加入试剂A后,混匀,室温10min,在加Foin 酚B30m,混匀后10min,再第二次加0.2m,混 匀放置30min。于660mm比色,做标准曲线。 2、样品测定 取样品1m按上表加试剂,660nm处比色,对 照标准曲线求出蛋白质浓度。 思考题】 1、Foin-酚法测定蛋白质浓度的原理是什么? 2、影响 Folin-酚法测定蛋白质浓度的准确性的 因素有那些?
加入试剂A后，混匀，室温10min，在加Folin- 酚B 3.0ml，混匀后10min，再第二次加0.2ml，混 匀放置30min。于660nm比色，做标准曲线。 2、样品测定 取样品1ml按上表加试剂，660nm处比色，对 照标准曲线求出蛋白质浓度。 【思考题】 1、Folin-酚法测定蛋白质浓度的原理是什么？ 2、影响Folin-酚法测定蛋白质浓度的准确性的 因素有那些？
四、双缩脲法 【实验目的】 了解双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和方法。 【原理】 蛋白质含有两个以上的肽键,因此有双缩脲反应。 在碱性溶液中蛋白质与cu2+形成紫红色络合物,在 540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内,其颜 色的深浅与蛋白质的浓度成正比,可以用比色法定量 测定 双缩脲法通常用于需要快速但不十分精确的测定
四、双缩脲法 【实验目的】 了解双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和方法。 【原理】 蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。 在碱性溶液中蛋白质与C u2＋形成紫红色络合物，在 540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，其颜 色的深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法定量 测定 双缩脲法通常用于需要快速但不十分精确的测定
【试剂和器材】 1.20mgmL牛血清白蛋白溶液 2.容量瓶10m(×6) 3.试管15cm×15cm(×8) 4.双缩脲试剂:溶解0175g硫酸铜(CuSO4 5H2O)溶于15m水中,在100m容量瓶中加入30m 浓氨水、30m冷蒸馏水和20m饱和氢氧化钠,摇匀, 室温12h定容100m,摇匀备用。在搅拌下加入 300m10%氢氧化钠溶液,用水稀释到1000ml, 贮存在内壁涂以石腊的瓶中。此试剂可长期保存。若 贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制
【试 剂 和 器 材】 1. 2.0mg/mL牛血清白蛋白溶液 2. 容量瓶10ml（×6） 3. 试管1.5cm×15cm（×8） 4. 双缩脲试剂：溶解0.175g硫酸铜（CuSO4 5H2O）溶于15ml水中，在100ml容量瓶中加入30ml 浓氨水、30ml冷蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠，摇匀， 室温1-2h定容100ml，摇匀备用。在搅拌下加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，用水稀释到1000ml， 贮存在内壁涂以石腊的瓶中。此试剂可长期保存。若 贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制
5.吸量管(1ml,2ml,5m) 6.721型分光光度计 【操作步骤】 1.绘制标准曲线 取6只试管编号,按下表加入试剂,即得6种不同 浓度的蛋白质溶液。 另取试管7只,按0、1、2、3、4、5、6编号,1- 6号分别加上述蛋白质溶液30m0号为对照,加30ml 蒸馏水分别加入,各试管中加双缩脲试剂20m!混 匀,紫色出现后,与540nm测定吸光度,闭塞测定法 务必在30min内完成,绘制蛋白质浓度一吸光度曲线
5. 吸量管（1ml，2ml，5ml） 6. 721型分光光度计 【操作步骤】 1. 绘制标准曲线 取6只试管编号，按下表加入试剂，即得6种不同 浓度的蛋白质溶液。 另取试管7只，按0、1、2、3、4、5、6编号，1- 6号分别加上述蛋白质溶液3.0ml0号为对照，加3.0ml 蒸馏水分别加入，各试管中加双缩脲试剂 2.0 ml混 匀，紫色出现后，与540nm测定吸光度，闭塞测定法 务必在30min内完成，绘制蛋白质浓度—吸光度曲线
容量瓶编号牛血清蛋白溶液蒸馏水 蛋白质浓度mgml 1.0 稀释至刻度 02 20 稀释至刻度 04 23456 3.0 稀释至刻度 0.6 4.0 稀释至刻度 08 5.0 稀释至刻度 1.0 6.0 稀释至刻度 1.2
容量瓶编号 牛血清蛋白溶液 蒸馏水 蛋白质浓度mg/ml 1 1.0 稀释至刻度 0.2 2 2.0 稀释至刻度 0.4 3 3.0 稀释至刻度 0.6 4 4.0 稀释至刻度 0.8 5 5.0 稀释至刻度 1.0 6 6.0 稀释至刻度 1.2