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⎯ 3-2 ⎯
差异表达达和功能演变着手,采用全新技术路线,精巧准确对致病蛋白进行分辨定格 并以此为切入点追逆解译DNA的变异,为病毒感染、病毒蛋白致癌提供确实可靠的依据, 也可为探索其它疾病与致病因素相互关系建立一个新的技术突破口。在以上研究的基础 上,提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”,建立终止HⅤ持续感染状态、保护妇女免受宫 颈癌侵扰的策略及有效方法 参考文獻 1. Chan PK, et al. Determinants of cervical human papillomavirus infection: differences between high- and low-oncogenic risk types J Infect Dis2021;185(1):28-35 2. Schoell W, et al. Epidemiology and biology of cervical cancer. Semin Surg Oncol.1999;16:203-211 3.马丁,奚玲.宫颈癌的流行病学及病因学硏究进展.中国实用妇产科杂志. 2001;23:1-5 4.许雪梅,司静懿等.中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6Eη 基因的分离、克隆和序列分析.中国医学科学院学报.1999;21:185-191 5. Combita AL, et al. Serologic response to human oncogenic papillomavirus types 16, 18, 31, 33, 39, 58 and 59 virus-like particles in colombian women with invasive cervical cancer. Int J Cancer200220;97(6):796-803 6. Hagensee ME, et al. Infection with Human Papillomavirus: Update on Epidemiology, Diagnosis, and Treatment. Curr Infect Dis Rep 2000 2(1):18-24 Reinstein E, et al. Degradation of the e7 human papillomavirus oncoprotein by the ubiquitin-proteasome system: targeting via ubiquitination of the N-terminalresidue Oncogene 2000; 19: 5944-50
⎯ 3-3 ⎯ 差异表达达和功能演变着手，采用全新技术路线，精巧准确对致病蛋白进行分辨定格， 并以此为切入点追逆解译DNA的变异，为病毒感染、病毒蛋白致癌提供确实可靠的依据， 也可为探索其它疾病与致病因素相互关系建立一个新的技术突破口。在以上研究的基础 上，提出针对病毒感染致癌的 “治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫 颈癌侵扰的策略及有效方法。 参 考 文 献 1. Chan PK, et al.Determinants of cervical human papillomavirus infection: differences between high- and low-oncogenic risk types. J Infect Dis 2002 1;185(1):28-35 2. Schoell W, et al. Epidemiology and biology of cervical cancer. Semin Surg Oncol. 1999; 16:203-211 3. 马丁，奚玲. 宫颈癌的流行病学及病因学研究进展. 中国实用妇产科杂志. 2001; 23:1-5 4. 许雪梅, 司静懿等. 中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 16E6E7 基因的分离、克隆和序列分析. 中国医学科学院学报. 1999; 21:185-191 5. Combita AL, et al.Serologic response to human oncogenic papillomavirus types 16, 18, 31, 33, 39, 58 and 59 virus-like particles in colombian women with invasive cervical cancer. Int J Cancer 2002 20;97(6):796-803 6. Hagensee ME, et al. Infection with Human Papillomavirus: Update on Epidemiology, Diagnosis, and Treatment. Curr Infect Dis Rep 2000; 2(1):18-24 7. Reinstein E, et al.Degradation of the E7 human papillomavirus oncoprotein by the ubiquitin-proteasome system: targeting via ubiquitination of the N-terminalresidue Oncogene 2000;19:5944-50
9. Daemen T, et, al. Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94 10. Natale C, Computer-assisted analysis of molecular mimicry between human papillomavirus 16 E7 oncoprotein and human protein sequences. Immunol cell biol 2000: 78: 580-5 ll. Villa ll, et al. Molecular variants of human papillomavirus types 16 and 18 preferentially associated with cervical neoplasia. J Gen Virol2000;8lPt12:2959-68 12. von Knebel Doeberitz M New molecular tools for efficient screening of cervical cancer. Dis Markers 2001: 17(3): 123-8 13. Boyle P, et al. Update on cancer control in women. Int J Gynaecol 0 bstet2000;70(2):263-303 14. Daemen T, et, al. Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-9
⎯ 3-4⎯ 9. Daemen T, et, al.Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94 10.Natale C, Computer-assisted analysis of molecular mimicry between human papillomavirus 16 E7 oncoprotein and human protein sequences. Immunol Cell Biol 2000;78:580-5 11.Villa LL,et al. Molecular variants of human papillomavirus types 16 and 18 preferentially associated with cervical neoplasia. J Gen Virol 2000;81 Pt 12:2959-68 12. von Knebel Doeberitz M.New molecular tools for efficient screening of cervical cancer. Dis Markers 2001;17(3):123-8 13. Boyle P,et al. Update on cancer control in women. Int J Gynaecol Obstet 2000;70(2):263-303 14. Daemen T, et, al.Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94
研究方案 1.研究目标,研究内容拟解决的关键问题 研究目标 1)通过研究HPV感染与宫颈癌发生的内在关系和分子生物学基础,阐明肿瘤发生学中作 为重要外源促发因素的病毒致癌机理。 2)从DNA、RNA和蛋白三个层次全面探索宫颈癌发病机制,特别以病毒致癌蛋白的结构 定格和功能研究作为切入点,逆向求源解译病毒癌基因 3)确定病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标 准 4)提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”,建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈 癌侵扰的策略及有效方法 研究内容 1)从整体水平,筛査宫颈癌高危人群,观察慢性宫颈病变与HV易感状态的时空窗,确 定HPV感染时机、频度、强度的度量关系, 2)从细胞水平,分离建立宫颈正常细胞、易感细胞及宫颈癌细胞株,在体外培养过程对 比观察细胞生物学、细胞形态学的特征 3)从分子水平,采用双向验证法探索宫颈癌发病的分子生物学原理,一方面运用正向追 综手段,即基因芯片差异显示筛出目的基因,进而追综相应蛋白在致病过程中的功能 演变:另一方面采用逆向求源方法,即二维蛋白显示和蛋白芯片确定致病蛋白,反向 逆源找出致病基因,研究要点包括 (1)HPⅤ相关致癌基因的筛查和确定 (2)病毒致癌蛋白功能结构的鉴定 (3)外源病毒转导致癌蛋白产物在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频 度和强度的度量标准 (4)调控网络相关活性因子的变化。 4-1
三 、 研 究 方 案 ⎯ 4-1⎯ 1. 研究目标，研究内容拟解决的关键问题 研 究 目 标 1) 通过研究HPV感染与宫颈癌发生的内在关系和分子生物学基础, 阐明肿瘤发生学中作 为重要外源促发因素的病毒致癌机理。 2) 从DNA、RNA和蛋白三个层次全面探索宫颈癌发病机制，特别以病毒致癌蛋白的结构 定格和功能研究作为切入点，逆向求源解译病毒癌基因。 3) 确定病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标 准。 4) 提出针对病毒感染致癌的 “治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈 癌侵扰的策略及有效方法。 研 究 内 容 1) 从整体水平，筛查宫颈癌高危人群，观察慢性宫颈病变与HPV易感状态的时空窗，确 定HPV感染时机、频度、强度的度量关系。 2) 从细胞水平，分离建立宫颈正常细胞、易感细胞及宫颈癌细胞株,在体外培养过程对 比观察细胞生物学、细胞形态学的特征。 3) 从分子水平，采用双向验证法探索宫颈癌发病的分子生物学原理，一方面运用正向追 综手段，即基因芯片差异显示筛出目的基因，进而追综相应蛋白在致病过程中的功能 演变；另一方面采用逆向求源方法，即二维蛋白显示和蛋白芯片确定致病蛋白，反向 逆源找出致病基因，研究要点包括: (1) HPV相关致癌基因的筛查和确定； (2) 病毒致癌蛋白功能结构的鉴定； (3) 外源病毒转导致癌蛋白产物在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频 度和强度的度量标准； (4) 调控网络相关活性因子的变化
拟解决的关键问题: 1.硏究HPⅤ感染诱发宫颈癌的分子学基础,精确分析病毒致癌蛋白功能结构,运用双 向验证法特别是逆向求源手段准确筛查病毒癌基因DNA片段。 2.探索HPⅤ在宿主细胞的整合方式,细胞内信息或效应因子作用的病理性累积强化效 3.明确病毒DNA不同开放编码的过度表达或缺失对影响病毒复制、激活宿主细胞癌基 因、维持恶性表型的关键所在 4.探讨HPⅤ病毒蛋白在肿瘤恶变进程中与p53、Rb相互结合过程及对细胞生长负调节 功能的影响 5.阐明端粒酶激活及调控与高危型HV感染的相互关系,p53和Rb对端粒酶活性的调节 作用机制 6.以全新微电子蛋白分析手段确定致癌基本元素以及致癌的根本规律,明确病毒诱促 发癌变的触发点,进一步找寻超早期阻断HPV诱发宫颈癌的“时间窗
⎯ 4-2 ⎯ 拟 解 决 的 关 键 问 题 ： 1. 研究HPV感染诱发宫颈癌的分子学基础，精确分 析病毒致癌蛋白功能结构，运用双 向验证法特别是逆向求源手段准确筛查病毒癌基因DNA片段。 2. 探索HPV在宿主细胞的整合方式，细胞内信息或效应因子作用的病理性累积强化效 应。 3. 明确病毒DNA不同开放编码的过度表达或缺失对影响病毒复制、激活宿主细胞癌基 因、维持恶性表型的关键所在。 4. 探讨HPV病毒蛋白在肿瘤恶变进程中与p53、Rb相互结合过程及对细胞生长负调节 功能的影响。 5. 阐明端粒酶激活及调控与高危型HPV感染的相互关系，p53和Rb对端粒酶活性的调节 作用机制。 6. 以全新微电子蛋白分析手段确定致癌基本元素以及致癌的根本规律，明确病毒诱促 发癌变的触发点，进一步找寻超早期阻断HPV诱发宫颈癌的“时间窗