限制性内切核酸酶 1.限制性内切酶( restriction enzyme) 种水解DNA的磷酸二脂酶,遗传工程中重要工具。 这种酶能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列, 在这一段序列内将双链DNA分子切断 细菌细胞中存在限制修饰系统: 限制:降解外源DNA,防御异源遗传信息进入的手段。 修饰:修饰外源DNA片段后,保留在新细胞中
1. 限制性内切酶(restriction enzyme)： 一种水解DNA的磷酸二脂酶，遗传工程中重要工具。 这种酶能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列， 在这一段序列内将双链DNA分子切断。 细菌细胞中存在限制修饰系统： 限制：降解外源DNA，防御异源遗传信息进入的手段。 修饰：修饰外源DNA片段后，保留在新细胞中。 二、限制性内切核酸酶
限制性内切酶 ECoR I: 识别序列:回纹对称序列( palindrome),不同生物的DNA具 有相同识别序列。 酶切方式:以交错方式切断5-Amc DN双链,产生二个相同的单3-CA 5二6T队一5 链粘性末端。 AATTC—3 重组过程:两种片段在适宜3—CTA 条件下,可经碱酸二脂链, 连接成重组DNA分子 GAattc一3 3-CTTAAG---5
限制性内切酶EcoRⅠ： 识别序列：回纹对称序列(palindrome) ，不同生物的DNA具 有相同识别序列。 酶切方式：以交错方式切断 DNA双链，产生二个相同的单 链粘性末端。 重组过程：两种片段在适宜 条件下，可经碱酸二脂链， 连接成重组DNA分子
(1).限制性内切酶的命名: 根据其来自的生物名称,用英文字母和数字表示; ①. ECoRI来自 Escherichia coli ②.HindⅢ来自 Haemophilus inf1 uenzae
⑴．限制性内切酶的命名： 根据其来自的生物名称，用英文字母和数字表示； ②. HindⅢ来自Haemophilus influenzae。 ①. EcoRI 来自Escherichia coli；
(2).限制性内切酶的类别: 第Ⅰ类酶:每隔一段DNA序列随机切割双链DNA分子 没有序列特异性,酶切位点不定。 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大 (约300000,作用时需ATP、Mg++等辅助因子。 第Ⅱ类酶:能识别一段特异的DNA序列,准确地酶切双 链DNA的特异序列。 如 ECORi(大肠杆菌)、HindⅢ(嗜血杆菌),分子量较小(约 20000-100000,作用时需Mg2+存在
⑵．限制性内切酶的类别： 第Ⅰ类酶:每隔一段DNA序列随机切割双链DNA分子， 没有序列特异性,酶切位点不定。 如EcoB(大肠杆菌B株)、EcoK(大肠杆菌K株)分子量较大 (约300000)，作用时需ATP、Mg++等辅助因子。 第Ⅱ类酶:能识别一段特异的DNA序列，准确地酶切双 链DNA的特异序列。 如EcoRI(大肠杆菌)、HindⅢ(嗜血杆菌)，分子量较小(约 20000-100000)，作用时需Mg2+存在
第Ⅱ类酶特点 (1)切割产生平末端( blunt ends) 如SmaI 5- CCCGGG一3 3-GGGCCC--5 GGG--3 GGG CCc-5
第Ⅱ类酶特点： (1) 切割产生平末端(blunt ends) 如Sma Ⅰ：