识别位点在DNA分子上出现的频率 推测酶切割位点出现的频率对于推断DNA酶切片段大小很有用。假定4种 核苷酸在DNA分子上出现的频率相同,那么靶序列为6个核苷酸的内切酶在每 46(=4096)个核苷酸中酶切位点就有一次出现机会。据此推算,一条4900bp 长的DNA中有12个6核苷酸识别序列的酶切位点(490004096)。但事实上并 非真正如此,因为DNA分子中4种碱基的出现频率并不均等。 ECO82 Mnl I Apo BstF5 I ECOR Hin8‖ Tsp509 I CvA‖ Mnl I Bst295 I Hsp92 Bst29 I Dde I Na‖l Bst295 I HinGE Fok I BSu36 BCC I Sts I Dde l GAATTCTAAGGATGGGCATGGGAGGGGGTGGGGTTTCAACCTGAGGATTTTT CTTAAGATTCCTACCCGTACCCTCCCCCACCCCAAAGTTGGACTCCTAAAAA
推测酶切割位点出现的频率对于推断DNA酶切片段大小很有用。假定4种 核苷酸在DNA分子上出现的频率相同，那么靶序列为6个核苷酸的内切酶在每 4 6（=4096）个核苷酸中酶切位点就有一次出现机会。据此推算，一条4900bp 长的DNA中有12个6核苷酸识别序列的酶切位点（49000/4096）。但事实上并 非真正如此，因为DNA分子中4种碱基的出现频率并不均等。 识别位点在DNA分子上出现的频率
第一节限制性核酸内切酶 1、限制性核酸内切酶的发现 限制性核酸内切酶的分类合命名 3、Ⅱ型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应
1、限制性核酸内切酶的发现 2、限制性核酸内切酶的分类合命名 3、II型限制性核酸内切酶的基本特性 4、限制性核酸内切酶的消化反应 第一节 限制性核酸内切酶
酶单位的定义和影响酶活性的因素 一个酶单位(U)指:在理想的反应条件(适宜的 缓冲液和反应温度,通常为37℃)下,50μ反应体系 中完全降解1μADNA所需要的酶量。 影响酶活性的因素很多,最重要的有: A。DNA的纯度和甲基化程度 B。甘油的含量(不超过5%) Buffer(10X)2.0μ C。反应体系中的离子强度 Water 165μL D。反应体系的pH值 DNA 1.0μL F。反应的温度条件 EI zyme 0.5L (通常为37℃) Volume 20.0uL
一个酶单位（U）指：在理想的反应条件（适宜的 缓冲液和反应温度，通常为37℃）下，50L反应体系 中完全降解1 g DNA所需要的酶量。 影响酶活性的因素很多，最重要的有： A。DNA的纯度和甲基化程度 B。甘油的含量（不超过5%） C。反应体系中的离子强度 D。反应体系的pH值 F。反应的温度条件 （通常为37℃ ） 酶单位的定义和影响酶活性的因素 Buffer (10X) 2.0 L Water 16.5 L DNA 1.0 L Enzyme 0.5 L Volume 20.0 L
酶切反应的基本步骤 CK CK T M 加反应液37℃1h 电泳 紫外分析 Buffer(10X) 2.0 ul Water 16.5μL 1.0kb DNA 1.0uL 1.0kb 0.6kb Enzyme 0.5 0.5kb 0. 4kb Volume 20.0uL
酶 切 反 应 的 基 本 步 骤 ＋ － 加反应液 37℃ 1h 电泳 紫外分析 CK M Buffer (10X) 2.0 L Water 16.5 L DNA 1.0 L Enzyme 0.5 L Volume 20.0 L 1.0kb 1.0kb 0.4kb 0.5kb 0.6kb T CK T M
第二章基因操作的工具酶 Genetic engineering is largely an exercise in carefully controlled enzymology. a variety of enzymes form the basic toolkit of the genetic engineer. 第一节限制性核酸内切酶及其应用 第二节DNA连接酶及其应用 第三节DNA聚合酶及其应用 第四节修饰性工具酶
第二章 基因操作的工具酶 第一节 限制性核酸内切酶及其应用 第二节 DNA连接酶及其应用 第三节 DNA聚合酶及其应用 第四节 修饰性工具酶 Genetic engineering is largely an exercise in carefully controlled enzymology. A variety of enzymes form the basic toolkit of the genetic engineer