发酵制药子学习情境1.3干扰素发酵
子学习情境1.3 干扰素发酵 发 酵 制 药
基因工程菌株PseudomonasputidaVG84[pVG3]工程菌株应该具备假单胞杆荣宿主细胞的特征和生产于扰素的能力。基因工程菌的特性如下：1、宿主细胞假单胞杆菌特性（1）细胞形态。革兰阴性，可运动，有英膜，无芽抱，杆状，长度为3~5um。（2）菌落特征。在LB琼脂培养基上，30C培养24h，其菌落直径为2.5~3.0Omm灰绿色半透明状。菌落之间结构相同，具有黏稠性2、生化特性熊，粉合工聚液另擦性慧养不鑫利用昏碟化伟用进多合成荧光色素。菌株为苏氨酸营养缺陷型，奇以莉角L-缬复酸、DL-精氨酸和L-苏氨酸作为碳源。3、遗传特性细胞中携带pVG3质粒，具有硫酸链霉素、盐酸DNA中G和C的含量为63%。四环素和氨卡青霉素的抗性。4、生产能力具有生产干扰素-a2b的能力其放射性免疫学效价不低于2.0×IO9IU/LLOGO
LOGO ▪ 基因工程菌株Pseudomonas putida VG84[pVG3]工程菌株应该具备假单胞杆 菌 ▪ 宿主细胞的特征和生产于扰素的能力。基因工程菌的特性如下： ▪ 1、宿主细胞假单胞杆菌特性 ▪ (1)细胞形态。革兰阴性，可运动，有荚膜，无芽抱，杆状，长度为3～5µm。 ▪ (2)菌落特征。在LB琼脂培养基上，30℃培养24h，其菌落直径为2.5～3.Omm， ▪ 灰绿色半透明状。菌落之间结构相同，具有黏稠性。 ▪ 2、生化特性 ▪ 不能将明胶、淀粉、聚-β-羟丁酸液化为可溶性单糖，不能利用反硝化作用进 行厌氧呼吸，能够合成荧光色素。菌株为苏氨酸营养缺陷型，可以利用L-缬氨 酸、DL-精氨酸和L-苏氨酸作为碳源。 ▪ 3、遗传特性 ▪ DNA中G和C的含量为63%。细胞中携带pVG3质粒，具有硫酸链霉素、盐酸 四环素和氨卡青霉素的抗性。 ▪ 4、生产能力 ▪ 具有生产干扰素- a 2b的能力，其放射性免疫学效价不低于2.O×lO9IU/L
任务1菌种库和工作菌种库的建立及保存LOGO
LOGO 任务1 菌种库和工作菌种库的建立及保存
1、菌种库的建立、传代及保存从原始菌种库出发，传代、扩增后，冻干保存，作为主代菌种库（Mastercellbank，MCB），主代菌种库不得进行选育工作。从主代菌种库传代、扩增后，甘油管保存，作为工作菌种库(Workingcellbank，WcB)。工作种子库也可由上一代工作种子库传出，但每次只限传三代。每批主代菌种库均进行划线LB琼脂平板、涂片革兰氏染色、对抗生素的抗性、电镜检查生化反应、干扰素的表达量、表达的干扰素型别、质粒检查的检定，合格后方可投产。原始菌种库、主菌种库和工作菌种库于-70它以下温度保存LOGO
LOGO 1、菌种库的建立、传代及保存 ▪ 从原始菌种库出发，传代、扩增后，冻干保存，作为主代 菌种库(Master cell ▪ bank,MCB)，主代菌种库不得进行选育工作。从主代菌种 库传代、扩增后，甘油管保存，作为工作菌种库(Working cell bank,WCB)。工作种子库也可由上一代工作种子库传 出，但每次只限传三代。每批主代菌种库均进行划线LB琼 脂平板、涂片革兰氏染色、对抗生素的抗性、电镜检查、 生化反应、干扰素的表达量、表达的干扰素型别、质粒检 查的检定，合格后方可投产。 ▪ 原始菌种库、主菌种库和工作菌种库于-70它以下温度保存
2、工作菌种库的建立及保存（1)培养基制备。生产过程中使用的培养基均按一定工艺要求配制。2）接种、转移及培养。取12支主代菌种库菌种接大摇瓶内摇床培养，至吸光值（OD值）为5.5土1.0。将已培养好的摇瓶种子液转移至种子罐中，通人无菌空气，培养至吸光值符合放罐要求（OD值为8.0土2.0）。种子罐培养结束后，无菌操作转移到离心管中，离心l5mmn，加新鲜菌种培养基，将菌体制成菌悬液，并加入甘油使其浓度达到18%，分装于Ependorf管中，每支（1.0±0.2）mL。（3）保存。分装完毕，于-20℃放置16~20h，在-70℃下可保存3年。LOGO
LOGO 2、工作菌种库的建立及保存 ▪ (1)培养基制备。生产过程中使用的培养基均按一定工艺要 求配制。 ▪ (2)接种、转移及培养。取12支主代菌种库菌种接大摇瓶内， 摇床培养，至 ▪ 吸光值(OD值)为5.5±1.0。将己培养好的摇瓶种子液转移 至种子罐中，通人无菌空气，培养至吸光值符合放罐要求 (OD值为8.0±2.0)。种子罐培养结束后，无菌操作转移到 离心管中，离心l5mmn，加新鲜菌种培养基，将菌体制成 菌悬液，并加入甘油使其浓度达到18%，分装于Ependorf 管中，每支(1.0±0.2)mL。 ▪ (3)保存。分装完毕，于-2O℃放置16～20h，在-70℃下可 保存3年