大肠杆菌目前仍是基因工程研究中采用最多的原 核表达体系。 优越性: ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景 知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解。 ②有各类菌株和载体系列。 ③目前已实现多种基因的高效表达。表达基因产 物形式多样细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 ④易培养,成本低
大肠杆菌目前仍是基因工程研究中采用最多的原 核表达体系。 优越性: ①对大肠杆菌的基础生物学、分子遗传学等背景 知识和基因表达的调控机理已有了深刻了解。 ②有各类菌株和载体系列。 ③目前已实现多种基因的高效表达。表达基因产 物形式多样:细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内 可溶性表达、细胞周质表达等。 ④易培养,成本低
缺点: ①大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品 多为胞内产物,提取困难。 ②因分泌能力不足,真核蛋白质常形成不 溶性的包含体,表达产物需经变性复性 才恢复活性。 ③蛋白质不能糖基化。产物蛋白质N端多 余一个蛋氨酸残基。 ④其内毒素很难除去
缺点: ①大肠杆菌中的表达不存在信号肽,产品 多为胞内产物,提取困难。 ②因分泌能力不足,真核蛋白质常形成不 溶性的包含体,表达产物需经变性复性 才恢复活性。 ③蛋白质不能糖基化。产物蛋白质N端多 余一个蛋氨酸残基。 ④其内毒素很难除去
酵母 酵母菌是研究基因表达最有效 的单细胞真核微生物。其基因组小 世代时间短,有单倍体双倍体两种 形式,繁殖迅速,无毒性。能外分 泌,产物可糖基化。已有不少真核 基因成功表达
酵母 酵母菌是研究基因表达最有效 的单细胞真核微生物。其基因组小, 世代时间短,有单倍体双倍体两种 形式,繁殖迅速,无毒性。能外分 泌,产物可糖基化。已有不少真核 基因成功表达
基因表达的基本过程 Replication mRNA Translation DNA (protein synthesis) Transcription (RNA synthesis) Protein RNA
基因表达的基本过程
基因表达的基本过程 基因的表达主要涉及到两个过程:转录和翻译。 首先,目的基因通过转录(transcription)形成mRNA(信使 RNA,messenger RNA ) DNA 然后,tRNA(转运 RNA,transfer RNA)将 各种氨基酸运送到核糖 体并按照mRNA的密码 RNA 子顺序将各种氨基酸连 接成特定的氨基酸序列 (translation)最终得到基 因的表达产物(蛋白 质)。 Protein
基因表达的基本过程 基因的表达主要涉及到两个过程:转录和翻译。 首先,目的基因通过转录(transcription)形成mRNA(信使 RNA, messenger RNA ); 然后, tRNA (转运 RNA, transfer RNA)将 各种氨基酸运送到核糖 体并按照mRNA的密码 子顺序将各种氨基酸连 接成特定的氨基酸序列 (translation) 最终得到基 因的表达产物 ( 蛋 白 质)