2.DNA分子标记概述 自从1980年美国学者Botstein发现DNA限制性 酶切片断长度多态性(RFLP)可作为遗传标记以 来，DNA分子技术快速发展，目前已出现几十种 DNA分子标记技术
自从1980年美国学者Botstein 发现DNA限制性 酶切片断长度多态性（RFLP）可作为遗传标记以 来，DNA分子技术快速发展，目前已出现几十种 DNA分子标记技术。 2.DNA分子标记概述
2.1遗传标记类型 2.1.1RFLP标记 RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphisms,RFLP)标记是20世纪80年代初发展 起来的第一代分子标记技术。所谓RFLP是指用限制 性内切酶酶切不同个体基因组DNA后，含同源序列的 酶切片在长度上的差异其差异的检测是利用标记的 同源序列DNA片段作探针（即RFLP标记）进行分子杂 交再通过放射自显影或非同位素技术)实现的
2.1 遗传标记类型 2.1.1 RFLP标记 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms, RFLP) 标记是20世纪80年代初发展 起来的第一代分子标记技术。所谓RFLP是指用限制 性内切酶酶切不同个体基因组DNA后,含同源序列的 酶切片在长度上的差异.其差异的检测是利用标记的 同源序列DNA片段作探针(即RFLP标记)进行分子杂 交,再通过放射自显影(或非同位素技术)实现的
一RFLP的优点主要表现在：第一，共显性遗传，能区 分纯合子和杂合子；第二，标记的数量大；第三，非 常稳定；第四，无表型效应。但同时它也存在一些缺 点，由于RFLP产生的主要原因是碱基突变导致限制 性内切酶识别位点的丢失或获得，所以大多数RFLP 表现为二态性，杂合率低于50%，所提供的信息量 较低，而且RFLP与内切酶的选用密切相关，只有选 用一定的内切酶，某个位点才可能表现出多态性，这 是RFLP存在的主要缺点
RFLP的优点主要表现在：第一，共显性遗传，能区 分纯合子和杂合子；第二，标记的数量大；第三，非 常稳定；第四，无表型效应。但同时它也存在一些缺 点，由于RFLP产生的主要原因是碱基突变导致限制 性内切酶识别位点的丢失或获得，所以大多数RFLP 表现为二态性，杂合率低于50％，所提供的信息量 较低，而且RFLP与内切酶的选用密切相关，只有选 用一定的内切酶，某个位点才可能表现出多态性，这 是RFLP存在的主要缺点
2.1.2RAPD标记 RAPD是1990年由Williams和Welsh几乎同时报 道的一种分子标记技术，其基本原理是：用人工合 成的寡核苷酸（一般106p)为引物，对被测样本 DNA进行扩增引物在基因组中可能有很多结合位点 但只有在约2000bp内存在反向平行的，与该引物互 补的双链DNA分子，才能将合成的新链作为下一次 合成的模，经35~40个循环即可得到大量的DNA 扩增片断，电泳分离，溴化乙锭染色，在紫外灯下 检测
2.1.2 RAPD标记 RAPD是1990年由Williams和Welsh几乎同时报 道的一种分子标记技术，其基本原理是：用人工合 成的寡核苷酸（一般10bp）为引物，对被测样本 DNA进行扩增引物在基因组中可能有很多结合位点， 但只有在约2000bp内存在反向平行的，与该引物互 补的双链DNA分子，才能将合成的新链作为下一次 合成的模板，经35～40个循环即可得到大量的DNA 扩增片断，电泳分离，溴化乙锭染色，在紫外灯下 检测
一RAPD的优点是：第一，不需DNA探针，设计 引物也不需要知道序列信息；第二，操作简单 快捷；第三，成本低。RAPD也存在某些不足， 比如，RAPD难以区分杂合子和纯合子基因型。 另外，RAPD反应易受外界环境影响， 重复性不 太令人满意
RAPD的优点是：第一，不需DNA探针，设计 引物也不需要知道序列信息；第二，操作简单， 快捷；第三，成本低。RAPD也存在某些不足， 比如，RAPD难以区分杂合子和纯合子基因型。 另外，RAPD反应易受外界环境影响，重复性不 太令人满意