第一节基因组DNA文库的构建 、 基因组DNA文库的类型 根据所选用的载体可以分为： 质粒文库、噬菌体文库、粘粒文库、人工染 色体文库（细菌人工染色体文库、酵母人工染色 程体文库） 冠 12
12 第一节 基因组DNA文库的构建 一、基因组DNA文库的类型 根据所选用的载体可以分为： 质粒文库、噬菌体文库、粘粒文库、人工染 色体文库（细菌人工染色体文库、酵母人工染色 体文库）
长大 1、质粒文库 该法简单、快速、易于操作，但仅适合一些低等 真核生物和原核生物。 ·对真核生物主要在全基因组测序时，将全基因组 分割成小片段。 ·质粒载体的容量一般为10kb左右。 型 园 厨 居 13
13 1、质粒文库 • 该法简单、快速、易于操作，但仅适合一些低等 真核生物和原核生物。 • 对真核生物主要在全基因组测序时，将全基因组 分割成小片段。 • 质粒载体的容量一般为10 kb左右
pBR322 (4.36kb) 总DNA 酶切基因组和质粒 Mbol BamHI 脱磷酸化 载体去磷酸化防自连 「4连接酶 载体与DNA连接 重组DNA 电激转化大肠杆菌 抗性筛选获得重组克隆 转化E.co1i 基因组文库
14 BamHI MboI OH P OH HO 脱磷酸化 重组DNA T4 连接酶 转化E.coli 基因组文库 总DNA HindIII BamHI SalI EcoRI PstI ScaI Tc Amp R R pBR322 (4.36 kb) Ori HindIII EcoRI PstI ScaI Amp R Ori SalI 酶切基因组和质粒 载体去磷酸化防自连 载体与DNA连接 电激转化大肠杆菌 抗性筛选获得重组克隆
2、噬菌体文库 ■利用噬菌体载体或噬菌粒载体进行文库的构 建 ■小基因组克隆时常用λ噬菌体载体。 包 载体容量为15一20kb 冠 15
15 2、噬菌体文库 ▪ 利用噬菌体载体或噬菌粒载体进行文库的构 建 ▪ 小基因组克隆时常用λ噬菌体载体。 ▪ 载体容量为15－20 kb
入噬菌体载体 Bam HI位点 真核基因组DNA cos 左臂 右臂cos 用BamHⅡ消化 cos cos 用限制酶部分逍化DNA； 按大小分级分离待插入 的DNA,以得到约20kb的 内部片段 片段 去除噬菌体复制所 AvvyA 不需要的内部片段 从M M M cos cos 约20kb的片段 用T4噬菌体DNA连接酶进行连接 cos左臂右臂co5M 在体外包装到入噬菌体颗粒中 利用适当的大肠杆菌菌株铺平板
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