1来源主要来源于原核生物 2.性质内切酶 即在核酸分子链的內部制造切口的酶。 形成5P和3-0H末端 3功能自我保护作用 细菌的限制和修饰系统(RM体系) 任何一种生物体都存在防御外界物质进入的机制
2. 性质 内切酶 主要来源于原核生物 即在核酸分子链的内部制造切口的酶。 形成5’-P和3’-OH末端 3. 功能 自我保护作用 细菌的限制和修饰系统(R/M体系) 1. 来源 任何一种生物体都存在防御外界物质进入的机制
寄主的限制与修饰现象 E.0.P成斑率 efficiency of plating phageλ(B) EOP=1 E0P=104(限制作用) 大肠杆菌B →大肠杆菌K E0P=104(限制作用) E0P=1(修饰作用) 修饰的 phageλ(K 人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障碍。即所 谓的寄主控制的限制与修饰现象简称(R/M体系)。细菌的RM体系类 似于免疫系统,能辨别自身的DN与外来的DNA,并能使后者降解掉
大肠杆菌B 大肠杆菌K phage λ (B) EOP=10-4(限制作用) EOP=10-4(限制作用) EOP=1(修饰作用) 修饰的phage λ (K) 人们发现侵染大肠杆菌的噬菌体都存在着一些功能性障碍。即所 谓的寄主控制的限制与修饰现象简称(R/M体系)。 细菌的R/M体系类 似于免疫系统,能辨别自身的DNA与外来的DNA,并能使后者降解掉。 寄主的限制与修饰现象 E.O.P 成斑率 efficiency of plating EOP=1
(1)限制( Restriction) 限制性内切酶将侵入细菌体内的外源DNA进行分 解,切成小片断。 Restrictio anzyme EcoRI Unmethylated 5 □3 DNA 5 Sticky ends 5[G AATTO口3 3 CTTAA G□5 限制作用:实际就是限制性内切酶降解外源DNA, 维护宿主遗传稳定的保护机制
限制性内切酶将侵入细菌体内的外源DNA进行分 解,切成小片断。 (1)限制(Restriction) 限制作用:实际就是限制性内切酶降解外源DNA, 维护宿主遗传稳定的保护机制
(2)修饰( Modification 细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保 护,不能被自身的限制性内切酶识别切割。 ①Dam甲基化酶( DNA Adenine Methy lase) GATG腺嘌呤№6位置引入甲基 ②Dcm甲基化酶( dna cytosine Methy lase) CCAGG或cCTG序列在第二个G上0位置上 引入甲基 修饰作用:宿主细胞通过甲基化作用达到识别自 身遗传物质和外来遗传物质的目的
细菌自身的DNA碱基被甲基化酶甲基化修饰所保 护,不能被自身的限制性内切酶识别切割。 (2)修饰(Modification) ① Dam甲基化酶(DNA Adenine Methylase) GATC 腺嘌呤N6位置引入甲基 ② Dcm甲基化酶(DNA cytosine Methylase) CCAGG或CCTGG序列在第二个C上C 5位置上 引入甲基 修饰作用:宿主细胞通过甲基化作用达到识别自 身遗传物质和外来遗传物质的目的
ECORI methylase Unmethylated 5 aGAAT T CE 3 DNA 3 C T AAG 5 Restriction enzyme ECORI EcoRl will not cleave methy lated DNA Methylated5′ 3 DNA GA C 3 CTTAAG CH