【计算】100EDTANa溶液消耗量（mL）X0.1X0.25=EDTANa2溶液消耗量（mL）X40钙mg/dlx0.25=钙mmol/L【注意事项】1．钙指示剂种类繁多，不同指示剂所显滴定终点常不同，受血清中其他离子的干扰作用也不，钙红指示剂终点明显，且不受镁离子等干扰，缺点是钙红指示剂有时难以买到。2．滴定所用的刻度吸管应精确，最好用微量滴定管，玻璃器皿应用重蒸水洗涤，干燥而不附着钙质。【正常参考值】见下表3表 3. 血清钙含量(mol /L)丁绵羊动物种类网牛水牛猪山羊平均值或范围3.192.942.432.742.673.032.532.05【临床意义】体内总钙量的 99%以上存在于骨和齿中，其余的钙主要分布在血浆和组织间液中，细胞内钙的含量很少。血浆钙离子除了形成骨盐外，还具有降低毛细血管及细胞膜的通透性和神经肌肉的兴奋性的功能，它参与肌肉收缩、细胞分泌以及凝血过程。另外，钙离子有利于心肌收缩，它和利于心肌舒张的钾离子相拮抗，从而维持心肌的收缩与舒张。1.血钙增高见于如下疾病：（1）甲状旁腺功能亢进：有原发性和继发性两种。继发于伺倭病、软骨病和慢性肾功能衰竭（2）维生素D过多症：血清钙、磷均可增多，钙质沉积于肾脏可发展成肾脏钙化病。（3）多发性骨髓瘤血钙增高：常因球蛋白增高，同钙结合增高。（4）肿瘤广泛骨转移：血钙中度增多，但磷正常或略高，尿中羟脯氨酸排出增多，反映骨质胶原的分解。2.血钙降低血钙减低可引起神经肌肉应激性增强而使手足描摘，可见于下列疾病：（1）甲状旁腺功能减退：甲状腺手术摘除时以及甲状旁腺而引起功能减退，血清钙可下降到1.25~1.50mmo1/L，血清磷可增高到1.62~2.42mmo1/L，假性甲状旁腺功能减退并非缺乏甲状旁腺激素，而是肾脏中缺乏对甲状旁腺激素起反应的腺甘酸环化酶，故引起血清钙降低。（2）慢性肾炎尿毒症：肾小管中维生素D-1羟化酶不足，活性维生素D,不足，使血清总钙下降，由于血浆白蛋白减低使结合钙减低，但代谢性酸中毒而使离子钙增高，所以不易发生手足描揭。（3）缺乏维生素D：使钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低；（4）吸收不良性低血钙：在严重乳糜泻时，因饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出。（5）大量输入柠檬酸盐抗凝血后：可引起低血钙的手足搐。二、血清无机磷含量的测定【方法】硫酸亚铁磷钼蓝比色法【原理】在以三氯醋酸沉淀去除蛋白的血清滤液中加入钼酸铵试剂，使之与磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，将磷钼酸还原成蓝色化合物，在620 nm波长处比色测定吸光值，利15
15 【计算】 EDTANa2 溶液消耗量（mL）×0.1× 0.25 100 =EDTANa2 溶液消耗量（mL）×40 =钙 mg/dl×0.25=钙 mmol/L 【注意事项】 1．钙指示剂种类繁多，不同指示剂所显滴定终点常不同，受血清中其他离子的干扰作用也不 一。钙红指示剂终点明显，且不受镁离子等干扰，缺点是钙红指示剂有时难以买到。 2．滴定所用的刻度吸管应精确，最好用微量滴定管，玻璃器皿应用重蒸水洗涤，干燥而不附 着钙质。 【正常参考值】 见下表 3 表 3. 血清钙含量(mmol/L) 动物种类 马 乳牛 水牛 猪 山羊 绵 羊 狗 猫 平均值或范围 3.19 2.94 2.43 2.74 2.67 3.03 2.53 2.05 【临床意义】 体内总钙量的 99%以上存在于骨和齿中，其余的钙主要分布在血浆和组织间液 中，细胞内钙的含量很少。血浆钙离子除了形成骨盐外，还具有降低毛细血管及细胞膜的通 透性和神经肌肉的兴奋性的功能，它参与肌肉收缩、细胞分泌以及凝血过程。另外，钙离子 有利于心肌收缩，它和利于心肌舒张的钾离子相拮抗，从而维持心肌的收缩与舒张。 1.血钙增高见于如下疾病： （1）甲状旁腺功能亢进：有原发性和继发性两种。继发于佝偻病、软骨病和慢性肾功能衰竭。 （2）维生素 D 过多症：血清钙、磷均可增多，钙质沉积于肾脏可发展成肾脏钙化病。 （3）多发性骨髓瘤血钙增高：常因球蛋白增高，同钙结合增高。 （4）肿瘤广泛骨转移：血钙中度增多，但磷正常或略高，尿中羟脯氨酸排出增多，反映骨质 胶原的分解。 2.血钙降低 血钙减低可引起神经肌肉应激性增强而使手足搐搦，可见于下列疾病： （1）甲状旁腺功能减退：甲状腺手术摘除时以及甲状旁腺而引起功能减退，血清钙可下降到 1.25～1.50mmol/L，血清磷可增高到 1.62～2.42mmol/L，假性甲状旁腺功能减退并非缺乏甲 状旁腺激素，而是肾脏中缺乏对甲状旁腺激素起反应的腺甘酸环化酶，故引起血清钙降低。 （2）慢性肾炎尿毒症：肾小管中维生素 D3-1 羟化酶不足，活性维生素 D3 不足，使血清总钙下 降，由于血浆白蛋白减低使结合钙减低，但代谢性酸中毒而使离子钙增高，所以不易发生手 足搐搦。 （3）缺乏维生素 D：使钙吸收障碍，血清钙、磷均偏低； （4）吸收不良性低血钙：在严重乳糜泻时，因饮食中的钙与不吸收的脂肪酸生成钙皂而排出。 （5）大量输入柠檬酸盐抗凝血后：可引起低血钙的手足搐搦。 二、血清无机磷含量的测定 【方法】 硫酸亚铁磷钼蓝比色法 【原理】 在以三氯醋酸沉淀去除蛋白的血清滤液中加入钼酸铵试剂，使之与磷结合成磷钼酸， 再以硫酸亚铁为还原剂，将磷钼酸还原成蓝色化合物，在 620 nm 波长处比色测定吸光值，利
用经过同样处理的磷标准液的吸光值计算出样品中的无机磷含量。【器材与试剂】1.器材721型分光光度计，比色杯，试管，移液管等2.试剂1）10%三氯醋酸溶液2）磷贮存标液（0.1mg鳞/ml)：称取无水磷酸二氢钾（KH,PO，AR）439mg，用蒸馏水溶解并稀释至1L，再加入氯仿2ml防腐，置冰箱中保存。3）磷应用标准液（0.004mg鳞/ml或0.129mmol/L），取磷贮存标准液4ml加10%三氯醋酸溶液至100ml。4）钼酸铵试剂：在蒸馏水200ml中慢慢加入浓硫酸45ml，再加钼酸铵22g，溶解后保存于试剂瓶中。5）硫酸亚铁一钼酸铵试剂：称取硫酸亚铁（FesS0·7H:0)0.5g，加蒸馏水9ml使溶解，再加钼酸铵试剂1ml，混合，临用前新鲜配制。【操作】吸取血清0.2mL置入10m离心管，加10%三氯醋酸溶液3.8m，充分混匀，放置10min，离心，吸取上清液，按下表4进行操作。表 4. 血清磷测定的操作步骤测定管空白管标准管LmLL血清滤液--2. 01.0磷应用标准液（0.004mg鳞/mL）2. 01. 010%三氯醋酸溶液硫酸亚铁一钼酸铵试剂 2. 0 2.02. 0混匀，放置10-15min，用620nm进行比色，以空白管校正光密度到0点，读取各管吸光度值。【计算】血清无几鳞（mmol/L）=测定管吸光度×0.129/标准管吸光度血清无几鳞（mg/d1）=血清无几鳞（mmol/L）一0.323【注意事项】1．采血时注意，不能有溶血。因红细胞溶血会引起无机鳞含量的升高。2.用三氯醋酸沉淀血清中的蛋白时，一定要缓慢滴加，否则易使蛋白质凝结成块，而将鳞包在蛋白里。【正常参考值】见下表5表 5. 血清无机磷含量(mmo1/L)动物种类T乳牛绵羊水牛1猪山羊雅平均值或范围1.441.5611.742.541. 002. 071.192. 07【临床意义】体内总磷量的80%以上存在于骨和齿中，其余分布在细胞外液和细胞内液，主要以磷酸根的形式参与许多对生命活动非常重要的物质代谢过程，如构成核酸、磷脂、ATP以及许多辅酶，另外磷酸盐在维持体液酸碱平衡方面具有缓冲作用。16
16 用经过同样处理的磷标准液的吸光值计算出样品中的无机磷含量。 【器材与试剂】 1．器材 721 型分光光度计，比色杯，试管，移液管等 2．试剂 1）10%三氯醋酸溶液 2）磷贮存标液（0.1mg 鳞/ml）：称取无水磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）439mg，用蒸馏水溶解并 稀释至 1L，再加入氯仿 2ml 防腐，置冰箱中保存。 3）磷应用标准液（0.004mg 鳞/ml 或 0.129mmol/L），取磷贮存标准液 4ml 加 10%三氯醋酸溶 液至 100ml。 4）钼酸铵试剂：在蒸馏水 200ml 中慢慢加入浓硫酸 45ml，再加钼酸铵 22g，溶解后保存于试 剂瓶中。 5）硫酸亚铁—钼酸铵试剂：称取硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)0.5g，加蒸馏水 9ml 使溶解，再加钼 酸铵试剂 1ml，混合，临用前新鲜配制。 【操作】 吸取血清 0.2 mL 置入 10 mL 离心管，加 10%三氯醋酸溶液 3.8 mL，充分混匀，放 置 10 min，离心，吸取上清液，按下表 4 进行操作。 表 4. 血清磷测定的操作步骤 空白管 标准管 测定管 mL mL mL 血清滤液 — — 2.0 磷应用标准液（0.004 mg 鳞/mL） — 1.0 — 10%三氯醋酸溶液 2.0 1.0 — 硫酸亚铁—钼酸铵试剂 2.0 2.0 2.0 混匀，放置 10-15 min，用 620 nm 进行比色，以空白管校正光密度到 0 点，读取各管吸光度 值。 【计算】 血清无几鳞（mmol/L）=测定管吸光度×0.129/标准管吸光度 血清无几鳞（mg/dl）=血清无几鳞（mmol/L）÷0.323 【注意事项】 1. 采血时注意，不能有溶血。因红细胞溶血会引起无机鳞含量的升高。 2.用三氯醋酸沉淀血清中的蛋白时，一定要缓慢滴加，否则易使蛋白质凝结成块，而将鳞包 在蛋白里。 【正常参考值】见下表 5 表 5.血清无机磷含量(mmol/L) 动物种类 马 乳牛 水牛 猪 山羊 绵 羊 狗 猫 平均值或范围 1.44 1.56 1.74 2.54 1.00 2.07 1.19 2.07 【临床意义】 体内总磷量的 80%以上存在于骨和齿中，其余分布在细胞外液和细胞内液，主 要以磷酸根的形式参与许多对生命活动非常重要的物质代谢过程，如构成核酸、磷脂、ATP 以 及许多辅酶，另外磷酸盐在维持体液酸碱平衡方面具有缓冲作用