核糖核酸酶切分析( RNase cleavage) 缺点: 当RNA探针上错配的碱基为嘌呤时,核糖核酸 酶切割效率低甚至不切割; 分析DNA的一条链,突变检出率为30%;同时 分析DNA的两条链,突变检出率为70%; 需要制备特异性的RNA探针
核糖核酸酶切分析（RNase cleavage） 缺点： • 当RNA探针上错配的碱基为嘌呤时，核糖核酸 酶切割效率低甚至不切割； • 分析DNA的一条链，突变检出率为 30%；同时 分析DNA的两条链，突变检出率为 70%； • 需要制备特异性的RNA探针
杂合双链分析法 (heteroduplex analgsis, HA) 直接在非变性凝胶上分离杂交的突变型 野生型DNA双链。由于突变型和野生型DNA 形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成单 链环形突起,在非变性凝胶中电泳时,会产生 与相应同源双链DNA不同的迁移率。 检测缺失突变只适于200300bp长度片段, 且不能确定位置检出率只有80%
杂合双链分析法 （heteroduplex analgsis, HA） 直接在非变性凝胶上分离杂交的突变型- 野生型DNA双链。由于突变型和野生型DNA 形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成单 链环形突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生 与相应同源双链DNA不同的迁移率。 检测缺失突变只适于200-300bp长度片段, 且不能确定位置,检出率只有80%
化学切割错配法 Chemical cleavage of mismatch, CCM) 基本原理: 将待测含DNA片段与相应的野生型DNA片 段或RNA片段混合变性杂交,在异源杂合的双 链核酸分子中,错配的C能被羟胺和哌啶切割, 错配的T能被四氧化锇切割,经变性凝胶电泳 可确定是否存在突变
化学切割错配法 （Chemical cleavage of mismatch, CCM） 基本原理： 将待测含DNA片段与相应的野生型DNA片 段或RNA片段混合变性杂交，在异源杂合的双 链核酸分子中，错配的C能被羟胺和哌啶切割， 错配的T能被四氧化锇切割，经变性凝胶电泳 可确定是否存在突变
化学切割错配法 特点: 突变检出率高 如使用荧光检测系统,灵敏度较高: 可检测长度达2Kb的核酸片段; 步骤多、费时、有毒; 如对正义链与反义链都进行分析,检测率 达100%
化学切割错配法 特点： • 突变检出率高； • 如使用荧光检测系统，灵敏度较高； • 可检测长度达 2Kb的核酸片段； • 步骤多、费时、有毒； • 如对正义链与反义链都进行分析,检测率 达100%
酶促切割错配( (enzyme mismatch cleavage) 酶促切割错配是一种与 Rnasel酶切分析相类似的 方法 不同之处是该方法采用的酶是T4核酸内切酶Ⅶ 能够识别12种错配的碱基并在错配碱基附近进 行酶切 优点 对检测DNA片段可用DNA探针杂交检测 最长检测长度达到1.5Kb 缺点 可出现非特异性切割,对错配认别也不是100%
酶促切割错配 (enzyme mismatch cleavage ) • 酶促切割错配是一种与Rnase酶切分析相类似的 方法. • 不同之处是该方法采用的酶是T4核酸内切酶Ⅶ 能够识别12种错配的碱基,并在错配碱基附近进 行酶切. 优点: 对检测DNA片段可用DNA探针杂交检测. 最长检测长度达到1.5Kb. 缺点: 可出现非特异性切割,对错配认别也不是100%