切口:平端切口、粘端切口 Sma l Bam H I CCCGGG GGATCC GGGCCC CCTAGG CCC GGG G Y GATCC GGG CCC CCTAG 平末端(B| unt end): 粘性末端( Sticky end): 对称轴切割 交错切割
Bam HⅠ CCC GGG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG Sma I CCCGGG GGGCCC GGG + CCC 平末端（Blunt end）： 对称轴切割 粘性末端（Sticky end）： 交错切割 切口：平端切口、粘端切口 16
切割位点和物割片段的末端 平末端 粘性末端:5’粘性末端 3粘性末端 G T C C T G A TT C C TT A (黏性末端) (黏性末端)
17 切割位点和切割片段的末端： 平末端 粘性末端：5’粘性末端 3’粘性末端
如果用一种限制酶。切割两种不同的DNA时 产生相同的末端,混合后“退火》,这两种不同的 DNA分子彼此可以连接,形成重组DNA分子。 制T H EcoRI 品岛 18
如果用一种限制酶，切割两种不同的DNA时， 产生相同的末端，混合后“退火” ，这两种不同的 DNA分子彼此可以连接，形成重组DNA分子。 18
2、DNA连接酶-“分子缝合针 DNA连接酶( DNA Ligase): 催化两条DNA链的3′-0H和5P之间形成磷酸二首键 而把两个DNA分子连接在一起。例如:4DNA连接酶 linear plasmid DNA olecule woth cohesive ends ocular plasmid DNA molecule ATT ■国雷 TTAA TTAA RESTRICTION COVALENT NUCLEASE LINKAGE BY CLEAVAGE DNA LNGASE plasmid DNA molecule DNA insert one of many DNA fragments produced bry cutting chromosomal DNA with the same restriction nuclease 19
2、DNA连接酶------ “分子缝合针” DNA连接酶（DNA Ligase）： 催化两条DNA链的3´-OH和5´-P之间形成磷酸二酯键 而把两个DNA分子连接在一起。例如:T4 DNA连接酶。 19
DNA连接酶(T4DNA1 lease) 基本活性 1)修复双链DNA上单链缺口 2)连接RNA-DNA条交双链上DNA链缺口 3)连接完全断开两个平头双链DNA分子。 反应温度
20 DNA连接酶（T4 DNA ligase）： 基本活性: 1）修复双链DNA上单链缺口 2）连接RNA-DNA杂交双链上DNA链缺口 3）连接完全断开两个平头双链DNA分子。 反应温度：