试剂说明 PBS:磷酸盐缓冲液(0.01Mp74) 时闭液:山羊血清(或BSA),用时PBS稀释 抗:小鼠gG,用时PBS稀释 抗:生物素标记的羊抗小鼠IgG 0.3%H2O2-PBS(甲醇) 消除内源性过氧化物酶活性作用 SABC( avidin- biotin- peroxidase complex链酶亲和素 生物素——过氧化物酶复合物): 抗生物素,起到放大作用 DAB( diaminobenzidine)显色液: 3,3′-二氨基联苯胺
试 剂 说 明 ◼ PBS： 磷酸盐缓冲液（ 0.01M pH7.4 ） ◼ 封闭液： 山羊血清(或BSA)，用时PBS稀释 ◼ 一 抗： 小鼠IgG，用时PBS稀释 ◼ 二抗： 生物素标记的羊抗小鼠IgG ◼ 0.3％ H2O2 -PBS（甲醇） 消除内源性过氧化物酶活性作用 ◼ SABC (avidin-biotin-peroxidase complex 链酶亲和素 ——生物素——过氧化物酶复合物) ： 抗生物素，起到放大作用 ◼ DAB(diaminobenzidine)显色液： 3,3´-二氨基联苯胺
实验步骤 ■培养细胞(96孔板,每组3正常、3损伤、3损伤恢复) PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤) ■甲醇固定10min ■PBS洗3次(轻轻地洗涤) 加入封闭液(1:10)25μ,37℃,30mn以上 加一抗(1:300)25μ,37℃,1h以上(或4℃过夜) PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤) 加二抗(1 mI Pbs加入生物素化山羊抗小鼠IgG10) 25{,37℃,1h以上 ■PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤)
实验步骤 ◼ 培养细胞（96孔板，每组3正常、3损伤、3损伤恢复） ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤) ◼ 甲醇固定10min ◼ PBS 洗3次 (轻轻地洗涤) ◼ 加入封闭液（1:10） 25µl，37 ℃，30min以上 ◼ 加一抗（1:300）25µl，37℃，1h以上 (或4℃过夜) ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤) ◼ 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10µl） 25µl，37 ℃，1h以上 ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤)