第二节工具酶 要把外源基因与敢体连接在一起形成重组 DNA分子。最少卿要以下两类工具酶 1、准确切割DNA分子的工具(“分子手术刀”) 限制性内切酶 2、DNA片段的连接工具(“分子縫合针”) DNA连接酶
要把外源基因与载体连接在一起形成重组 DNA分子，最少需要以下两类工具酶： 1、准确切割DNA分子的工具（“分子手术刀”） ------限制性内切酶 2、DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） ------DNA连接酶 第二节 工具酶 11
1、限制性核酸內切酶-“分子手术刀 狠制性核酸内切酶( Restriction Endonuclease,RE): 是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列并将 其勿断的核酸水解酶。 BamH I GGATCC G CCTAGG CCTAG+ GATCC G /12
1、限制性核酸内切酶------ “分子手术刀” 限制性核酸内切酶（Restriction Endonuclease, RE）： 是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列并将 其切断的核酸水解酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + BamHⅠ 12
命名 ECORI E= Escherichia属 co=co种 R=RY13株 l=该菌株第一个被发现的核酸内切酶 分类:l、Ⅲ、Ⅲ(重组DNA技术中常用川型)
13 命名： EcoRI： E＝Escherichia属 co＝coli种 R＝RY13株 I＝该菌株第一个被发现的核酸内切酶 分类: I、II、III（重组DNA技术中常用II型）
限制性核酸内切酶的类烈和主要特征 特性 II型 III型 三种不同的亚基单一的同源二种不同的亚 结构 组成 渠体 基构成 就助因子 Mg2、SAM、 ATP Mg2 Mg、SAM、ATP 分别具有限制一种共同亚基 限制和修饰活性单一的多功能酶 酶和修你酶 的双功能酶 识别序列呈流环形式 星回文结构 星滾环形式 距识别点 切割点 无固鬼 侧约25bp处 切割特点 随机割 特异奶割 异割 甲基化作用位点宿主特异位点宿生特异位点宿主特异仳点 在分子克隆中的 无用 十分有用 冠义不大 用途
14 限制性核酸内切酶的类型和主要特征 特性 I 型 II 型 III 型 结构 三种不同的亚基 组成 单一 的同源二 聚体 两种 不同的亚 基构成 辅助因子 Mg2+、SAM、ATP Mg2+ Mg2+、SAM、ATP 限制和修饰活性 单一的多功能酶 分别 具有限制 酶和修饰酶 一种 共同亚基 的双功能酶 识别序列 呈滚环形式 呈回文结构 呈滚环形式 切割位点 无固定 特异 距识 别位点一 侧约 25bp 处 切割特点 随机切割 特异切割 特异切割 甲基化作用位点 宿主特异位点 宿主特异位点 宿主特异位点 在分子克隆中的 用途 无用 十分有用 意义不大
识别序列 每种限制性内切酶都有一个它所识别、结合并切 割的特异序列,称为制性位点或切点(多为4-6bp)。 识别序列特点回文结构( palindrome) 即反向重复结构 BamH I GGA TCC CCT AGG 15
识别序列特点—— 回文结构(palindrome) 即反向重复结构 每种限制性内切酶都有一个它所识别、结合并切 割的特异序列，称为限制性位点或切点（多为4~6bp）。 识别序列： GGA TCC CCT AGG BamHⅠ 15