3、DNA聚合酶( DNA polymerase) DNA聚合酶I 5 3’采合酶活性 3→5外切酶活性 5→3外切酶活性
21 1. DNA聚合酶I： 5’ → 3’聚合酶活性 3’ → 5’外切酶活性 5’ → 3’外切酶活性 3、 DNA聚合酶（DNA polymerase ）
2. Klenow酶 5→3聚合酶活性 3→5”外切酶活性 作用: 1)修复限制性内切酶造成3叫端,成为平末 端。 2)探针DNA的标记 3)催化第二链合成
22 2. Klenow酶 5’ → 3’聚合酶活性 3’ → 5’外切酶活性 作用： 1）修复限制性内切酶造成3’凹端，成为平末 端。 2）探针DNA的标记 3）催化第二链合成 4）测定DNA序列
3 Tag DNA聚合酶: 4.逆转录酶( reverse transcriptase):
23 3. Taq DNA聚合酶： 4. 逆转录酶（reverse transcriptase）：
4、DNA段末端修饰酶: ◆末端脱氧核苷酸转移酶(末端转移酶) (terminal transferase, TdT) )适合于带有3游离羟基的双链分子。 2)DNA双链3’蜡突出时,TdT将脱氧核苷酸聚合在两条 链的3’端。 作用:TdT在人工粘性末端的构建极为有用。 ◆核酸外切酶exoⅠII: ◆碱性磷酸酶( alkaline phosphatase)
24 末端脱氧核苷酸转移酶（末端转移酶） （terminal transferase，TdT）： 1） 适合于带有3’游离羟基的双链分子。 2) DNA双链3’端突出时，TdT将脱氧核苷酸聚合在两条 链的3’端。 作用：TdT在人工粘性末端的构建极为有用。 核酸外切酶exoIII： 碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）： 4、 DNA片段末端修饰酶：
重组DNA实验中常见的主要工具酶 游类 功能 限制性酸内切 识烈并在行定位点切开DNA DNA连接到 过磷酸二酯鏈把两个或刍个DNA片连接威 个DNA分子 DNA合酶I 到3方而加入新的檢苷酸。补平DNA叉链中 的缺口 反转录酶 抉颺RNA分子中的基庯列,据碱基互补原则 合成DNA链 参棱苷酸激诲 把磷酸基閉加到参聚苷酸繽的5OH末鳙 末转移 在奴链酸的3^末鳙加参聚单棱苷瞍 DNA外切游Ⅲ 从DNA链的3末粱个切除单被苷酸 λ噬菌体DNA外切珻从DNA筵的5末猫遝个切除单檢苷酸 性磷酸酯 切除位于DNA5或3末蛐的磷酸基团
重组DNA实验中常见的主要工具酶 25