一 教学要求 • 掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及其 原理 • 学习双抗夹心法检测抗原物质的基本操 作 实验八 酶联免疫吸附试验（ELISA）
一 教学要求 • 掌握酶联免疫吸附试验的基本方法及其 原理 • 学习双抗夹心法检测抗原物质的基本操 作 实验八 酶联免疫吸附试验（ELISA）
二 实验原理 酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay 简 称ELISA)是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques) 上 发展起来的一种新型免疫测定技术，ELISA过程包括：抗原 吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测抗体, 再加 相应酶标记抗体，生成抗原-待测抗体-酶标记抗体的复合 物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计 的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。 同理也可包被抗体，测定抗原含量。 ELISA最常用的四种 方法：直接法测定抗原；间接法测定抗体；双抗体夹心法 测定抗原；竞争法测定抗原
二 实验原理 酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay 简 称ELISA)是在免疫酶技术(immunoenzymatic techniques) 上 发展起来的一种新型免疫测定技术，ELISA过程包括：抗原 吸附在固相载体上，这个过程称为包被，加待测抗体, 再加 相应酶标记抗体，生成抗原-待测抗体-酶标记抗体的复合 物，再与该酶的底物反应生成有色产物。借助分光光度计 的光吸收计算抗体的量。待测抗体的量与有色产物成正比。 同理也可包被抗体，测定抗原含量。 ELISA最常用的四种 方法：直接法测定抗原；间接法测定抗体；双抗体夹心法 测定抗原；竞争法测定抗原
（1） 直接法测定抗原 A. 将抗原吸附在载体表面； B. 加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物； C. 加底物。底物的降解量＝抗原量
（1） 直接法测定抗原 A. 将抗原吸附在载体表面； B. 加酶标抗体，形成抗原—抗体复合物； C. 加底物。底物的降解量＝抗原量
（2）间接法测定抗体 A. 将抗原吸附于固相载体表面； B. 加抗体, 形成抗原-抗体复合物; C. 加酶标抗体； D. 加底物。 测定底物的降解量＝抗体量
（2）间接法测定抗体 A. 将抗原吸附于固相载体表面； B. 加抗体, 形成抗原-抗体复合物; C. 加酶标抗体； D. 加底物。 测定底物的降解量＝抗体量
（3）双抗体夹心法测定抗原 A. 将抗体吸附于固相表面; B. 加抗原，形成抗原-抗体复合物; C. 加酶标抗体; E. 加底物。底物的降解量＝抗原量
（3）双抗体夹心法测定抗原 A. 将抗体吸附于固相表面; B. 加抗原，形成抗原-抗体复合物; C. 加酶标抗体; E. 加底物。底物的降解量＝抗原量