揭阳职业技术学院：《分析样品前处理技术》课程授课教案.pdf_P6-P10

揭阳职业技术学院化工系教案1.4生物医学样品的采集与保存生物医学样品包括各种体液和组织，常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液、睡液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。其中最常见的是血浆或血清，因为它们可以较好地体现药物浓度和治疗之间的关系。1.4.1采样要求各种有害物质在进去人体体内，经过代谢后，其可由尿液、汗液、呼出气、粪便及头发等途径排出体外，鉴于不同物质对于人体的吸收、代谢、排泄等互有差异，而且各排泄物中所含被测物质的量也不相同，因此在采样时，既要注意被检测物质的排泄途径，又要考虑它的排出量是否正确反映其实际的接触程度，本质上主要是考虑所采样品中的被测化学物质的含量必须具有代表性，否则将会失去采样的真实意义。在采集生物样品时，对所用的容器和用具必须保持洁净，且不受外来的污染，同时，在具体采样时，应让受试者脱离现场，并清除他身体外部（手、手臂及头部脸部、衣服等）可能存在的被测化学物质的污染，然后在远离生产环境的适当场所进行采样。1.4.2生物样品的采集1.血样各种有害物质进入人体，无论经过哪个途径进入，都进入血液，在输送到机体的各部分，血液中有害物质及其代谢的浓度通常反映了接触的水平。血液按照采血渠道可以分为静脉血和末梢血；静脉血是用注射器通过静脉血管取得的血液，末梢血是指血或耳血。动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。对于病人，通常采取静脉血。当血药浓度高和分析方法灵敏时，也可从毛细管（手指、耳垂、脚趾）采少量血。根据血中药物浓度和分析方法灵敏度的要求，一般每次采血1-5mL。采样注意事项：当取血量在0.5mL以上时，当收集样品的环境有外源性化学物质存在增加了污染可能性时，以及测定血中易挥发的化学物质时，均不宜采集末梢血，应采集静脉血。有些有害物质及代谢物在全血、血浆、血清和血细胞中分布是不同的，因此在采样时必须根据检测的需要，采集不同的血液部分。在进行金属分析时，必须考虑EDTA抗凝剂对金属离子的络合作用，影响测定结果最好采用肝素抗凝。当测定血样中挥发性有害物质或代谢物时，为了避免因挥发而造成损失，使测定结果偏低，必须采集静脉血，而不能用末梢血。而且应迅速密闭容器，在低温下保存。采血过程中要避免污染，采样要在清洁无污染的场所进行，对采血部位的皮肤除常规消毒外，必要时还必须先清洗干净。在需要采集血清或血浆或血细胞时，采血过程中要防止溶血。用注射器采静脉血时，在转移血液时应先把-5

揭阳职业技术学院化工系教案 - 5 - 1.4 生物医学样品的采集与保存生物医学样品包括各种体液和组织，常用的是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、胰液、淋巴液、粪便等样品。其中最常见的是血浆或血清，因为它们可以较好地体现药物浓度和治疗之间的关系。 1.4.1 采样要求各种有害物质在进去人体体内，经过代谢后，其可由尿液、汗液、呼出气、粪便及头发等途径排出体外，鉴于不同物质对于人体的吸收、代谢、排泄等互有差异，而且各排泄物中所含被测物质的量也不相同，因此在采样时，既要注意被检测物质的排泄途径，又要考虑它的排出量是否正确反映其实际的接触程度，本质上主要是考虑所采样品中的被测化学物质的含量必须具有代表性，否则将会失去采样的真实意义。在采集生物样品时，对所用的容器和用具必须保持洁净，且不受外来的污染，同时，在具体采样时，应让受试者脱离现场，并清除他身体外部（手、手臂及头部脸部、衣服等）可能存在的被测化学物质的污染，然后在远离生产环境的适当场所进行采样。 1.4.2 生物样品的采集 1.血样各种有害物质进入人体，无论经过哪个途径进入，都进入血液，在输送到机体的各部分，血液中有害物质及其代谢的浓度通常反映了接触的水平。血液按照采血渠道可以分为静脉血和末梢血；静脉血是用注射器通过静脉血管取得的血液，末梢血是指血或耳血。动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。对于病人，通常采取静脉血。当血药浓度高和分析方法灵敏时，也可从毛细管（手指、耳垂、脚趾）采少量血。根据血中药物浓度和分析方法灵敏度的要求，一般每次采血 1-5mL。采样注意事项：当取血量在 0.5mL 以上时，当收集样品的环境有外源性化学物质存在增加了污染可能性时，以及测定血中易挥发的化学物质时，均不宜采集末梢血，应采集静脉血。有些有害物质及代谢物在全血、血浆、血清和血细胞中分布是不同的，因此在采样时必须根据检测的需要，采集不同的血液部分。在进行金属分析时，必须考虑 EDTA 抗凝剂对金属离子的络合作用，影响测定结果，最好采用肝素抗凝。当测定血样中挥发性有害物质或代谢物时，为了避免因挥发而造成损失，使测定结果偏低，必须采集静脉血，而不能用末梢血。而且应迅速密闭容器，在低温下保存。采血过程中要避免污染，采样要在清洁无污染的场所进行，对采血部位的皮肤除常规消毒外，必要时还必须先清洗干净。在需要采集血清或血浆或血细胞时，采血过程中要防止溶血。用注射器采静脉血时，在转移血液时应先把

揭阳职业技术学院化工系教案注射器枕头取下，再将血样慢慢注入容器内，可避免溶血。取末梢血时，不得用力挤压采血部位要尽量让其自然流出，避免因渗出组织液使血液稀释，并弃去第一滴血。在运输过程中，血液应避免强烈振动和大的温度改变。血液冷冻后会溶血，为了防止溶血，可以将血液的各部分（血浆和血细胞）分别冷冻储存。如果血样临时存放过夜，为了防止溶血，可以将血液放在4℃保存，否则必须冷冻保存。用于测酶活性的血样，必须尽快分析，放置时间过长会使酶活性降低。血液一般收集与聚乙烯、聚丙烯或硬质玻璃试管中。需要时可加抗凝剂如肝素等。2.尿液许多有害物质及其代谢物通过尿液排泄，其浓度与接触剂量有一定的相关关系。但由于易受食物种类、饮水多少、排汗情况等影响，常使其浓度变化较大。所以采样的时间很重要，一定要按照规定的时间进行采样。其中24h尿液采集是在一个规定时间，先将尿液排空弃掉，然后在24h内，将所有的尿液收集在容器中，直到开始规定的时间再将尿液收集起来。尿液的采集通常采集一次尿液，比如晨尿、班前尿、班中尿或班后尿，每次采样最好收集全部尿液，尿量应在50mL以上。为了检测结果的可信度，对住院病员，一般应取24h的尿总量；门诊病员则去晨尿为主。对现场操作工人，一般可根据接触化学物的排泄半消除期而及时收集其尿液（一次尿），或于工作4h或8h后（特殊情况例外）进行取样（取样时应在其上次排尿后间隔3~4h。尿液可收集在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中。采样注意事项：为了防止尿样变质，通常需要加入防腐剂。常用的防腐剂是盐酸或硝酸、氯仿等。如在测定金属化合物的尿样中加入酸，还起到保护金属离子不被容器吸附的作用。通常100mL尿液加入1mL防腐剂，加后摇匀。采集的尿样若不能及时测定，应放在冰箱中保存；需要长期（5H以上）储存的样品，最好保持在冰冻状态。有的尿样如测定尿汞和挥发性有害物质的要尽快分析否则因容器壁的吸附或挥发使测定结果偏低。动物试验中用代谢笼收集尿、粪，只能以时间段采集，有时会有收集不到的情况3.睡液睡液的采集一般在籁口后15min左右，应尽可能在刺激少的安静状态下进行，用插入漏斗的试管接收口腔内自然流出的睡液，采集的时间至少要10min。采集混合睡液可用物理或化学的方法刺激，在短时间内得到大量的唾液。非刺激法条件下睡液直接流入容器内，流速慢，仅约0.05mL/min。物理刺激法睡液分泌流速为1~3mL/min，化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱刺激睡液分泌，流速可达5~10mL/min。4.组织-6-

揭阳职业技术学院化工系教案 - 6 - 注射器枕头取下，再将血样慢慢注入容器内，可避免溶血。取末梢血时，不得用力挤压采血部位，要尽量让其自然流出，避免因渗出组织液使血液稀释，并弃去第一滴血。在运输过程中，血液应避免强烈振动和大的温度改变。血液冷冻后会溶血，为了防止溶血，可以将血液的各部分（血浆和血细胞）分别冷冻储存。如果血样临时存放过夜，为了防止溶血，可以将血液放在 4℃保存，否则必须冷冻保存。用于测酶活性的血样，必须尽快分析，放置时间过长会使酶活性降低。血液一般收集与聚乙烯、聚丙烯或硬质玻璃试管中。需要时可加抗凝剂如肝素等。 2. 尿液许多有害物质及其代谢物通过尿液排泄，其浓度与接触剂量有一定的相关关系。但由于易受食物种类、饮水多少、排汗情况等影响，常使其浓度变化较大。所以采样的时间很重要，一定要按照规定的时间进行采样。其中 24h 尿液采集是在一个规定时间，先将尿液排空弃掉，然后在 24h 内，将所有的尿液收集在容器中，直到开始规定的时间再将尿液收集起来。尿液的采集通常采集一次尿液，比如晨尿、班前尿、班中尿或班后尿，每次采样最好收集全部尿液，尿量应在 50mL 以上。为了检测结果的可信度，对住院病员，一般应取 24h 的尿总量；门诊病员则去晨尿为主。对现场操作工人，一般可根据接触化学物的排泄半消除期而及时收集其尿液（一次尿），或于工作 4h 或 8h 后（特殊情况例外）进行取样（取样时应在其上次排尿后间隔 3~4h。尿液可收集在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中。采样注意事项：为了防止尿样变质，通常需要加入防腐剂。常用的防腐剂是盐酸或硝酸、氯仿等。如在测定金属化合物的尿样中加入酸，还起到保护金属离子不被容器吸附的作用。通常 100mL 尿液加入 1mL 防腐剂，加后摇匀。采集的尿样若不能及时测定，应放在冰箱中保存；需要长期（5h 以上）储存的样品，最好保持在冰冻状态。有的尿样如测定尿汞和挥发性有害物质的要尽快分析，否则因容器壁的吸附或挥发使测定结果偏低。动物试验中用代谢笼收集尿、粪，只能以时间段采集，有时会有收集不到的情况。 3. 唾液唾液的采集一般在簌口后 15min 左右，应尽可能在刺激少的安静状态下进行，用插入漏斗的试管接收口腔内自然流出的唾液，采集的时间至少要 10min。采集混合唾液可用物理或化学的方法刺激，在短时间内得到大量的唾液。非刺激法条件下唾液直接流入容器内，流速慢，仅约 0.05mL/min。物理刺激法唾液分泌流速为 1~3mL/min，化学刺激法是用酸刺激味觉或者毛果芸香碱刺激唾液分泌，流速可达 5~10mL/min。 4. 组织

揭阳职业技术学院化工系教案在药物动物试验及临床上由于过量服用药物而引起的中毒死亡时，药物在脏器中的分布情况可为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息，常常需要采集肝、脾、肾、肺、胃、脑等脏器及其他组织进行药物检测。5.呼出气待测物在肺泡气与肺部血液之间，存在着血-气两相的平衡。进入人体的挥发性有害物质或产生的挥发性代谢物，可以通过呼出气排泄。呼出气中有害物质的量与体内的接触量有相关关系，特别是肺泡气：常用于挥发性有害物质的检测，确定内剂量。采集呼出气的检测对象必须是肺功能正常者。采集混合呼出气时，检测对象先深呼吸2~3次，然后按正常呼吸将呼出气全部呼入采样管和采样袋中，立即密封采样管和采样袋。收集终末呼出气时，检测对象先深呼吸2~3次，然后收集最后的约100mL呼出气。采样完毕如不能及时测定或样品待测物浓度很低，需要浓缩时，可将采得的呼出气样品转移到固体吸附剂管中；这既能起到浓缩作用，又有利于样品的运输和保存。采样注意事项：常用的采样器有塑料袋或铝塑采样袋和两端具有三通活塞的玻璃管；采样器的体积至少25mL。所有的采样器均有一定程度的吸附作用，要选择那种对待测物吸附小的采样器。若有吸附，可在测定前将采样器适当加温，以减少吸附。采样器的密封性能要好，而且不能有阻力以保证工人采集的是正常呼吸状态下的呼出气。6.头发由于头发生长较慢，每月生长约1厘米，故剪下的那一段头发中所含的金属或元素仅反映其过去的历史性接触，这一点应予以注意。在头发取样时，应记录头发剪下的长度（cm）和保留头发杆基部的长度（cm），同时了解他们曾用过什么头发化妆品。采样时间一般可1~2个月采样一次，头发样品，一般可收集在塑料袋或纸袋中。1.4.3生物样品的储存1.保存方法（1）冷藏或冷冻：短期保存时，可置冰箱（4℃）中：长期保存时，须置于冷冻柜（-80~-20℃）中。（2）去活性：为防止含酶样品在采样后酶对被测组分进一步代谢、采样后必须立即终止酶的活性。方法有：液氮中快速冷冻、微波照射、匀浆及沉淀、加入酶活性阻断或抗氧化剂、样品煮沸等。2.血液、尿液样品的保存对于血液、尿液样品采集后如不能立刻分析，或需运递他处测定者，则可根据测定要求，分别作如下处理：-7-

揭阳职业技术学院化工系教案 - 7 - 在药物动物试验及临床上由于过量服用药物而引起的中毒死亡时，药物在脏器中的分布情况可为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息，常常需要采集肝、脾、肾、肺、胃、脑等脏器及其他组织进行药物检测。 5. 呼出气待测物在肺泡气与肺部血液之间，存在着血-气两相的平衡。进入人体的挥发性有害物质或产生的挥发性代谢物，可以通过呼出气排泄。呼出气中有害物质的量与体内的接触量有相关关系，特别是肺泡气；常用于挥发性有害物质的检测，确定内剂量。采集呼出气的检测对象必须是肺功能正常者。采集混合呼出气时，检测对象先深呼吸 2~3 次，然后按正常呼吸将呼出气全部呼入采样管和采样袋中，立即密封采样管和采样袋。收集终末呼出气时，检测对象先深呼吸 2~3 次，然后收集最后的约 100mL 呼出气。采样完毕如不能及时测定或样品待测物浓度很低，需要浓缩时，可将采得的呼出气样品转移到固体吸附剂管中；这既能起到浓缩作用，又有利于样品的运输和保存。采样注意事项：常用的采样器有塑料袋或铝塑采样袋和两端具有三通活塞的玻璃管；采样器的体积至少 25mL。所有的采样器均有一定程度的吸附作用，要选择那种对待测物吸附小的采样器。若有吸附，可在测定前将采样器适当加温，以减少吸附。采样器的密封性能要好，而且不能有阻力，以保证工人采集的是正常呼吸状态下的呼出气。 6. 头发由于头发生长较慢，每月生长约 1 厘米，故剪下的那一段头发中所含的金属或元素仅反映其过去的历史性接触，这一点应予以注意。在头发取样时，应记录头发剪下的长度（cm）和保留头发杆基部的长度（cm），同时了解他们曾用过什么头发化妆品。采样时间一般可 1~2 个月采样一次，头发样品，一般可收集在塑料袋或纸袋中。 1.4.3 生物样品的储存 1.保存方法（1）冷藏或冷冻：短期保存时，可置冰箱（4℃）中；长期保存时，须置于冷冻柜（-80~-20℃）中。（2）去活性：为防止含酶样品在采样后酶对被测组分进一步代谢、采样后必须立即终止酶的活性。方法有：液氮中快速冷冻、微波照射、匀浆及沉淀、加入酶活性阻断或抗氧化剂、样品煮沸等。 2.血液、尿液样品的保存对于血液、尿液样品采集后如不能立刻分析，或需运递他处测定者，则可根据测定要求，分别作如下处理：