传统单细胞分离技术极限稀释法LimitingDilutionOemptywellwellwith1+xcells1:101:100.0001:1001:10001:10.00096-well MTP》将细胞悬液稀释，从而将个体细胞从体内分离出来。由于细胞在悬浮液中的分布及浓度，将其分为许多小块，在高稀释样本中，每个样本中的细胞数目会>很少，直到每一份样本只有一个细胞
传统单细胞分离技术——极限稀释法 ➢ 将细胞悬液稀释，从而将个体细胞从体内分离出来。 ➢ 由于细胞在悬浮液中的分布及浓度，将其分为许多小块，在高稀释样本中，每个样本中的细胞数目会 很少，直到每一份样本只有一个细胞
传统单细胞分离技术激光捕获显微切割法(c)(a)(b)洗LaserUV LaserCutting用显微镜对组织进行观察，并Cutting(focused)CellsCellofinterest用肉眼辨认出靶细胞ooao.·OQo.ioLaserCutting(focused)Adhesivecap将带有EVA膜（乙烯乙酸乙烯酯Gravitydriven膜）的收集帽放置于目的组织或aogolO·细胞Transfer·avesselTransferCapture&vesselooLift-off应用低能量近红外激光照射其底LaserCatapulting部，使EVA膜软化产生黏附力，ao一O(defocused)黏附目标组织或细胞于EVA膜上AfterLCMBeforeLCMTissueonLCMCap从而使其与周围组织或细胞分离
传统单细胞分离技术——激光捕获显微切割法 应用低能量近红外激光照射其底 部，使EVA膜软化产生黏附力， 黏附目标组织或细胞于EVA膜上， 从而使其与周围组织或细胞分离 用显微镜对组织进行观察，并 用肉眼辨认出靶细胞 将带有EVA膜（乙烯乙酸乙烯酯 膜）的收集帽放置于目的组织或 细胞
传统单细胞分离技术荧光流式分选法nozzleflowsortlaserbeam1.cellelectro通过荧光染色或标记的单细胞悬浮cyto-suspensionnicsmeter液O》在压力作用下将单细胞压进流动室以一种特定的速率从流动腔中喷射出来利用相应的荧光探测和瞬间充电技V4. cell culture,术得到目标细胞，并进行了单细胞analysis,etc.的分离2. staining ofmembrane,EllwartJW,2000jan02cytoplasm,and nucleus3.cell sorting
传统单细胞分离技术——荧光流式分选法 ➢ 通过荧光染色或标记的单细胞悬浮 液 ➢ 在压力作用下将单细胞压进流动室， 以一种特定的速率从流动腔中喷射 出来 ➢ 利用相应的荧光探测和瞬间充电技 术得到目标细胞，并进行了单细胞 的分离
高通量单细胞分离技术一一液滴微流控技术》液滴技术：通过水溶液和油相从不同的微通道中流出并融合，形成一个“油包水”的乳液滴
高通量单细胞分离技术——液滴微流控技术 ➢ 液滴技术：通过水溶液和油相从不同的微通道中流出并融合，形成一个“油包水”的乳液滴
高通量单细胞分离技术微孔芯片技术微孔芯片技术：通过制作孔径略大于细胞直径的微孔阵列，通过重力、流体、电场等方式将细胞悬液中的单细胞分离至微孔中。ALoadbeadsLoadcellsuspensionDZoom-in examples:cellbeao磁珠细胞cellcellsinmicrowellscells+beadsinmicrowellsCDNACollect allSequencingCell lysis,AmplificationbeadssynthesismRNAsrevealscelllabel,withon beads,frommolecular indexhybridize onbeads intubecarried inmicrowellbeadgene identityasinglearray每一个孔中落入细胞tubeRhaposody技术流程和原理
高通量单细胞分离技术——微孔芯片技术 ➢ 微孔芯片技术：通过制作孔径略大于细胞直径的微孔阵列，通过重力、流体、电场等方式将细胞 悬液中的单细胞分离至微孔中