菌种保藏 现行的菌种保藏方法有下列诸种:
一、菌种保藏 • (一)低温保藏法 • (二)低温定期移植法 • (三)石蜡油低温保藏法 • (四)干燥保藏 • (五)甘油管保藏法 • (六)真空冷冻干燥法 • (七)液氮超低温保存 现行的菌种保藏方法有下列诸种:
)低温保藏法 这是一种常用的简便方法。一般的斜面孢 液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大 米、小米或碎玉米制成的孢子,可以放在 AC冰箱内保藏,这种温度条件下不能使 菌体进入休眠,而仅是抑制微生物的生命 活动。因此,保藏时间不宜过长,三般不 超过12个月为宜。本方法虽然简便,但 由于菌株处于较高的水平活性下,这对保 藏株的生产性状是不利的,因此,生产菌 种一般不采用此法保藏
(一)低温保藏法 • 这是一种常用的简便方法。一般的斜面孢 子、液态孢子、斜面种子以及用麸皮、大 米、小米或碎玉米制成的孢子，可以放在 4℃冰箱内保藏，这种温度条件下不能使 菌体进入休眠，而仅是抑制微生物的生命 活动。因此，保藏时间不宜过长，一般不 超过1～2个月为宜。本方法虽然简便，但 由于菌株处于较高的水平活性下，这对保 藏株的生产性状是不利的，因此，生产菌 种一般不采用此法保藏
二)低温定期移植法 把培养好的斜面种放在低温干燥处保存 定期移植,一般36个月移植一次(视菌种 特征而定)。也可以用穿刺培养,定期移植 法保藏细菌,其效果也较好。穿刺培养是 将含0.6%0.8%的琼脂培养基装试管灭 菌后直立冷凝后,用接种针尖挑取少量菌 体,垂直刺入琼脂培养基中心,放在适当 温度下培养 菌长好后即可放低温保存 此法较斜面保存有利,大肠杆菌可保藏2年 以上不发生明显变异
(二)低温定期移植法 • 把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存， 定期移植，一般3～6个月移植一次(视菌种 特征而定)。也可以用穿刺培养，定期移植 法保藏细菌，其效果也较好。穿刺培养是 将含0.6％～0.8％的琼脂培养基装试管灭 菌后直立冷凝后，用接种针尖挑取少量菌 体，垂直刺入琼脂培养基中心，放在适当 温度下培养，待菌长好后即可放低温保存， 此法较斜面保存有利，大肠杆菌可保藏2年 以上不发生明显变异
)低温定期移植法 斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷, 即容易发生遗传变异;连续传代可使 些生产性状丢失或减弱,也易于污染杂 菌。因此,些贵重菌株及生产优良菌 株不宜用此法保嶽
(二)低温定期移植法 • 斜面定期移植与穿刺移植法有其缺陷， 即容易发生遗传变异；连续传代可使一 些生产性状丢失或减弱，也易于污染杂 菌。因此，一些贵重菌株及生产优良菌 株不宜用此法保藏
(三)石蜡油低温保藏法 本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖 灭菌的液体石蜡,达到菌体与空气隔绝 使菌处于生长和代谢停止状态,同时石 蜡油还防止水分蒸发,在低温下达到较 长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求 在44℃下。液体石蜡法适用于不产孢 子的菌种
(三)石蜡油低温保藏法 • 本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖 灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝， 使菌处于生长和代谢停止状态，同时石 蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较 长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求 在-4～4℃下。液体石蜡法适用于不产孢 子的菌种