二、克隆载体 >复制基因( (replicator) 选择性记号 克隆位点
二、克隆载体 ➢复制基因(replicator) ➢选择性记号 ➢克隆位点
三、受体细胞 1、定义:外源DNA导入的细胞,是 重组体扩增的场所 2、要求:易于接纳外源DNA 无特异的内源性核酸内切酶 载体复制、扩增不受阻 与载体有互补性
三、受体细胞 1、定义：外源DNA导入的细胞，是 重组体扩增的场所。 2、要求：易于接纳外源DNA 无特异的内源性核酸内切酶 载体复制、扩增不受阻 与载体有互补性
四、体外重组的策略 1、粘末端连接 Plasmid EcoR EcoR DNA to be EcoRI EcoRI 1)全同源粘末端连接 DNA is cut with EcoRD °最方便简单 DNA lease 高背景-载体自身环化 Mismatch Recombinant DNA 双向插入 Inserting a DNA Sample into a Plasmid
四、体外重组的策略 1、粘末端连接 1）全同源粘末端连接 • 最方便简单 • 高背景-载体自身环化 • 双向插入
2)定向克隆:使外源基因定向插入到载体 中的克隆策略 粘-粘连接:最有效、最快捷 粘平连接:适用于外源基因仅与载体有 一个相同酶切位点,可将另一末端补平
2）定向克隆：使外源基因定向插入到载体 中的克隆策略 • 粘-粘连接：最有效、最快捷 • 粘-平连接：适用于外源基因仅与载体有 一个相同酶切位点，可将另一末端补平
2、平末端连接 酶切点为平末端或任何两个末端补平 的DNA 效率低,酶用量大
2、平末端连接： • 酶切点为平末端或任何两个末端补平 的DNA • 效率低，酶用量大