实验一葡萄糖杂质检査 (一般杂质检查) 、实验目的 1.通过葡萄糖分析,了解药物的一般杂质检査的原理和意义。 2.熟悉杂质检査的操作方法 二、主要仪器与试药 电子天平,水浴锅,扁形称量瓶,烘箱,移液管(1m、2m、5ml),瓷盘4个, 试管刷,托盘夭平,干燥器4个,滤纸,称量纸,烧杯,量筒,玻棒,25mL纳氏比 色管,红色石蕊试纸 葡萄糖粉剂,乙醇,氯化钠,硫酸钾,盐酸,硝酸,硝酸银,氯化钡,氯化钴, 重铬酸钾,硫酸铜,酚酞,碘 、实验准备 1.精密称取重铬酸钾0.0800g,置100ml量瓶中,加适量水溶解并稀释至刻度, 摇匀,即得比色用重铬酸钾液;取硫酸铜、氯化钴约6.5g分别加适量的盐酸溶液 (1→40)使溶解成100m,即得比色用硫酸铜液和比色用氯化钴液。 2.0.02molL氢氧化钠液:取氢氧化钠滴定液(0.moL)10ml,稀释至50ml。 3.氢氧化钠滴定液(0.lmol):取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml,加水适量 使成1000ml,摇匀。 4!.氢氧化钠饱和溶液:取氢氧化钠适量,加水振摇使溶解成饱和溶液,冷却后, 置聚乙烯塑料瓶中,静至数日,澄清后备用。 5.酚酞指示液:称取lg酚酞溶于100ml乙醇,即得。 6.标准氯化钠:浓度为00 Mgcl/ml,即0.0165mg/ml氯化钠溶液。 7.标准硫酸钾:浓度为0. Meso/ml),即0.18 Img/ml硫酸钾溶液。 8.硝酸银试液:取硝酸银17.5g,加水适量使溶解成1000mn,摇匀即得。 9.25%氯化钡溶液:取氯化钡25g。加水使溶解成100ml,即得。 10.稀硝酸:取浓硝酸105ml,加水稀释至1000mnl,即得 11.稀盐酸:取浓盐酸234ml,加水稀释至100omn,即得(9,.5%-10.5%)
实验一 葡萄糖杂质检查 （一般杂质检查） 一、实验目的 1．通过葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查的原理和意义。 2．熟悉杂质检查的操作方法。 二、主要仪器与试药 电子天平，水浴锅，扁形称量瓶，烘箱，移液管（1ml、2ml、5ml），瓷盘4个， 试管刷，托盘天平，干燥器4个，滤纸，称量纸，烧杯，量筒，玻棒，25mL纳氏比 色管，红色石蕊试纸 葡萄糖粉剂，乙醇，氯化钠，硫酸钾，盐酸，硝酸，硝酸银，氯化钡，氯化钴， 重铬酸钾，硫酸铜，酚酞，碘 三、实验准备 1. 精密称取重铬酸钾 0.0800g, 置 100ml 量瓶中，加适量水溶解并稀释至刻度， 摇匀，即得比色用重铬酸钾液；取硫酸铜、氯化钴约 6.5g,分别加适量的盐酸溶液 (1→40)使溶解成 100ml，即得比色用硫酸铜液和比色用氯化钴液。 2. 0.02mol/L 氢氧化钠液：取氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）10ml，稀释至 50ml。 3. 氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液 5.6ml，加水适量 使成 1000ml，摇匀。 4. 氢氧化钠饱和溶液：取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后， 置聚乙烯塑料瓶中，静至数日，澄清后备用。 5. 酚酞指示液：称取 1g 酚酞溶于 100ml 乙醇，即得。 6. 标准氯化钠：浓度为 0.01mgCl/ml，即 0.0165mg/ml 氯化钠溶液。 7. 标准硫酸钾：浓度为 0. 1mgSO4/ml），即 0.181mg/ml硫酸钾溶液。 8. 硝酸银试液：取硝酸银 17.5g，加水适量使溶解成 1000ml，摇匀即得。 9. 25%氯化钡溶液：取氯化钡 25g。加水使溶解成 100ml，即得。 10. 稀硝酸：取浓硝酸 105ml，加水稀释至 1000ml，即得。 11. 稀盐酸：取浓盐酸 234ml，加水稀释至 1000ml，即得（9.5％-10.5％）。 9
12.碘试液:同碘滴定液(0.lmol),取碘130g加碘化钾36g与水5oml溶解 后,加盐酸3滴与水适量使成1000ml,摇匀,用垂熔玻璃滤器滤过。 四、实验内容 1.酸度取本品2.0g,加水20ml溶解后,加酚酞指示液3滴与0.02molL氢 氧化钠液0.20ml,应显粉红色。 2.溶液的澄清度与颜色 取本品5g,加热水溶解后,放冷。用水稀释至10ml溶液应澄清无色。如显浑 浊,与1号浊度标准液比较,不得更浓;如显色,与对照液(取比色用氯化钴液1.5m, 比色用重铬酸钾液l.5ml与比色用硫酸铜液3ml,加水稀释至25m)1.Om,加水稀 释至10ml比较,不得更深。 3.氯化物 取本品030g,加水溶解使成12ml(如显碱性,可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中 性反应),再加稀硝酸5ml,溶液如不澄清,滤过,置25m纳氏比色管中,加水适 量使成约20m,摇匀,即得供试品溶液。加硝酸银试液0.5ml,用水稀释使成25ml, 摇匀,在暗处放置5min。如发生浑浊,与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液[取 标准氯化钠溶液(l0ugcl/ml)3oml,置25ml纳氏比色管中,加稀硝酸5ml,加水 稀释使成约20ml]。加硝酸银试液.5ml,再加水适量使成25ml,摇匀,在暗处放置 5min比较,不得更深(0010%)。 4.硫酸盐 取本品1.0g,加水溶解使成20ml(如显碱性,可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性 反应)。溶液如不澄清,滤过置25ml纳氏比色管中,加稀盐酸lml,加25%氯化钡 溶液25ml,加水稀释使成25m,摇匀,放置l0min,如发生浑浊,与对照标准液[取 标准硫酸钾(100gSO4/m)溶液1.0ml,置25ml纳氏比色管中,加水稀释使成20ml, 加稀盐酸lm,加25%氯化钡溶液2.5m,加水稀释使成25ml,摇匀,放置10min 比较,不得更浓(0.010%)。 5.乙醇中不溶物 取本品1.0g,加90%乙醇30ml,加热,应溶解成澄明的溶液°
12. 碘试液：同碘滴定液（0.1mol/L），取碘 13.0g,加碘化钾 36g 与水 50ml 溶解 后，加盐酸 3 滴与水适量使成 1000ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。 四、实验内容 1．酸度 取本品 2.0g，加水 20ml 溶解后，加酚酞指示液 3 滴与 0.02mol/L 氢 氧化钠液 0.20ml，应显粉红色。 2．溶液的澄清度与颜色 取本品 5g，加热水溶解后，放冷。用水稀释至 10ml 溶液应澄清无色。如显浑 浊，与 1 号浊度标准液比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液 1.5ml， 比色用重铬酸钾液 1.5ml 与比色用硫酸铜液 3ml，加水稀释至 25ml）1.0ml，加水稀 释至 10ml 比较，不得更深。 3．氯化物 取本品 0.30g，加水溶解使成 12ml（如显碱性，可滴加硝酸使遇石蕊试纸显中 性反应），再加稀硝酸 5ml，溶液如不澄清，滤过，置 25ml 纳氏比色管中，加水适 量使成约 20ml，摇匀，即得供试品溶液。加硝酸银试液 0.5ml，用水稀释使成 25ml， 摇匀，在暗处放置 5min。如发生浑浊，与标准氯化钠溶液一定量制成的对照液[取 标准氯化钠溶液（10μg Cl/ml）3.0ml，置 25ml 纳氏比色管中，加稀硝酸 5ml，加水 稀释使成约 20ml]。加硝酸银试液 0.5ml，再加水适量使成 25ml，摇匀，在暗处放置 5min 比较，不得更深（0.010％）。 4．硫酸盐 取本品 1.0g，加水溶解使成 20ml（如显碱性，可滴加盐酸使遇石蕊试纸显中性 反应）。溶液如不澄清，滤过置 25ml纳氏比色管中，加稀盐酸 1ml，加 25%氯化钡 溶液 2.5ml，加水稀释使成 25ml，摇匀，放置 10min，如发生浑浊，与对照标准液[取 标准硫酸钾（100μg SO4/ml）溶液 1.0ml，置 25ml纳氏比色管中，加水稀释使成 20ml， 加稀盐酸 1ml，加 25%氯化钡溶液 2.5ml，加水稀释使成 25ml，摇匀]，放置 10min 比较，不得更浓（0.010%）。 5．乙醇中不溶物 取本品 1.0g，加 90%乙醇 30ml，加热，应溶解成澄明的溶液①。 10
6.亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品10g,加水10m溶解后,加碘试液1滴,应立即显黄色。 7.干燥失重 取本品约1g(如为较大的结晶,应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒),置已干燥至 恒重的扁形称量瓶中,加盖,精密称定。。然后在105℃千燥至恒重,减失重量不得 超过95% 8.炽灼残渣 取本品1~2g,置己炽灼至恒重的瓷坩锅中,精密称定加硫酸0.5~1ml润湿,低 温加热至硫酸蒸气除尽后,在700~800℃炽灼使完全灰化,移置干燥器内,放冷, 精密称定后,再在700-800℃炽灼至得恒重。所得炽灼残渣不得超过0.1% 9.铁盐 取本品20g,加水20ml溶解后,加硝酸3滴,缓缓煮沸5分钟,放冷,加水 稀释使成45m,加30%硫氰酸铵溶液3m,摇匀,如显色,与标准铁溶液(lOμgFe/m) 20m,用同一方法制成的对照液比较,不得更深(0.001%) 10.重金属 取50ml纳氏比色管两支。一管加标准铅溶液(l0μgPb/ml)2.0ml,醋酸盐缓冲 液2ml,加水至25ml,另一管取本品40g,加水23m溶解。加醋酸盐缓冲液2m1°。 两管各加硫代乙酸胺试液各2ml。摇匀,放置2分钟。同置白纸上,自上面透视, 供试液显出的颜色不得更深。含重金属不得过百万分之五(5pm)。 11.砷盐 取本品2.0g,置检砷瓶中,加水5ml溶解后,加稀硫酸5m与溴化钾-溴试液0.5ml 置水浴上加热约20min。使保持稍过量的溴存在,必要时,再补加溴化钾-溴试液适 量,并随时补充蒸发的水分,放冷。加盐酸5m与水适量使成28ml。加碘化钾试液 5ml,及酸性氯化亚锡试液°5滴在室温放置10分钟后,加锌粒°2g。迅速将瓶塞塞 紧(瓶塞上已安装好装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的检砷管)保持反应温度在 25~40℃间(视反应快慢而定,但不应该超过40℃)。1小时后,取出溴化汞试纸, 将生成的砷斑与标准砷溶液(lμ gAs/ml)一定量制成的标准砷斑比较。颜色不得更 深。含砷量不得过百万分之一(lppm)
6．亚硫酸盐与可溶性淀粉 取本品 1.0g，加水 10ml溶解后，加碘试液 1 滴，应立即显黄色②。 7．干燥失重 取本品约1g（如为较大的结晶，应先迅速捣碎使成2mm以下的小粒），置已干燥至 恒重的扁形称量瓶中，加盖，精密称定③。然后在105℃干燥至恒重，减失重量不得 超过9.5%。 8．炽灼残渣 取本品 1~2g，置已炽灼至恒重的瓷坩锅中，精密称定加硫酸 0.5~1ml 润湿，低 温加热至硫酸蒸气除尽后，在 700~800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷， 精密称定后，再在 700~800℃炽灼至得恒重。所得炽灼残渣不得超过 0.1%。 9．铁盐 取本品 2.0g，加水 20ml 溶解后，加硝酸 3 滴，缓缓煮沸 5 分钟，放冷，加水 稀释使成 45ml，加 30%硫氰酸铵溶液 3ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液（10μgFe/ml） 2.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。 10．重金属 取 50ml纳氏比色管两支。一管加标准铅溶液（10μgPb/ml）2.0ml，醋酸盐缓冲 液 2ml，加水至 25ml，另一管取本品 4.0g，加水 23ml溶解。加醋酸盐缓冲液 2ml④ 。 两管各加硫代乙酸胺试液各 2ml。摇匀，放置 2 分钟。同置白纸上，自上面透视， 供试液显出的颜色不得更深。含重金属不得过百万分之五（5ppm）。 11．砷盐 取本品2.0g，置检砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾-溴试液0.5ml， 置水浴上加热约 20min。使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾-溴试液适 量，并随时补充蒸发的水分，放冷。加盐酸 5ml与水适量使成 28ml。加碘化钾试液 5ml，及酸性氯化亚锡试液⑤ 5 滴在室温放置 10 分钟后，加锌粒⑥ 2g。迅速将瓶塞塞 紧（瓶塞上已安装好装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸的检砷管）保持反应温度在 25~40℃间（视反应快慢而定，但不应该超过 40℃）。1 小时后，取出溴化汞试纸， 将生成的砷斑与标准砷溶液（1μgAs/ml）一定量制成的标准砷斑比较。颜色不得更 深。含砷量不得过百万分之一（1ppm）。 11
标准砷斑的制备:精密吸取标准砷溶液2m,置另一检砷瓶中,加盐酸5l及 水2lml,照上述方法,自“加碘化钾试液5nl.…起依法操作即得 五、注解 ①葡萄糖溶解而淀粉和糊精等不溶 ②存在可溶性淀粉时呈兰色,存在亚硫酸盐时碘液褪色 ③供试品干燥时,应平铺在扁形称量瓶中,厚度不可超过5mm,如为疏松物质, 厚度不可超过1omm。放入烘箱或干燥器进行干燥时,应将瓶盖取下,置称量瓶旁, 或将瓶盖半开进行干燥;取出时,须将称量瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品,应在 干燥后取出置干燥器中放冷至室温,然后称定重量 ④在pH=3.5时PbS沉淀较完全。 ⑤氯化亚锡与锌作用,在锌粒表面形成锌锡齐,起去极化作用,从而使氢气均 匀而连续发生。 ⑥如使用锌粒较大时,用量得酌情增加 六、注意事项 1.比色管的正确使用——选择配对的两支纳氏比色管,用清洁液荡洗除去污物, 再用水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。 2.正确选用量具——根据检査试验一般允许误差为±10%的要求和药品、试剂的 取用量,选择合适的容量仪器。 3.平行操作——标准与样品必须同时进行实验,加入试剂量等均应一致。观察 时,两管受光照的程度应一致,使光线从正面照入,比色时置白色背景上,比浊时 置黑色背景上,自上而下地观察。 七、思考题 1.什么叫杂质限量?如何计算? 2.干燥失重实验时,如何确定已经干燥至恒重?失重率如何计算? 3.溶液颜色检査时,对照液主要为哪几种试液混合得到?
标准砷斑的制备：精密吸取标准砷溶液 2ml，置另一检砷瓶中，加盐酸 5ml 及 水 21ml，照上述方法，自“加碘化钾试液 5ml... ...”起依法操作即得。 五、注解 ①葡萄糖溶解而淀粉和糊精等不溶。 ②存在可溶性淀粉时呈兰色，存在亚硫酸盐时碘液褪色。 ③供试品干燥时，应平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质， 厚度不可超过10mm。放入烘箱或干燥器进行干燥时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁， 或将瓶盖半开进行干燥；取出时，须将称量瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品，应在 干燥后取出置干燥器中放冷至室温，然后称定重量。 ④在 pH=3.5 时 PbS 沉淀较完全。 ⑤氯化亚锡与锌作用，在锌粒表面形成锌锡齐，起去极化作用，从而使氢气均 匀而连续发生。 ⑥如使用锌粒较大时，用量得酌情增加。 六、注意事项 1.比色管的正确使用——选择配对的两支纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物， 再用水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。 2.正确选用量具——根据检查试验一般允许误差为±10%的要求和药品、试剂的 取用量，选择合适的容量仪器。 3.平行操作——标准与样品必须同时进行实验，加入试剂量等均应一致。观察 时，两管受光照的程度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时 置黑色背景上，自上而下地观察。 七、思考题 1．什么叫杂质限量？如何计算？ 2．干燥失重实验时，如何确定已经干燥至恒重？失重率如何计算？ 3．溶液颜色检查时，对照液主要为哪几种试液混合得到？ 12
实验二药物中的杂质检查 (特殊杂质检查) 、实验目的 1.掌握本实验中药物特殊杂质的来源和检査原理。 2.掌握薄层层析法用于特殊杂质检査的一般操作, 、主要仪器与试药 乙酰水杨酸原料,乙酰水杨酸片剂,氯仿,无水乙醇,硫酸铁铵,水杨酸对照 品,苯,黄体酮原料, 电子天平,滤纸,硅胶GF2s4薄层板,展开缸,微量毛细管,紫外灯(254nm), 5mL纳氏比色管 、实验准备 稀硫酸铁铵溶液:取lmo盐酸溶液lml,加硫酸铁铵指示液2m,后再加 水适量使成100ml 2. Imol/盐酸溶液:取盐酸90ml,加水使成1000ml,摇匀 3.硫酸铁铵指示液:取硫酸铁铵8g,加水1o0ml使溶解,即得。 4!.001%水杨酸标准溶液:精密称取水杨酸0.1克,加水溶解后,加冰醋酸lml, 摇匀,再加水使成1000ml摇匀。 四、实验内容 一)乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查(原料) 1.原理: COOH COOH OCOCH3 +H,O OH+ CH3COOH COOF OH +4Fe升 |,Fe+12H 2.方法:
实验二 药物中的杂质检查 （特殊杂质检查） 一、实验目的 1．掌握本实验中药物特殊杂质的来源和检查原理。 2．掌握薄层层析法用于特殊杂质检查的一般操作。 二、主要仪器与试药 乙酰水杨酸原料，乙酰水杨酸片剂，氯仿，无水乙醇，硫酸铁铵，水杨酸对照 品，苯，黄体酮原料， 电子天平，滤纸，硅胶GF254 薄层板，展开缸，微量毛细管，紫外灯（254nm）， 25mL 纳氏比色管 三、实验准备 1. 稀硫酸铁铵溶液：取 1mol/l 盐酸溶液 1ml，加硫酸铁铵指示液 2ml，后再加 水适量使成 100ml。 2. 1mol/l 盐酸溶液：取盐酸 90ml，加水使成 1000ml，摇匀。 3. 硫酸铁铵指示液：取硫酸铁铵 8g，加水 100ml 使溶解，即得。 4. 0.01%水杨酸标准溶液：精密称取水杨酸 0.1 克，加水溶解后，加冰醋酸 1ml， 摇匀，再加水使成 1000ml 摇匀。 四、实验内容 （一）乙酰水杨酸中游离水杨酸的检查（原料） 1．原理： COOH OCOCH3 + H2O COOH OH + CH3COOH 4 Fe3+ COOH OH + 6 Fe( COO O )2 3 Fe + 12H 2．方法： 13