一、高效液相色谱法第3章的特点高效液相色谱分析流程及主要部件HighPerformance liquid三、影响分离的因素Chromatograph, HPLC四、高效液相色谱法的主要分离类型下一页2025/11/10
2025/11/10 第3章 高效液相色谱分析 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、影响分离的因素 四、高效液相色谱法 的主要分离类型 High Performance liquid Chromatograph, HPLC
83-1高效液相色谱法的特点高效液相色谱（HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定相不同可分为：液液分配色谱：液固吸附色谱：离子交换色谱：排阻色谱（凝胶渗透色谱）等，应用非常广泛。早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm，长0.5~5m的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150~200um范围内。即使这样，流速仍然很低（<lmL/min)，分析时间仍然很长。当加压增加流速（真空或空气泵）时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度H.也相应增加了或者说柱效下降了（放弃液相色谱？）。但气相色谱对高分子量的，热稳定性差的和极性强的物质不适用，促使人们加大力度研究液相色谱。60年代未在生产和科研需求的推动下，液相色谱得到了缓慢而扎实的发展2025/11/10未H页页
2025/11/10 高效液相色谱(HPLC)是以溶剂液体为流动相的色谱方法。按照固定 相不同可分为：液液分配色谱；液固吸附色谱；离子交换色谱；排阻色 谱(凝胶渗透色谱)等，应用非常广泛。 早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长0.5~5 m的 玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在 150~200m范围内。即使这样，流速仍然很低(<1mL/min)，分析时间仍 然很长。 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高 度Hmin也相应增加了或者说柱效下降了(放弃液相色谱？)。 但气相色谱对高分子量的，热稳定性差的和极性强的物质不适用， 促使人们加大力度研究液相色谱。60年代未在生产和科研需求的推动下， 液相色谱得到了缓慢而扎实的发展。 §3-1 高效液相色谱法的特点
到60年代未70年代初，由于在技术上采用高压输液泵、新型高效固定相以及高灵敏检测器，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。特点：高速、高效、高灵敏度1.5高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高10-llg。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV一10-g，荧光检测器2.HPLC与GC的比较分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物：HPLC可以分析高沸点高分子量的稳定或不稳定化合物2025/11/10未EA页
2025/11/10 到60年代未70年代初，由于在技术上采用高压输液泵、新型高效固 定相以及高灵敏检测器，才彻底解决了分析时间及柱效的问题。即所谓 的高效液相色谱技术才真正得到广泛应用。 1. 特点：高速、高效、高灵敏度 高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快。 高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱 效很高 高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。 2. HPLC与GC的比较 分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物； HPLC可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物
流动相的选择：GC的流动相为有限的几种“情性”气体，只起运载作用对组分作用小：HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC需高温HPLC通常在室温下进行。应用3.由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于高沸点（非挥发性)和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。2025/11/10未HA页
2025/11/10 流动相的选择：GC的流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用， 对组分作用小；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择 的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分 的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改 进分离。 操作温度：GC需高温；HPLC通常在室温下进行。 3. 应用 由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于高沸点(非挥 发性)和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤其是在生物 学和医学等方面应用极为广泛。 如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、 农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的
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2025/11/10 §3-6 高效液相色谱仪