EcoRT 外源DNA PYAC Smal BamHI7 BamHI EcoRI切 EcoRI和BamHI混合切 q-口-a08TmM AATTC CTTAA AAT- 连接 -口口00C CTTAAG CTTAAG 酵母细胞壁 酶 uraf trp+ 酵母人工染色体构建 转化 AB1380(ura- 原生质球 +PEG 赭石突变 Left arm Right arm ori TEL TRP1 CEN4 Insert 红色 URA3 TEL DNA 缺乏尿嘧啶和 色氨酸的培养基上 转化体长出红色菌落
22 SmaI 赭石突变 红色 酵母人工染色体构建
4、 亚基因组文库 >亚基因组文库：相对于基因组文库而言是基因组的某 一区段。主要用于在基因组较小的物种基因克隆或大 基因组物种的后期研究。 >在有杂交探针的情况下，可通过Southern:杂交，先找 出目标基因所在的限制性片段的大小，然后用相应大 小的限制性DNA片段构建出基因文库，这样可减少筛 选的压力。 冠 冠 23
23 4、亚基因组文库 ➢亚基因组文库：相对于基因组文库而言是基因组的某 一区段。主要用于在基因组较小的物种基因克隆或大 基因组物种的后期研究。 ➢在有杂交探针的情况下，可通过Southern杂交，先找 出目标基因所在的限制性片段的大小，然后用相应大 小的限制性DNA片段构建出基因文库，这样可减少筛 选的压力
例如将基因组DNA用多种限制性内切酶切割，通过 心 Southernz杂交 发现目标基因在8.3kb Spel片段上 Spel 则将SpeI切割的基 因组DNA中的 一8.3kb片段回收， 用于构建DNA文库 和喝 是
24 例如 将基因组DNA用多种限制性内切酶切割，通过 Southern杂交 则 将SpeI切割的基 因 组 DNA 中 的 ~8.3kb 片 段 回 收 ， 用于构建DNA文库 发现目标基因在8.3kb SpeI片段上 SpeI
二、基因组DNA文库的质量标准 一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件： 重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力 载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆 克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆 排序 克隆片段易于从载体分子上完整卸下 重组克隆能稳定保存、扩增、筛选 和 25
25 二、基因组DNA文库的质量标准 一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件： ▪ 重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力 ▪ 载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆 ▪ 克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆 排序 ▪ 克隆片段易于从载体分子上完整卸下 ▪ 重组克隆能稳定保存、扩增、筛选
文库的代表性和随机性 代表性：文库中所有克隆所携带的DNA片断可以覆盖整 个基因组的比率。 主要通过以下策略来实现： >部分酶切或随机切割的方法来打断染色体DNA,保证克 隆的随机性。 >增加文库的容量。 26
26 代表性：文库中所有克隆所携带的DNA片断可以覆盖整 个基因组的比率。 主要通过以下策略来实现： ➢部分酶切或随机切割的方法来打断染色体DNA,保证克 隆的随机性。 ➢增加文库的容量。 文库的代表性和随机性