(2)有的产生粘性末端 识别特定碱基顺序,为回文对称序列,又称反向重复序列: 从两个方向阅读而序列相同的序列。 如 ECoR I 3- CTTAAG-53 CTTAAG一5 AATTC-3 3一 CTTAA 5 3 -cTTAAG-3 5
(2) 有的产生粘性末端 从两个方向阅读而序列相同的序列。 识别特定碱基顺序，为回文对称序列,又称反向重复序列： 如EcoRⅠ：
表9-1、部分常用的限制性酶 限制性名称源 限制性识别及前切位点前切后的未端序列 Bamh I (Bacillus amyloliquefaciens) G/GATCC-3 5′- GGATCC 3-CCTAG/G-5 CCTAGO-5′ Bcl I(Bacillus caldolyticus) 5′- T/GATA-3 5- TGATCA-3 3- ACTAG/T-5′ 3-ACTAGT-5 EcoR I (Escherichia coli) 5-/AATTC-3 5-GAATTC-3 3- CTTAA/-5′ 3 -CTTAAG-5 HindIii( Haemophilus infuenzae)5′-A/ AGCTT-3′ 5′- AAG CTT-3 3.-TTCGAA-5 TCGAA-5 Hpa i (Haemophilus parainfluenzae) 5'-GTT/AAC-3 5′- GTTAAC-3 3-CAATTG-5 3- CAATTG-5′ Not i (Nocardia otitidis) 5′- GC/GGCCGO-3 5′- GCGGCCGO-3 3-CGCCGG/CG-5 3-CGCCGGCG-5 Pst I (Providencia stuartiI) 5-CTGCANG-3 CTGCAG-3 3-G/ ACGTC-5′ GACGTO-5′ Sal I (Streptomyces albus) 5-G/TCGAC-3 5: -GTCGAC -3 3-CAGCT/G 3-CAGCTG-5' Sau3a I (Staphylococcus aureus) 5'-/GATC-3 GATC-3 3-CTAG/-5' 3- CTGAC-5′ m I (Serratia marcescens) - CCC/GGG-3′ 5′- CCCGGO-3 3'-GGG/CCC-5 3'-GGGCCC-5 表中的斜线()表明切割位点
载体( vector): 载体:将“目的”基因导入受体细胞的运载工具。 DNA片段与适合的载体DNA连接构成重组DNA→在 载体DNA的运载下,高效率地进入宿主细胞,并在其中进 行复制。 DNA载体:质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母菌人工 染色体等
载体：将“目的”基因导入受体细胞的运载工具。 DNA片段与适合的载体DNA连接构成重组DNA → 在 载体DNA的运载下，高效率地进入宿主细胞，并在其中进 行复制。 DNA载体：质粒、噬菌体、病毒、细菌或酵母菌人工 染色体等。 三、载体（vector）：
载体的条件: ①.具有复制原点,能自我复制; ②.具多克隆位点( multiple EcoR I Sac I Kpn I Sma I BamH bal h c1 oningsite,MS或 Lacz Polylinker region)即有多 Lac I 种限制酶的切点; on U C18 2686 bps ③.选择时的遗传标记,如 抗生素基因; ATpr ④.易从宿主细胞中回收。 图9—3细菌质粒pUC18 pUC18具有细菌染色体的1cI基因及 部分1acz基因,可用α-互补法选择阳
载体的条件： ①.具有复制原点，能自我复制； ②.具多克隆位点(multiple cloningsite，MCS 或 Polylinker region)即有多 种限制酶的切点； ③.选择时的遗传标记，如 抗生素基因； ④.易从宿主细胞中回收
()、细菌质粒: 质粒是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 质粒具有重组表型检测标记,检测是否携带外源DNA 片段。 在细胞内的复制程度: 严紧型:一个细菌细胞内的质粒数量有1-2个 松驰型:每个细胞内有的20-60个
㈠、细菌质粒： 质粒是细菌细胞内独立于细菌染色体而自然存在的、 能自我复制、易分离和导入的环状双链DNA分子。 质粒具有重组表型检测标记，检测是否携带外源DNA 片段。 在细胞内的复制程度： 严紧型：一个细菌细胞内的质粒数量有1-2个； 松驰型：每个细胞内有的20-60个