本法适用于微量蛋白质浓度测定,对盐类混杂的 情况比较合适,为简便起见,对混合蛋白质溶液,可 用A280×075来表示蛋白质大概浓度。 【注意事项】 由于各种蛋白质的酪氨酸和苯丙氨酸含量不同, 显色深浅随不同蛋白质改变,因而本法只适用于蛋白 质相对浓度的测定,核酸对结果也有影响,尽管进行 了公式校正,但是不同样品干扰成分差异较大,致使 280nm紫外吸收法检测的准确性较差。 【思考题】 1.紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理是什么? 2.影响紫外分光光度法测定准确性的因素有那些?
本法适用于微量蛋白质浓度测定，对盐类混杂的 情况比较合适，为简便起见，对混合蛋白质溶液，可 用A280×0.75来表示蛋白质大概浓度。 【注意事项】 由于各种蛋白质的酪氨酸和苯丙氨酸含量不同， 显色深浅随不同蛋白质改变，因而本法只适用于蛋白 质相对浓度的测定，核酸对结果也有影响，尽管进行 了公式校正，但是不同样品干扰成分差异较大，致使 280nm紫外吸收法检测的准确性较差。 【思考题】 1. 紫外分光光度法测定蛋白质浓度的原理是什么？ 2. 影响紫外分光光度法测定准确性的因素有那些？
、 Folin酚法测定蛋白质浓度 实验目的】 熟悉Foin-酚法测定蛋白质浓度的方法 【实验原理 Foin-酚法又称 lowry法。首先在碱性溶液中形 成铜-蛋白质复合物,后与磷钼酸磷钨酸作用,产生 深蓝色的钼蓝和钨蓝复合物,这中复合物在750nm 和660nm处有最大吸收峰,颜色与蛋白质浓度成正 比,进而可以计算蛋白质浓度
三、Folin-酚法测定蛋白质浓度 【实验目的】 熟悉Folin-酚法测定蛋白质浓度的方法。 【实验原理】 Folin-酚法又称lowry法。首先在碱性溶液中形 成铜-蛋白质复合物，后与磷钼酸-磷钨酸作用，产生 深蓝色的钼蓝和钨蓝复合物，这中复合物在750nm 和660nm处有最大吸收峰，颜色与蛋白质浓度成正 比，进而可以计算蛋白质浓度
【材料、试剂、与器具】 1.Foin-酚A(碱性铜试剂):20g碳酸氢钠和49氢 氧化钠双蒸水定容1000m为储备液1;0.59五水硫酸铜19 Na3C§H5O7,定容100m,为储备液2。 将50m储备液1和1m储备液2混合为溶液A混合后 日有效。 2. Folin-酚B:100g钨酸钠、25g钼酸钠、100g蒸馏 水、50m80%磷酸、100m浓硫酸在1500m磨口圆底小瓶 中混匀后接上磨口冷凝管,回流10h再加入硫酸锂150g 蒸馏水50m及液溴数滴,开口煮沸15min,冷却,稀释至 100m过滤,至微绿,储存于棕色瓶。临用前氢氧化钠滴 定,用酚酞做指示剂,据滴定结果,将试剂稀释至1moL 的酸,冰箱保存
【材料、试剂、与器具】 1. Folin-酚A（碱性铜试剂）：20g碳酸氢钠和4g氢 氧化钠双蒸水定容1000ml为储备液1；0.5g五水硫酸铜1g Na3C6H5O7，定容100ml，为储备液2。 将50ml储备液1和1ml储备液2混合为溶液A,混合后一 日有效。 2. Folin-酚B：100g钨酸钠、25g钼酸钠、100g 蒸馏 水、50ml80%磷酸、100ml浓硫酸在1500ml磨口圆底小瓶 中混匀后接上磨口冷凝管，回流10h再加入硫酸锂150g、 蒸馏水50ml及液溴数滴，开口煮沸15min，冷却，稀释至 100ml过滤，至微绿，储存于棕色瓶。临用前氢氧化钠滴 定，用酚酞做指示剂，据滴定结果，将试剂稀释至1mol/L 的酸，冰箱保存
3、标准浓度牛血清蛋白溶液20ygy/m 4、721分光光度计 5、刻度吸管0.5m(×1),1m(×2), 5ml(×1 6、试管1.5cmX15cm8只 7、恒温水浴 【操作步骤】 1、标准曲线的绘制
3、标准浓度牛血清蛋白溶液200μg/ ml 4、721分光光度计 5、刻度吸管0.5ml（×1），1ml（×2）， 5ml（×1） 6、试管1.5cmX15cm8只 7、恒温水浴 【操作步骤】 1、标准曲线的绘制
取6只试管,按下表加入试剂 试剂 0 2 345 牛血清蛋白溶液 00204060.81.0 蒸馏水 4.54.34.13.93735 Folin-酚A 1.01.01.01.01.010 第一次0.3030303030.3 酚 第二次020202020202 总体积 606060606060 OD660
取6只试管，按下表加入试剂: 试 剂 0 1 2 3 4 5 牛血清蛋白溶液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水 4.5 4.3 4.1 3.9 3.7 3.5 Folin-酚A 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 酚 第一次 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 第二次 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 总体积 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 6.0 OD660