放大倍数应一致,各种细胞及内含物等应依次准确绘出,切忌随意填充。(4)详图中各类细胞的表示法及各种类型铅笔的使用:①各类细胞的表示法一般有三种:a.单线条法:适用于薄壁细胞。b.双线条法:适用于略增厚壁的细胞。c.三线条法:适用于成群的厚壁细胞及导管;如单个散在时,采用双线条法。B、HB铅笔:适于绘粗线条。如绘厚壁细胞、导管的外缘线。H、2H铅笔:适于绘中线条。如绘薄壁细胞,各种结晶体、淀粉粒等。3H铅笔:适于绘细线条。如绘厚壁细胞、导管的内缘线、层纹、纹孔等。(5)修正铅笔图将勾画的轮廓图用不同型号(硬度)的铅笔和(4)项中规定的画法修整成铅笔图。(6)图注和图名按简图法写上图注、图名和放大倍数。(7)注意事项组织详图是细胞的平面图,但细胞内含物以及厚壁细胞应注意绘出立体感。8
8 4.2 药材组织详图绘制法 组织详图是把组织中各种细胞,由外向内一次绘出的组织图。绘制方法如下: (1)、(2)项同组织简图绘制法。 (3)勾画轮廓图 利用描绘器观察绘图,或显微照相后依次放大的照片绘图。先用 3H 铅笔绘出草 图。直径较小的组织可全部绘出,直径大的组织可由外向内分成数段,选取最有鉴别 意义的组织特征描绘。描绘时,各段及各部位细胞的放大倍数应一致,各种细胞及内 含物等应依次准确绘出,切忌随意填充。 (4)详图中各类细胞的表示法及各种类型铅笔的使用: ①各类细胞的表示法一般有三种: a.单线条法:适用于薄壁细胞。b.双线条法:适用于略增厚壁的细胞。c.三线条 法:适用于成群的厚壁细胞及导管;如单个散在时,采用双线条法。 B、HB 铅笔:适于绘粗线条。如绘厚壁细胞、导管的外缘线。 H、2H 铅笔:适于绘中线条。如绘薄壁细胞,各种结晶体、淀粉粒等。 3H 铅笔:适于绘细线条。如绘厚壁细胞、导管的内缘线、层纹、纹孔等。 (5)修正铅笔图 将勾画的轮廓图用不同型号(硬度)的铅笔和(4)项中规定的画法修整成铅笔 图。 (6)图注和图名 按简图法写上图注、图名和放大倍数。 (7)注意事项 组织详图是细胞的平面图,但细胞内含物以及厚壁细胞应注意绘出立体感
4.3药材粉末图绘制法粉未图是描绘粉未药材中具有鉴别意义的组织碎片、细胞或细胞内含物形态的特征图。绘制方法如下:(1)制作合适的粉末标本片,仔细观察。(2)用描绘器作图或镜检时直接作图。(3)选择有鉴别意义的特征,如实描绘。常见的粉末特征:导管、各种厚壁细胞、内含物、分泌组织、毛茸等。注意观察和描绘不同的角度和断面:如表面观、断面观、极面观、赤道面观等。注意绘出立体感:如各种厚壁细胞、内含物、毛茸、导管等。(4)图版的排列、大小和放大倍数图版排列的原则为各类特征相对集中,又要与其他特征适当交义、美观、充实、大方:图版大小一般按各出版社要求的大小或其倍数计算;同一张粉末图中,要求使用同一个放大倍数。(5)修正铅笔图按详图绘制法中4、5项进行。(6)图注和图名铅笔图绘完后,将各类粉末特征标上数码,在图下写明,图的名称、放大倍数,其下面注明特征数码的图注。(7)注意事项①图版排列时,应注意突出重点特征,使占主要版面,次要特征占次要版面或填补空隙,既不能过于密集繁杂,又不能过于稀疏松散,切忌不可纵、横排队式。②图片的大小要适中,根据图纸的大小和图的多少确定。4.4.药材解离组织图的绘制法(1)根据材料的性质,选择合适的解离方法、制片,用描绘器进行描绘。(2)解离组织是观察研究药材某一组织中有鉴别意义的单个完整的细胞形态,故描绘时,单个细胞应绘全形图,过长的细胞,如纤维、管胞、筛胞等,可分上下两段描绘。描绘时,应体现立体感,各种细胞的鉴别点要绘出来,如细胞的纹孔、导管穿孔板、纤维末端的分枝等。(3)图版排列,一般各类细胞在图中分类集中级向排列。同一图版中,可以使用不同的放大倍数,在图注中,分别注明放大倍数。其他与粉末未图相同。5.药材性状鉴定:观察冬虫夏草、海金沙、茯苓、猪苓、麻黄、绵马贯众、大黄、何首乌、虎杖、牛膝、川牛膝、太子参、川乌、草乌、附子、白芍、赤芍、黄连、淫羊藿等药材的性状特征,主要药材性状要点如下:9
9 4.3 药材粉末图绘制法 粉末图是描绘粉末药材中具有鉴别意义的组织碎片、细胞或细胞内含物形态的特 征图。绘制方法如下: (1)制作合适的粉末标本片,仔细观察。 (2)用描绘器作图或镜检时直接作图。 (3)选择有鉴别意义的特征,如实描绘。常见的粉末特征:导管、各种厚壁细 胞、内含物、分泌组织、毛茸等。注意观察和描绘不同的角度和断面:如表面观、断 面观、极面观、赤道面观等。 注意绘出立体感:如各种厚壁细胞、内含物、毛茸、导管等。 (4)图版的排列、大小和放大倍数 图版排列的原则为各类特征相对集中,又 要与其他特征适当交叉、美观、充实、大方;图版大小一般按各出版社要求的大小或 其倍数计算;同一张粉末图中,要求使用同一个放大倍数。 (5)修正铅笔图 按详图绘制法中 4、5 项进行。 (6)图注和图名 铅笔图绘完后,将各类粉末特征标上数码,在图下写明,图 的名称、放大倍数,其下面注明特征数码的图注。 (7)注意事项 ①图版排列时,应注意突出重点特征,使占主要版面,次要特 征占次要版面或填补空隙,既不能过于密集繁杂,又不能过于稀疏松散,切忌不可纵、 横排队式。②图片的大小要适中,根据图纸的大小和图的多少确定。 4.4.药材解离组织图的绘制法 (1)根据材料的性质,选择合适的解离方法、制片,用描绘器进行描绘。 (2)解离组织是观察研究药材某一组织中有鉴别意义的单个完整的细胞形态, 故描绘时,单个细胞应绘全形图,过长的细胞,如纤维、管胞、筛胞等,可分上下两 段描绘。描绘时,应体现立体感,各种细胞的鉴别点要绘出来,如细胞的纹孔、导管 穿孔板、纤维末端的分枝等。 (3)图版排列,一般各类细胞在图中分类集中纵向排列。同一图版中,可以使用不 同的放大倍数,在图注中,分别注明放大倍数。其他与粉末图相同。 5.药材性状鉴定: 观察冬虫夏草、海金沙、茯苓、猪苓、麻黄、绵马贯众、大黄、何首乌、虎杖、 牛膝、川牛膝、太子参、川乌、草乌、附子、白芍、赤芍、黄连、淫羊藿等药材的性 状特征,主要药材性状要点如下:
大黄表面黄棕色至红棕色,具类白色网纹,根茎顶部横切面可见排成13环的“星点”(异型维管束)并有部分散在,中下部横切面“星点”多排成一环或渐散在,而根的横切面不具“星点”,有放射状纹理。气香,味苦涩,嚼之黏牙。川牛膝根较粗,直径0.5~3cm,表面灰褐色。断面筋脉小点断续排成38环,质硬韧。怀牛膝根细长圆柱形,直径0.5~1cm,表面灰黄或淡棕色,久贮色加深。质硬韧,受潮复柔软。端面角质样,黄白色筋脉小点(维管束)断续排列成2~4环。何首乌不规则块状,表面红棕色灰红褐色,质坚体重,横切面黄棕色,粉性,可见云锦状花纹(异常维管束),中央木心明显。川乌为不规则圆锥形,稍弯曲,顶端常有残茎,中部多向一侧膨大,长2~7.5cm,直径1.2~2.5cm。表面棕褐色或灰棕色,皱缩,有瘤状侧根及子根痕。质坚实,断面类白色或浅灰黄色,形成层环多角形。气微,味辛辣、麻舌。附子根据炮制方法不同,有盐附子、黑顺片、白附子之分。亚①盐附子侧根呈圆锤形,长4~7cm,直径3~5cm。顶端宽大,中央有凹陷的根芽痕,周围有瘤状突起的支根或支根痕。质重而坚硬。横切面灰褐色,有充满盐霜的小空隙及多角形环纹,环纹内侧导管束排列不整齐。气微、味咸而麻,刺舌。以个大、质坚实、灰黑色、表面光滑者为佳。②黑顺片为纵切片,上宽下窄,长1.7~5cm,宽0.9~3cm,厚0.2~0.5cm。外皮黑褐色,切面暗黄色,油润光泽,半透明,有纵向导管束。质硬而脆,断面角质样。气微、味淡。以片大、均匀、棕黄色、有光泽者为佳。③白附片无外皮,黄白色,半透明,厚约0.3cm。以片均、黄白色、半透明者为佳。白芍根呈圆柱形,长5~18cm,直径1~3cm,表面浅棕色或类白色,光滑,隐约可见横长皮孔及纵皱纹,有细根痕或残留棕褐色的外皮。质坚实,不易折断,断面类白色或微红色,角质样,形成层环明显,未部有放射线纹理。气微、味微苦而酸。赤芍呈圆柱形,稍弯曲,长540cm,直径0.5~3cm。表面棕褐色,粗糙,有纵沟及皱纹,并有须根痕及横向皮孔,有的外皮易脱落。质硬而脆,易折断,断面粉白色或粉红色,皮部窄,木部放射状纹理明显,有的有裂隙。气微香,味微苦、酸涩。味连多分枝,积聚成簇,常弯曲,形如鸡爪,单枝长3~6cm,直径0.3~0.8cm。10
10 大黄 表面黄棕色至红棕色,具类白色网纹,根茎顶部横切面可见排成 1~3 环 的“星点”(异型维管束)并有部分散在,中下部横切面“星点”多排成一环或渐散 在,而根的横切面不具“星点”,有放射状纹理。气香,味苦涩,嚼之黏牙。 川牛膝 根较粗,直径 0.5~3cm,表面灰褐色。断面筋脉小点断续排成 3~8 环,质硬韧。 怀牛膝 根细长圆柱形,直径 0.5~1cm,表面灰黄或淡棕色,久贮色加深。质 硬韧,受潮复柔软。端面角质样,黄白色筋脉小点(维管束)断续排列成 2~4 环。 何首乌 不规则块状,表面红棕色灰红褐色,质坚体重,横切面黄棕色,粉性, 可见云锦状花纹(异常维管束),中央木心明显。 川乌 为不规则圆锥形,稍弯曲,顶端常有残茎,中部多向一侧膨大,长 2~ 7.5cm,直径 1.2~2.5cm。表面棕褐色或灰棕色,皱缩,有瘤状侧根及子根痕。质 坚实,断面类白色或浅灰黄色,形成层环多角形。气微,味辛辣、麻舌。 附子 根据炮制方法不同,有盐附子、黑顺片、白附子之分。 ①盐附子 侧根呈圆锤形,长 4~7cm,直径 3~5cm。顶端宽大,中央有凹陷 的根芽痕,周围有瘤状突起的支根或支根痕。质重而坚硬。横切面灰褐色,有充满盐 霜的小空隙及多角形环纹,环纹内侧导管束排列不整齐。气微、味咸而麻,剌舌。以 个大、质坚实、灰黑色、表面光滑者为佳。 ②黑顺片 为纵切片,上宽下窄,长 1.7~5cm,宽 0.9~3cm,厚 0.2~0.5cm。 外皮黑褐色,切面暗黄色,油润光泽,半透明,有纵向导管束。质硬而脆,断面角质 样。气微、味淡。以片大、均匀、棕黄色、有光泽者为佳。 ③白附片 无外皮,黄白色,半透明,厚约 0.3cm。以片均、黄白色、半透明者 为佳。 白芍 根呈圆柱形,长 5~18cm,直径 1~3cm,表面浅棕色或类白色,光滑, 隐约可见横长皮孔及纵皱纹,有细根痕或残留棕褐色的外皮。质坚实,不易折断,断 面类白色或微红色,角质样,形成层环明显,木部有放射线纹理。气微、味微苦而酸。 赤芍 呈圆柱形,稍弯曲,长 5~40cm,直径 0.5~3cm。表面棕褐色,粗糙, 有纵沟及皱纹,并有须根痕及横向皮孔,有的外皮易脱落。质硬而脆,易折断,断面 粉白色或粉红色,皮部窄,木部放射状纹理明显,有的有裂隙。气微香,味微苦、酸 涩。 味连 多分枝,积聚成簇,常弯曲,形如鸡爪,单枝长 3~6cm,直径 0.3~0.8cm