第二节重要的工具酶
第二节 重要的工具酶
工具酶 基因工程中的工具酶主要是指用 于DNA和RNA分子的切割、连接、聚 合、修饰、反转录等有关的各种酶 系统
工具酶 基因工程中的工具酶主要是指用 于DNA和RNA分子的切割、连接、聚 合、修饰、反转录等有关的各种酶 系统
限制性核酸内切酶(RE) 是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特 定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶， 简称限制酶或切割酶。 根据限制酶的作用特性，一般分为三类： I、川和型 其中常用的是Ⅱ型限制酶
一、限制性核酸内切酶(RE) 是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特 定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键 的核酸内切酶， 简称限制酶或切割酶。 根据限制酶的作用特性，一般分为三类： ——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型 其中常用的是Ⅱ型限制酶
限制酶(·型)识别及切割位点 特异识别及切割4~8个bp长度且具有回文序列的 DNA片断，主要产生3种缺口：5-粘性末端 3-粘性末端 平头末端 回文序列 是指该部位的核苷酸序列呈180旋转对称； 粘性末端 是指经内切酶特异切割后产生的5'~末端突出或3 末端突出的碱基序列，相互具有互补性
限制酶（Ⅱ型）识别及切割位点 特异识别及切割48个bp长度且具有回文序列的 DNA片断，主要产生3种缺口： 5ˊ－粘性末端 3ˊ－粘性末端 平头末端 回文序列 是指该部位的核苷酸序列呈180O旋转对称; 粘性末端 是指经内切酶特异切割后产生的5ˊ－末端突出或3ˊ －末端突出的碱基序列，相互具有互补性
Restriction enzymes (a)Blunt ends(Rsal) Sugar-phosphate Rsal backbone 5 3 5 5 A (b)Sticky 5'ends(EcoRI) EcoRl 5 3 A 5 5'overhangs (c)Sticky 3'ends(Kpnl Kpnl 3'overhangs 5 3 3 88A8→8A898A C A T GG A