纸，用绳扎好。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。8、灭菌将上述培养基于121.3℃（0.11Mpa）湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。9、摆斜面灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使斜面的长度不超过试管总长的1/2。若制平板培养基，则培养基装入三角瓶中灭菌后，无菌操作倒入灭菌过的平皿中，约1.5一2mm厚。10、无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24一28h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。（二）高氏1号固体培养基的配制高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉20g，KNO3lg，NaCI0.5g，1K2HPO4-3H200.5g，MgSO4-7H200.5g,FeSO47H200.01g，琼脂15~20g，水1000mL，pH7.4~7.6。图1-3试管与试管帽A.细菌学试管：B.螺帽：C.塑料帽D.金属帽：E.棉塞1、称量和溶解按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将其调成糊状，再加至少于所需水量的水，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解，再加入其他万分依次溶解。对微量成分FeSO4·7H2O可先配成高浓度的贮备液后再加入，方法是先在10mL中加入0.1g的FeSO4-7H2O，配成浓度为0.01g/mL的贮备液，再在1000mL培图1-4摆斜面
6 纸，用绳扎好。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 8、灭菌 将上述培养基于 121.3℃（0.11Mpa）湿热灭菌 20min。如因特殊情况不能 及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。 9、摆斜面 灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜 度，使斜面的长度不超过试管总长的 1/2。 若制平板培养基，则培养基装入三角瓶中灭菌后，无菌操作倒入灭菌过的平皿中， 约 1.5—2mm 厚。 10、无菌检查 将灭菌的培养基放入 37℃温箱中培养 24—28h，无菌生长即可使用， 或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。 （二）高氏 1 号固体培养基的配制 高氏 1 号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下： 可溶性淀粉 20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g， K2HPO4·3H2O 0.5g ， MgSO4·7H2O 0.5g ， FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂 15~20g，水 1000mL， pH7.4~7.6。 1、称量和溶解 按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将其调成 糊状，再加至少于所需水量的水，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解，再加入其他 万分依次溶解。对微量成分 FeSO4·7H2O 可先配成高浓度的贮备液 后再加入，方法是先在 10mL 中加入 0.1g 的 FeSO4·7H2O ， 配 成 浓度为 0.01g/mL 的贮备液，再在 1000mL 培 图 1-4 摆斜面 图 1-3 试管与试管帽 A.细菌学试管；B.螺帽；C.塑料帽 图 1-2 棉塞 D.金属帽；E.棉塞 A.正确 B.不正确
养基中加入以上贮备液1mL即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白培养基配制。2、pH调节、分装、包扎及无菌检查同牛肉膏蛋白陈培养基配制。（三）马丁民固体培养基的配制马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下：K2HPO47H201g，MgSO4.7H200.5g，蛋白陈5g，葡萄糖10g，琼脂15~20g，3.3mL1%孟加拉红水溶液，0.3mL1%链霉素水溶液，水1000mL，自然pH。1、称量和溶解先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需的水中。待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积，在1000mL培养液中加入1%的孟加拉红水溶液3.3mL，混匀后，加入琼脂加热融化，方法同牛肉营蛋白陈培养基配制。2、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白陈培养基配制。3、链霉素的加入链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液（配好的链霉素溶液保存于-20℃），在1000mL培养基中加1%链霉素水溶液0.3mL，混匀。（四）阿须贝（Ashby)无氮琼脂培养基此培养基用于分离自生固氮菌，其配方如下：甘露醇（或葡萄糖15g或煎糖15g）10g，K2HPO4:7H2O0.2g,NaC10.2g,MgSO47H00.g,CaC035g.CaSO4-2H2O0.1g,水1000mL,琼脂18~20g，pH7.0。配制方法法如同牛肉膏蛋白陈培养基配制方法。五、注意事项1、称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖以免吸潮。调pH时要小心操作，避免回潮。不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。2、若配制液体培养基，则不加琼脂；若配制半固体培养基，1000mL水中则加入5~8g琼脂。六、实验报告记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。7
7 养基中加入以上贮备液 1mL 即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。 2、pH 调节、分装、包扎及无菌检查 同牛肉膏蛋白胨培养基配制。 （三）马丁氏固体培养基的配制 马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下： K2HPO4·7H2O1 g ，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g，琼脂 15~20g，3.3mL1％ 孟加拉红水溶液，0.3mL1％链霉素水溶液，水 1000mL，自然 pH。 1、称量和溶解 先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需的水中。 待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积，在 1000mL 培养液中加入 1％的孟加拉红水 溶液 3.3mL，混匀后，加入琼脂加热融化，方法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。 2、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制。 3、链霉素的加入 链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化后待温度降至 45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成 1％的溶液（配好的链霉素溶液保存于-20℃）， 在 1000mL 培养基中加 1％链霉素水溶液 0.3mL，混匀。 （四）阿须贝(Ashby)无氮琼脂培养基 此培养基用于分离自生固氮菌，其配方如下： 甘露醇（或葡萄糖 15g 或蔗糖 15g）10g，K2HPO4·7H2O 0.2g, NaCl 0.2g, MgSO4·7H2O 0.g, CaCO3 5g, CaSO4·2H2O 0.1g, 水 1000mL,琼脂 18~20g ,pH 7.0。 配制方法法如同牛肉膏蛋白胨培养基配制方法。 五、注意事项 1、称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖以免吸潮。调 pH 时要小 心操作，避免回潮。不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。 2、若配制液体培养基，则不加琼脂；若配制半固体培养基，1000mL 水中则加入 5~8g 琼脂。 六、实验报告 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点
七、思考题1、配制固体培养基有哪几个步骤？在操作过程中应注意那些什么问题？为什么？2、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培养基如何进行无菌检查？3、试设计对饮料进行无菌检查的实验。8
8 七、思考题 1、配制固体培养基有哪几个步骤？在操作过程中应注意那些什么问题？为什么？ 2、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌 的培养基如何进行无菌检查？ 3、试设计对饮料进行无菌检查的实验
实验2消毒与灭菌I干热灭菌一、目的了解干热灭菌的原理和应用范围：学习掌握干热灭菌的操作技术。二、原理只杀死病原微生物，称之为消毒：把所有微生物杀死，称之为灭菌：把物体上的微生物去除掉，称之为除菌。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160~170℃），时间要长（1~2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引燃烧。用于干热灭菌的设备主要是电烘箱或干燥箱。三、材料、试剂与器具器具培养血、试管、吸管、电烘箱等。四、操作步骤1、将包好的待灭菌物品（培养皿、试管、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通：灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以防包装纸烤焦起火。2、接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升。当温度升到100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止加温，此时如果还未达到所需的160~170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复调节，直至达到所需温度。3、当温度升达到160~170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度2h。4、切断电源、自然降温。4、待电烘箱内温度降到70℃以下后，才能打开箱门（以免骤然降温导致玻璃器血炸裂）。取现灭菌物品。五、注意事项干热灭菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。六、实验报告9
9 实验 2 消毒与灭菌 Ⅰ 干热灭菌 一 、目的 了解干热灭菌的原理和应用范围；学习掌握干热灭菌的操作技术。 二、原理 只杀死病原微生物，称之为消毒；把所有微生物杀死，称之为灭菌；把物体上的微 生物去除掉，称之为除菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。与湿热 灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160~170℃），时间要长（1~2h），但干热灭菌温度不 能超过 180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引燃烧。用于干热灭菌的设备主 要是电烘箱或干燥箱。 三、材料、试剂与器具 器具 培养皿、试管、吸管、电烘箱等。 四、操作步骤 1、将包好的待灭菌物品（培养皿、试管、吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。 物品不要摆得太挤，以免妨碍空气流通；灭菌物品不要接触电烘箱内壁的铁板，以 防包装纸烤焦起火。 2、接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐 渐上升。当温度升到 100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表 示箱内停止加温，此时如果还未达到所需的 160~170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮， 如此反复调节，直至达到所需温度。 3、当温度升达到 160~170℃时，恒温调节器会自动控制调节温度，保持此温度 2h。 4、切断电源、自然降温。 4、 待电烘箱内温度降到 70℃以下后，才能打开箱门(以免骤然降温导致玻璃器皿炸 裂)。取现灭菌物品。 五、注意事项 干热灭菌过程，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。 六、实验报告
检查无菌的效果。七、思考题1、在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？2、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度要高，时间要长？Ⅱ高压蒸气灭菌一、目的1、了解高压蒸气灭菌的原理。2、学习掌握高压蒸气灭菌的操作方法。二、原理高压蒸气灭菌的是将待灭菌的物品放在一个密闭的压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气将锅内的冷空气从排气阀中驱尽后关闭排气阀，继续加热，此时锅内就充满纯水蒸气而又不能溢出，则增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。此时可有效地杀死包括热抗性孢子在内的各种微生物。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体含水分高，蛋白质较易凝固。因蛋白质含水量增加，凝固所需温度降低（表2-1)：二是湿热的穿透力比干热大（表2-2）：三是湿热的蒸气有潜热存在，1g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.2kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。表2-1蛋白质含水量与凝固所需温度的关系卵白蛋白含水量/%30分钟内凝固所需温度/℃50562574~801880~9061450160~170在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内的冷空气是否排尽是极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压。所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气的水蒸气的温度低于饱和水蒸气的温度。灭菌锅内留有不同的分量空气时，压力与温度的关系见表（2-3）10
10 检查无菌的效果。 七、思考题 1、在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？ 2、为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度要高，时间要长？ Ⅱ 高压蒸气灭菌 一、目的 1、了解高压蒸气灭菌的原理。 2、学习掌握高压蒸气灭菌的操作方法。 二、原理 高压蒸气灭菌的是将待灭菌的物品放在一个密闭的压灭菌锅内，通过加热，使灭菌 锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气将锅内的冷空气从排气阀中驱尽后关闭排气阀， 继续加热，此时锅内就充满纯水蒸气而又不能溢出，则增加了灭菌锅内的压力，从而使沸 点高于 100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。此时可有效地杀死包 括热抗性孢子在内的各种微生物。 在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体含水 分高，蛋白质较易凝固。因蛋白质含水量增加，凝固所需温度降低(表 2-1)；二是湿热的 穿透力比干热大（表 2-2）；三是湿热的蒸气有潜热存在，1g 水在 100℃时，由气态变为 液态时可放出 2.2kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增 加灭菌效力。 表 2-1 蛋白质含水量与凝固所需温度的关系 卵白蛋白含水量/% 30 分钟内凝固所需温度/℃ 50 56 25 74~80 18 80~90 6 145 0 160~170 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内的冷空气是否排尽是极为重要，因为空气 的膨胀压大于水蒸气的膨胀压。所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气的 水蒸气的温度低于饱和水蒸气的温度。灭菌锅内留有不同的分量空气时，压力与温度的 关系见表（2-3）