3、人工接头连接 人工接头:人工合成含有酶切位点的寡 核苷酸片段
3、人工接头连接 人工接头：人工合成含有酶切位点的寡 核苷酸片段
4、T-A克隆 T- vector两条链的5端含有一个游 离的T PCR过程中,普通的Taq酶可在产 物的3端多加一个A Scal 1810 CcR I mp GEM:了 3018p EsI SP6
4、T-A克隆 • T-vector两条链的5’端含有一个游 离的T • PCR过程中，普通的Taq酶可在产 物的3’端多加一个A
五、基因克隆的工作流程 (-)目的基因的获得 1、直接分离 3、构建cDNA文库 4、PcR 5、人工合成 6、差异显示
五、基因克隆的工作流程 （一）目的基因的获得 1、直接分离 3、构建cDNA文库 4、PCR 5、人工合成 6、差异显示
1、直接分离DNA适用于克隆原核生物 的基因组文库
1、直接分离DNA—适用于克隆原核生物 的基因组文库
2、构建基因组文库,筛选目的基因 基因组文库( gene library):将某 种生物的基因组DNA切割成一定大 小的片段,并与合适的载体重组后 导入宿主细胞,进行克隆。这些存 在于所有重组体内的基因组DNA片 段的集合,即基因组文库,它包含 了该生物的所有基因
2、构建基因组文库，筛选目的基因 • 基因组文库(gene library)：将某 种生物的基因组DNA切割成一定大 小的片段，并与合适的载体重组后 导入宿主细胞，进行克隆。这些存 在于所有重组体内的基因组DNA片 段的集合，即基因组文库，它包含 了该生物的所有基因