上游充通大兽 (2)基因工程技术的发展 SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY ①基因工程的艰难阶段（1972一1976) ②基因工程的逐渐成熟阶段（1977一1980) 1977年：日本首次实现真核基因的原核表达。 ©第一家基因公司Genetech将人脑生长激素基因导入大肠 杆菌，并获得表达。 1978年：板仓(Itakura)等使人生长激素 (191肽)在 大肠杆菌中表达成功； 在大肠杆菌中表达了人胰岛素基因 人工重组DNA体外表达的成功 ③基因工程的迅速发展阶段（1980一)
（2）基因工程技术的发展 ①基因工程的艰难阶段（1972－1976） ②基因工程的逐渐成熟阶段（1977－1980） 1977年 ：日本首次实现真核基因的原核表达。 第一家基因公司 Genetech将人脑生长激素基因导入大肠 杆菌，并获得表达。 1978年：板仓（Itakura）等使人生长激素（191肽）在 大肠杆菌中表达成功； 在大肠杆菌中表达了人胰岛素基因 人工重组DNA体外表达的成功 ③基因工程的迅速发展阶段（1980－）
上游充通大兽 第二节基因工程的一般技术 SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 基因工程两个特征： (1)外源核酸分子在不同的寄主生物中进行繁殖，能够跨越天然物种 屏障，把来自任何一种生物的基因放置到新的生物中，而这种生物 可以与原来生物毫无亲缘关系，这种能力是基因工程的第一个重要 特征。 (2)一种确定的DNA小片段在新的寄主细胞中进行扩增，这样实现很 少量DNA样品“拷贝”出大量的DNA,而且是大量没有污染任何其 它DNA序列的、绝对纯净的DNA分子群体。 三个步骤： 1)从材料中分离或制备目的基因或DNA片段。 2)目的基因或DNA片段与载体连接成重组DNA分子。 ©3)重组DNA分子引入宿主细胞，在其中扩增和表达
第二节 基因工程的一般技术 基因工程两个特征： (1) 外源核酸分子在不同的寄主生物中进行繁殖，能够跨越天然物种 屏障，把来自任何一种生物的基因放置到新的生物中，而这种生物 可以与原来生物毫无亲缘关系，这种能力是基因工程的第一个重要 特征。 (2) 一种确定的DNA小片段在新的寄主细胞中进行扩增，这样实现很 少量DNA样品“拷贝”出大量的DNA，而且是大量没有污染任何其 它DNA序列的、绝对纯净的DNA分子群体。 三个步骤： 1）从材料中分离或制备目的基因或DNA片段。 2）目的基因或DNA片段与载体连接成重组DNA分子。 3）重组DNA分子引入宿主细胞，在其中扩增和表达
上游充通大学 基因工程的基本程序 SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 分一载体和目的基因的分离 發切一限制性内切酶的应用 接一载体与目的基因连接成重组体 醱转一基因序列转入细胞 杂 筛一目的基因序列克隆的筛选和鉴定
基因工程的基本程序 ] 分—载体和目的基因的分离 ] 切—限制性内切酶的应用 ] 接—载体与目的基因连接成重组体 ] 转—基因序列转入细胞 ] 筛—目的基因序列克隆的筛选和鉴定
上游文通大学 基因工程的基本程序 SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 切 接 转 ↓增 检 88
基因工程的基本程序
上游充通大学 一、常用工具酶和基因工程载体简介 SHANGHAI JIAO TONG UNIVERSITY 载体运载外源DNA进入受体细胞，是通过在载体自身 的DNA核酸序列中插入外源DNA,再进入受体细胞内进 行复制，在载体DNA复制时，外源DNA分子也获得了扩 增和表达。 1.常用工具酶 基因工程使用的工具酶具有一个重要特征：每一种酶 都具有自身特定的功能。 有的像“手术刀”，可以进行DNA分子的特定切割； 有的像“粘合剂”，可以促进DNA分子之间的粘合和连 接； 有的像“砌砖机”，可以合成完整的双链DNA分子
一 、常用工具酶和基因工程载体简介 载体运载外源DNA进入受体细胞，是通过在载体自身 的DNA核酸序列中插入外源DNA，再进入受体细胞内进 行复制，在载体DNA复制时，外源DNA分子也获得了扩 增和表达。 1．常用工具酶 基因工程使用的工具酶具有一个重要特征：每一种酶 都具有自身特定的功能。 有的像“手术刀” ，可以进行DNA分子的特定切割； 有的像“粘合剂” ，可以促进DNA分子之间的粘合和连 接； 有的像“砌砖机” ，可以合成完整的双链DNA分子