心少东理子大 实验4 糖化酶发酵、提取 及活力测定 王丽娟 2017.05
实验4 糖化酶发酵、提取 及活力测定 王丽娟 2017. 05 1
1、实验目的 G中求罪)大等 、了解黑曲霉生长特性，学习糖化酶发酵工艺 •学习酒精沉淀法提取酶制剂的原理，掌握酒精沉淀法提取 糖化酶的方法 ·学习并掌握糖化酶活力测定方法
1、实验目的 2 • 了解黑曲霉生长特性，学习糖化酶发酵工艺 • 学习酒精沉淀法提取酶制剂的原理，掌握酒精沉淀法提取 糖化酶的方法 • 学习并掌握糖化酶活力测定方法
2、实验原理 葡萄糖淀粉酶（glucoamylase, EC.3.3.13)系统名为淀粉- α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内酶制剂中 产量最大的品种。 。 糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开α-1,4键， 也能切开a-1,3键和α-1,6键，生成葡萄糖。 生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉，将活化好的黑曲霉制成 孢子悬浮液，转接到三角瓶直接进行发酵，或转接到三角 瓶作为种子，进行一次扩大培养后，再转接到发酵罐进行 糖化酶发酵 3
2、实验原理 3 • 葡萄糖淀粉酶（glucoamylase，EC.3.3.13）系统名为淀粉- α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶，俗称糖化酶，是国内酶制剂中 产量最大的品种。 • 糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开α-1,4键， 也能切开α-1,3键和α-1,6键，生成葡萄糖。 • 生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉，将活化好的黑曲霉制成 孢子悬浮液，转接到三角瓶直接进行发酵，或转接到三角 瓶作为种子，进行一次扩大培养后，再转接到发酵罐进行 糖化酶发酵
2、实验原理 黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。首先采用过滤法将菌体等杂质 除去，继而对滤液进行浓缩，最后用有机溶剂如乙醇将酶沉 淀出来，对沉淀物进行干燥，加工成成品。 糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端 开始，分解α-1,4键，生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有的醛基 能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠，酸化后析出碘，再用 硫代硫酸钠标准溶液标定，计算酶活力。 酶活力定义：1g固体酶粉（或1mL液体酶），于55℃pH4.6 的条件下，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为一个酶 活力单位，以U/mL(U/g)表示
2、实验原理 4 • 黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。首先采用过滤法将菌体等杂质 除去，继而对滤液进行浓缩，最后用有机溶剂如乙醇将酶沉 淀出来，对沉淀物进行干燥，加工成成品。 • 糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端 开始，分解α-1,4键，生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有的醛基 能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠，酸化后析出碘，再用 硫代硫酸钠标准溶液标定，计算酶活力。 • 酶活力定义：1 g固体酶粉（或1 mL液体酶），于55℃pH 4.6 的条件下，1 h分解可溶性淀粉产生1 mg葡萄糖，即为一个酶 活力单位，以U/mL（U/g）表示
2、实验原理 中求理工大写 5
2、实验原理 5