1976年L.Clark,J.Carbon提出了一个完全的基因文库所 需克隆的计算公式 n=In(1-p)/In(1-f) :一个完全基因文库所应包含的重组体克隆数 和p:所期望的目的基因在基因文库中出现的几率 f:插入片段的平均大小与基因组DNA大小的比值 福 超 27
27 1976年L.Clark, J.Carbon提出了一个完全的基因文库所 需克隆的计算公式 n=ln(1-p)/ln(1-f) n: 一个完全基因文库所应包含的重组体克隆数 p: 所期望的目的基因在基因文库中出现的几率 f: 插入片段的平均大小与基因组DNA大小的比值
√哺乳动物3×10kb, √若p=99%平均克隆片段20kb √f=20kb/3×109 n=690773.2 √E.coli 4639221bp 潮 √p=99% 刷 √f=20kb/4600kb √n=1056.9 28
28 ✓哺乳动物 3×109kb, ✓若p=99% 平均克隆片段20kb ✓f=20kb/3×109 ✓n=690773.2 ✓E.coli 4639221bp ✓p=99% ✓f=20kb/4600kb ✓n=1056.9
长大 三、基因组DNA文库构建的程序 ①载体DNA的制备； ②高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取和大片段 的制备； ③高纯度大相对分子质量基因组DNA的部分酶切与脉 冲电泳分级分离； ④载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； 周 ⑤重组克隆的挑选和保存。 武 29
29 三、基因组DNA文库构建的程序 ①载体DNA的制备； ②高纯度大相对分子质量基因组DNA的提取和大片段 的制备； ③高纯度大相对分子质量基因组DNA的部分酶切与脉 冲电泳分级分离； ④载体与外源片段的连接与转化或侵染宿主细胞； ⑤重组克隆的挑选和保存
基因组DNA文库 基因组DNA 限制性内切酶 基因重组 厨 体外包装 园 转化细菌 ○
30 基因组DNA文库 限制性内切酶 基因组DNA 基因重组 转化细菌 体外包装
(一)、载体的制备 载体的选择： a)质粒载体可承载15 kb DNA左右片段（有效的范围 为<10kb) b)入载体可承载25 kb DNA左右片段（有效的范围为15 kb) c)Cosmid载体可承载45 kb DNA左右片段（有效的范 冠 围为<40kb) 圈 31
31 （一）、载体的制备 载体的选择： a）质粒载体可承载15kb DNA左右片段 (有效的范围 为<10kb) b）载体可承载25kb DNA左右片段(有效的范围为15 kb) c）Cosmid 载体可承载45kb DNA左右片段(有效的范 围为<40 kb)